編制說明-蜂蜜中氯霉素和甲硝唑殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法

《蜂蜜中氯霉素和甲硝唑殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法》編制說明來源于北京預防醫(yī)學會，于2023年2月由2023年1月，北京市預防醫(yī)學會發(fā)布了《關于開展2023年團體標準編制工預防控制中心和海淀區(qū)疾病預防控制中心三家單位對蜂蜜中甲硝唑和氯霉素殘留量檢測的相關技術成果進行整理，進行標準立項申報。2023年3月，該項目2023年2月，北京市通州區(qū)疾病預防控制中心、北京市順義區(qū)疾病預防控單位，負責方法技術方案確認、方法驗證、驗證2023年3月至8月標準編制組按照實驗方案，結合本單位實驗室條件，參2023年8月組織北京市順義區(qū)疾病預防控制中心和北京市疾病預防控制中《GB14963-2011食品安全國家標準蜂蜜》中3.5獸藥殘留限量和農藥殘留限量中規(guī)定獸藥殘留限量獸藥殘留限量應符合相關標準的規(guī)定。《GB31650-2019食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量》規(guī)定甲硝唑允許做治療用，但不現(xiàn)行國家標準和公告中已有蜂蜜中氯霉素殘留測定的液相色譜-串聯(lián)質譜法和氣相色譜質譜法（GB/T20744-2006，農業(yè)部781號公告-10-2006，GB/T物檢測的液相色譜-串聯(lián)質譜法（GB/T20744-2006但關于同時檢測蜂蜜中甲的甲硝唑和氯霉素殘留量同時測定的液相色譜-串聯(lián)質譜法。為蜂蜜中甲硝本項目申報的是適用于蜂蜜中甲硝唑和氯霉素殘留量同時測定的液相色譜三、標準編制的原則和依據接軌，注重標準的可操作性。本標準依據《GB/T1.1-2020標準準確可靠，滿足各項方法特性指標的要求；方規(guī)和標準方法，確定了通過式固相萃取進行樣品前處理，液相色譜-串聯(lián)質譜進行分析檢測的技術路線。本項目適用于蜂蜜本標準的主要技術路線包括樣品前處理條件的優(yōu)化和液相色譜分離條件和超聲提取30min。上清液過C18和NH2復合小柱進行凈化，濾過液濃縮定容，在優(yōu)化的液相色譜-串聯(lián)質譜條件下上機測定。保留時間和離子對定性，內標法五、主要試驗（或驗證）的分析、綜述報告建立液相色譜-串聯(lián)質譜法檢測蜂蜜中甲硝唑和氯霉素殘留量的樣品前處理試樣經乙腈提取、通過式固相萃取凈化，液相色譜-串聯(lián)質譜檢測，保留時在現(xiàn)行有關氯霉素的色譜-質譜檢測標準中，提取溶劑多采用乙酸乙酯進行酸乙酯提取蜂蜜中甲硝唑、洛硝噠唑、二甲譜分析檢測的樣品前處理和分析檢測中得到了廣泛的應用。團體標準方標準DB12/T987—2020《鮮、凍畜禽肉中磺胺類、喹諾酮類和四環(huán)素類獸藥取方式包括振蕩器震蕩、高速渦旋混合等提取方式，時間為5-20min。T/SDAA取方式，并考察了10min和30min的超聲時間對樣品提取的影響。結果表明，超聲10min和30min時，甲硝唑和氯霉素的響應基本一致。為保證充分提取，在本方法中選擇C18和NH2復合小柱，采用通過式固相萃取的方式進行樣樣、洗脫、濃縮等操作相比，操作簡單，尤其適用初始955.00.5955.03.004.005.0955.0（1）電離方式：電噴霧電離，正離子模式（ESI+）。（2）毛細管電壓：3KV。（3）離子源溫度：500℃。（4）脫溶劑氣流量：1000L/Hr。（5）錐孔反吹氣流量：150L/Hr。（6）霧化器壓力：7bar。（7）檢測方式：多反應監(jiān)測模式（MRM），離子對、錐孔電壓、碰撞電壓見表2。5.4.3氯霉素質譜參考條件（1）電離方式：電噴霧電離，負離子模式（ESI-）。（2）毛細管電壓：2.8KV。（3）離子源溫度：500℃。（4）脫溶劑氣流量：1000L/Hr。（5）錐孔反吹氣流量：150L/Hr。（6）霧化器壓力：7bar。（7）檢測方式：多反應監(jiān)測模式（MRM），離子對、錐孔電壓、碰撞電壓見表2。在優(yōu)化合物模式母離子（m/z）子離子（m/z）錐孔電壓（v）碰撞電壓（v）氯霉素ES-321.0152.0*4020321.0257.040氯霉素-D5326.1157.0*4020326.1262.140ES+82.1202020甲硝唑-D482.1202020甲硝唑和氯霉素在0.1~50μg/L范圍內，線性方程分別為：y=0.5674x-0.4324和y=0.7594x+0.2465，線性相關系數分別為0.994和0.999，線性良好。取樣量按5.00g計算，以定甲硝唑和氯霉素的檢出限均為0.30μg/kg。度水平進行加標實驗，計算加標回收率和相對標準偏差（RSD結果見表3。驗證參數，滿足《GB/T27404-2008實驗室質量控制規(guī)范食品理化檢測》中檢圖1a標準溶液中甲硝唑和甲硝唑-D4的提取離子流色譜圖（EIC）標準標準溶液中氯霉素和氯霉素-D5的提取離子流色譜圖（EIC）圖1標準溶液中甲硝唑和氯霉素及其內標的提取離子流色譜圖（EIC）化合物名稱本底值(μg/kg)加標量(μg/kg)回收率范圍（%）平均回收率%)RSD（%）<0.10.383.5~100.992.56.20.671.0~98.586.56.95.073.7~94.980.34.7氯霉素<0.10.393.3~118.07.50.678.9~112.98.05.093.7~118.85.7表4定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度（%）>10～20>20～50>50允許相對偏差（%）±50±30±25±20結果按式（1）計算：?=式中：X——樣品中目標物含量，單位為μg/kg；C——進樣溶液中目標物按照內標法在標準曲線中對應的濃度，單位為μg/L；V?——提取液體積，單位為mL；V?——用于凈化的樣品體積，單位為mL；V?——定容體積，單位為mL；?ttt——換算系數；m——試樣的稱樣量，單位為g。標準物質名稱：蜂蜜中甲硝唑殘留分析標準物質；來源：中國農業(yè)科學院農個月（定值日期：2022年9月批號568202209標準值13.7±1.7(μg/kg）稱樣量（g）測定值(μg/kg）平均值(μg/kg）Rc（%）標準值(μg/kg）判定2.522.213.213.7±1.7在控5.8.2參考樣加標實驗：按照本方法確定的樣品制備條件和分析條件進行參考樣表6質控樣加標回收實驗結果化合物稱樣量（g）本底值(μg/kg)加標量(μg/kg)測定值(μg/kg)回收率（%）2.5023.485.423.886.9氯霉素2.50<0.1北京市疾病預防控制中心、北京市順義區(qū)疾病預防控制中心對本方法進行了協(xié)同驗證。驗證內容包括：標準曲線、準確度、精密表7給出了兩家單位驗證的標準曲線線性結果。在本檢驗方法所確定的實驗條件下，取一系列標準溶液以內標法做工作曲線，R都大于0.99，表明甲硝表7標準曲線驗證結果化合物驗證單位1驗證單位2線性方程線性范圍(μg/L）相關系數r線性方程線性范圍(μg/L）相關系數ry=0.5465x-0.00700.9998y=0.5481x+0.00190.9998氯霉素y=0.3624x-0.00780.9995y=1.1138x+0.01580.9999標回收實驗中采用空白蜂蜜樣品，在0.30μg/kg、0.60μg/kg和5.0μg/kg低、中、高三個不同濃度加標水平進行了驗證，具體結果見表8；相對標準偏差（RSD）均小表8樣品的回收率及相對標準偏差化合物加標水平(μg/kg）驗證單位1驗證單位2平均回收率（%）RSD（%）平均回收率(%)RSD(%)0.302.03.60.6096.93.999.33.65.095.50.7氯霉素0.3092.28.596.14.10.6085.92.493.55.087.23.899.8