免疫室定量項目方法性能驗證標準操作程序

免疫室定量項目方法性能驗證標準操作程序目的對免疫室檢測項目進行性能驗證，以保證所采用的相關試劑盒的分析性能能滿足臨床檢測的要求和實驗室檢測結果的準確性。范圍適應于免疫室開展的所有檢測項目。操作程序驗證前準備儀器設備的準備：根據免疫室儀器設備的維護保養(yǎng)程序,驗證前，實驗人員或請儀器廠家工程師對驗證過程中需要用到的儀器設備進行全面的維護保養(yǎng)，以確保所涉及的儀器設備在最佳運行狀態(tài)。試劑的準備試劑盒的準備：驗證前，確保足夠用于驗證的同批號試劑盒，如可能，可以再適當準備一些另一批號的試劑。室內質控品的準備：按照《免疫室定量項目室內質控管理程序》規(guī)定的室內質控品購買和制備方法進行準備。免疫室定量項目的驗證方法擬驗證參數的確定根據試劑盒說明書或行業(yè)內（如CLIA′88）要求制定擬驗證的性能參數。免疫室定量項目需要驗證的參數包括：精密度（批內、批間精密度）、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍、生物參考區(qū)間、干擾、不同方法和儀器間的比對等。要求檢測過程中采取質量控制措施，盡可能保證檢測系統(tǒng)處于一個穩(wěn)定狀態(tài)。批內精密度實驗標本來源：濃度分別處于正常和病理水平的混合的新鮮臨床標本。步驟：按照臨床標本相同的檢測方法，同批次內檢測相同的20份混合的新鮮臨床標本。記錄結果并計算均值、標準差和批內變異系數CV（%）：表1：批內精密度檢測結果記錄項目：檢測序號檢測結果檢測序號檢測結果1112123134145156167178189191020均值：標準差：批內變異系數CV（%）驗證結果判斷標準檢測的批內變異系數CV(%)≤1/4CLIA’88允許總誤差或生物學變異批間精密度實驗標本來源：濃度分別處于正常和病理水平的室內質控標本。步驟：按照臨床標本相同的檢測方法，將室內質控標本連續(xù)檢測20天。記錄結果，計算均值、標準差和批間精密度CV（%）：表2：批間精密度檢測結果記錄表項目：批次檢測結果批次檢測結果1112123134145156167178189191020均值：標準差：批間變異系數CV（%）：驗證結果判斷標準檢測的批內變異系數CV(%)≤1/3CLIA’88或生物學變異允許總誤差正確度驗證實驗免疫室對參加衛(wèi)生部臨檢中心室間質評涵蓋的項目進行正確度驗證，以衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質評結果為依據，成績在80%以上者即為驗證通過。對未參加衛(wèi)生部臨檢中心室間質評涵蓋的項目進行正確度驗證時，與其他實驗室進行比對(比對實驗室參加過該檢測項目的室間質評，成績滿意)，驗證符合率。線性范圍驗證實驗標本來源：采用本實驗室或其他實驗室常規(guī)檢測標本獲得的高值及低值標本進行。不同濃度樣本制備：取高值和低值樣本各一份，按如下配比:標本1：低濃度樣本；標本2：三份低濃度樣本與一份高濃樣標本混勻；標本3：二份低濃度樣本與二份高濃樣標本混勻；標本4：一份低濃度樣本與三份高濃樣標本混勻；標本5：高濃度樣本。檢測時,按標本1,2,3,4,5,5,4,3,2,1排列，每個標本測量2次,記錄濃度。以理論濃度為縱坐標（Y），實測濃度為橫坐標(X)。由統(tǒng)計學計算出r2和回歸方程式Y=aX+b。表3：線性驗證結果記錄表項目：標本編號第一次檢測結果第二次檢測結果平均結果理論結果12345回歸方程：ar2驗證結果判斷標準r2≥0.95,a在0.97-1.03范圍內，則判斷為線性范圍驗證通過。生物參考區(qū)間驗證實驗選擇年齡、性別等均勻分布,符合建立生物參考區(qū)間的健康體檢者血清標本20份，對不同項目的參考范圍進行驗證。表4：生物參考區(qū)間結果記錄表項目：標本號檢測結果標本號檢測結果1112123134145156167178189191020驗證結果判斷標準小于或等于1份標本結果超出生物參考區(qū)間,即為驗證通過。臨床可報告范圍驗證：本室臨床可報告范圍定義為：實驗室能夠給臨床發(fā)出報告的最大檢測范圍。通常是在線性范圍高值的基礎上外延至最大稀釋度倍數對應的值。標本來源：含本項目濃度接近線性范圍上限的臨床新鮮標本。驗證方案：進行最大稀釋度實驗驗證。實驗操作時，以生理鹽水或蒸餾水為稀釋介質，每個稀釋濃度檢測兩次取平均值與理論值進行比較。表5：臨床可報告范圍記錄表項目：稀釋比例（原液：生理鹽水或蒸餾水）預期值檢測值1檢測值2檢測值均值判斷指標：RR=檢測均值/預期值*100%判斷標準：80%<R<120%結論參考文獻1.葉應嫵，王毓三，申子瑜，主編.全國臨床檢驗操作規(guī)程.第三版，南京:東南大學出版社,2006.2.王治國主編.臨