植物二磷酸核酮糖羧化酶(RuBPCase)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

〔RuBPCase〕酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供爭(zhēng)論使用。 96T檢測(cè)范圍：5U/ml-180U/ml使用目的酶〔RuBPCase〕活性。試驗(yàn)原理RuBPCase水平。用純化的RuBPCase，再與HRP標(biāo)記的RuBPCase-抗原-洗滌后參加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品的RuBPCase呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm〔OD值RuBPCase活性濃度。試劑盒組成1 30倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2 酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品〔320U/ml)0.5ml×1瓶3 酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4 樣品稀釋液6ml×1瓶10說(shuō)明書(shū)1份5 A液6ml×1瓶11封板膜2張6 B液6ml×1瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求。假設(shè)不能馬上進(jìn)展試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避開(kāi)反復(fù)凍融。2、不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶〔HRP〕的活性。操作步驟小試管中進(jìn)展稀釋。160U/ml5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液80U/ml4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl5150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液40U/ml3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl4150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20U/ml2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl3150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10U/ml1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl2150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2、加樣：分別設(shè)空白孔〔空白比照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作一樣、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl〔樣品最終稀釋度為5倍。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。33730min。43030倍稀釋后備用。5、洗滌：留神揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒5次，拍干。650μl，空白孔除外。7、溫育：操作同3。8、洗滌：操作同5。9、顯色：每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，3715分鐘。10、50μl，終止反響〔此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。11、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光值〔OD值。測(cè)15分鐘內(nèi)進(jìn)展。操作程序總結(jié)預(yù)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品→參加預(yù)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反響30分鐘-53730→5AB，3710參加終止液→15OD計(jì)算計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)ODODOD出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。留意事項(xiàng)1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30板開(kāi)封后未用完，半條應(yīng)裝入密封袋中保存。2、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴鍋中加溫助融，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并常常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避開(kāi)試驗(yàn)誤差。一5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推舉使用排槍加樣。4、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做坐標(biāo)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高〔ODOD值數(shù)n倍〕后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最終乘以總稀釋倍數(shù)〔n5。5、封板膜只限一次性使用，以避開(kāi)穿插污染。6、底物請(qǐng)避光保存。7、嚴(yán)格依據(jù)說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)展，試驗(yàn)結(jié)果判定必需以酶標(biāo)