生物工程下游技術復習題及解答

.名詞解說連續(xù)培育反響器：不停地往反響器中加入營養(yǎng)物，利用罐中的菌體增殖獲得產(chǎn)物，其實不停采出。在優(yōu)秀的控制下，罐內(nèi)菌體的增殖速度能夠與采出速度同樣而達到穩(wěn)態(tài)。菌體比生長速率（μ）：單位濃度菌體在必定條件下惹起的反響速率,其值反應了培育菌體增添的能力,受菌株及各樣物理化學環(huán)境的影響.表示為μ=dx/x.dt得率系數(shù)：兩種物質(zhì)得失之間的計量比。Yx/s,Yp/s貼壁培育:貼壁依靠性細胞在培育中要貼附于壁上才能快速鋪展,開始有絲分裂并快速進入對數(shù)生長久,這類培育方式就叫貼壁培育.多半動物細胞的培育都采納這類方式.蛋白質(zhì)的復性：包含體蛋白質(zhì)溶解于變性劑溶液中，呈變性狀態(tài)，所有的氫鍵、疏水鍵所有被損壞，疏水側(cè)鏈完整裸露，但一級構(gòu)造和共價鍵不被損壞，當除掉變性劑后，一部分蛋白質(zhì)能夠自動折疊成擁有活性的正確構(gòu)型，這一折疊過程稱為蛋白質(zhì)復性。濃差極化：指在分別過程中，料液中的溶劑在壓力驅(qū)動下透過膜，溶質(zhì)被截留，于是在膜表面與鄰近膜面地區(qū)濃度愈來愈高。在濃度梯度作用下，溶質(zhì)由膜面向本體溶液擴散，形成界限層，使流體阻力與局部浸透壓增添，進而致使溶劑透過度降落。溶劑向膜面流動惹起溶質(zhì)向膜面的流動，這類流動假如與濃度梯度所驅(qū)動的溶質(zhì)向本體溶液擴散的速度均衡時，在膜面鄰近就形成一個穩(wěn)固的濃度梯度區(qū)，這一地區(qū)就稱為濃度極化界限層，這一現(xiàn)象稱為濃差極化。濃差極化是一個教育資料.可逆的過程；膜污染：物猜中的微粒、膠體粒子或溶質(zhì)大分子因為與膜存在物理化學互相作用或機械作用而惹起的在膜表面或膜孔內(nèi)吸、堆積造成膜孔徑變小或擁塞，使膜產(chǎn)生透過流量與分別特征的不行逆變化的現(xiàn)象。排阻色譜又稱凝膠色譜或凝膠浸透色譜，是利用被分別物質(zhì)分子量大小的不一樣和在填料上浸透程度的不一樣，以使組分分別。常用的填料有分子篩、葡聚糖凝膠、微孔聚合物、微孔硅膠或玻璃珠等，可依據(jù)載體和試樣的性質(zhì)，采納水或有機溶劑為流動相。分派色譜是利用溶液中被分別物質(zhì)在兩相中分派系數(shù)不一樣，以使組分分別。此中一相為液體，涂布或使之鍵合在固體載體上，稱固定相；另一相為液體或氣體，稱流動相。常用的載體有硅膠、硅藻土、硅鎂型吸附劑與纖維素粉等。有效柱長（有效遷徙距離，Leff）：(不一樣溶質(zhì)在其遷徙速度大于零，但小于流動相的線性流速時，溶質(zhì)在色譜柱上的遷徙對分別有貢獻，溶質(zhì)遷徙所經(jīng)歷的柱長也對分別有貢獻，而當其遷徙速度等于流動相速度時，溶質(zhì)遷徙所經(jīng)歷的柱長對分別無貢獻。)溶質(zhì)從開始遷徙至其遷徙速度等于流動相速度時，溶質(zhì)在色譜柱上遷徙的距離稱為有效遷徙距離，也稱為有效柱長。吸附等溫線：指在必定溫度下物質(zhì)分子在兩相界面長進行的吸附過程達到均衡時它們在兩相中濃度之間的關系。切向流過濾（錯流過濾、交錯流過濾、十字過濾）：就是一種保持恒壓下高過濾速度的技術，其原理就是：使懸浮液在過濾介質(zhì)表面作切教育資料.向流動，利用液體的剪切作用將介質(zhì)表面的固體移走，當移走固體與固體堆積速率同樣時，過濾速度就保持恒定，控制不一樣的切向流速度就能夠獲得不一樣的過濾速度。（實質(zhì)是保持了Ｒc).當前幾乎所有的膜固液分別都采納切向流方式包含體（海涵體，inclusionbodies):存在于基因工程細胞中，主要由蛋白質(zhì)構(gòu)成，此中大多半是克隆表達的產(chǎn)物，這些產(chǎn)物在一級構(gòu)造上是正確的，但在立體構(gòu)造上倒是錯誤的，所以沒有生物學活性。難溶于水，只有在變性劑溶液中才能溶解。蛋白質(zhì)的復性：包含體蛋白質(zhì)溶解于變性劑溶液中，呈變性狀態(tài)，所有的氫鍵、疏水鍵所有被損壞，疏水側(cè)鏈完整裸露，但一級構(gòu)造和共價鍵不被損壞，當除掉變性劑后，一部分蛋白質(zhì)能夠自動折疊成擁有活性的正確構(gòu)型，這一折疊過程稱為蛋白質(zhì)復性。（重復）切向流過濾（錯流過濾、交錯流過濾、十字過濾）：就是一種保持恒壓下高過濾速度的技術，其原理就是：使懸浮液在過濾介質(zhì)表面作切向流動，利用液體的剪切作用將介質(zhì)表面的固體移走，當移走固體與固體堆積速率同樣時，過濾速度就保持恒定，控制不一樣的切向流速度就能夠獲得不一樣的過濾速度。（重復）雙水相萃?。豪帽惶崛∥镌诙嘀械姆峙刹灰粯佣鴮崿F(xiàn)分其余目的；因為蛋白質(zhì)在有機相中簡單失活，所以采納的二相均為親水相，如PEG/葡聚糖、ＰＥＧ／無機鹽等，稱為雙水相，兩相密度不一樣，輕相富含一種高分子，重相可能富含另一高分子，細胞碎片和蛋白質(zhì)在二相間的分派系數(shù)不一樣，進而實現(xiàn)分其余目的。教育資料.反浸透：在高于溶液浸透壓的壓力作用下，只有溶液中的水透過膜，而所有溶液中的大分子、小分子有機物及無機鹽全被截留。理想的反浸透膜應被以為是無孔的，它分其余原理是溶解擴散（或毛細孔流學說）。分派系數(shù)：組分在固定相和流動相間發(fā)生的吸附、脫附，或溶解、揮發(fā)的過程叫做分派過程。在必定溫度下，組分在兩相間分派達到均衡時的濃度（單位：g/mL）比，稱為分派系數(shù)，用K表示色譜曲線基線：無試樣經(jīng)過檢測器時，檢測到的信號即為基線。保存值：保存時間（tR）：組分從進樣到柱后出現(xiàn)濃度極大值時所需的時間。死時間（tM）：不與固定相作用的氣體（如空氣）的保存時間。調(diào)整保存時間（tR＇）：tR＇=tR－tM容量因子k：均衡時，組分在各相中總的質(zhì)量比離子互換色譜：組分在固定相上發(fā)生的頻頻離子互換反響；組分與離子互換劑之間親和力的大小與離子半徑、電荷、存在形式等相關。排阻色譜：按分子大小分別。小分子能夠擴散到凝膠縫隙，由此中經(jīng)過，出峰最慢；中平分子只好經(jīng)過部分凝膠縫隙，中速經(jīng)過；而大分子被排擠在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。（重復）親和色譜：利用生物大分子和固定相表面存在的某種特異性親和力，進行選擇性分別。親水性固定液常采納疏水性流動相，即流動相的極性小于固定相的極性，稱為正相液液色譜法，極性柱也稱正相柱。教育資料.若流動相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液液色譜，非極性柱也稱為反相柱。非線性色譜:Cm與Cs不存在線性關系的色譜.吸附等溫線：指在必定溫度下物質(zhì)分子在兩相界面長進行的吸附過程達到均衡時它們在兩相中濃度之間的關系。（重復）全互換容量:每克干介質(zhì)或每毫升濕介質(zhì)擁有的功能基含量.是一個定值.工作容量:每克干介質(zhì)或每毫升濕介質(zhì)在必定的操作條件下的互換吸附蛋白質(zhì)的實質(zhì)容量.是一個變值.疏水性色譜:填料表面擁有弱疏水性,蛋白質(zhì)的疏水基團與填料表面之間產(chǎn)生弱的疏水性互相作用.高濃度的鹽條件下,蛋白質(zhì)與疏水固定相的吸附能力高,跟著鹽濃度的降落,吸附能力降落.當淋洗液離子強度漸漸降低時,蛋白質(zhì)樣品按其疏水性的不一樣挨次被洗脫.采納徑向流技術的色譜,即樣品和流動相沿徑向流動,能夠從色譜柱的四周流向圓心,也能夠從圓心流向柱的四周.往常采納從柱的四周流向圓心的方式.泳動度(遷徙率):帶電質(zhì)點在單位強度電場下的泳動速度即:U=V/E=(d/t)/(V/L)變性膠：膠電脈在蛋白質(zhì)變性的狀態(tài)下進行，主要指SDS變性條件下進生非變性膠：電泳在蛋白質(zhì)保持天然狀態(tài)下進行，不加變性劑高壓均漿法：高壓泵將電機的旋轉(zhuǎn)運動轉(zhuǎn)變?yōu)閯驖{閥柱桿的直線運教育資料.動，從高壓室（幾十兆帕）壓出細胞懸浮液，經(jīng)過碰撞環(huán)的撞擊后改變方向從出口管噴出，使細胞經(jīng)歷較高的流速下的剪切碰撞發(fā)生較大的變形，進而達到破裂細胞的目的。二、填空題超聲波破裂細胞的效率與聲頻、聲能、辦理時間、細胞濃度及細胞種類等要素相關。當前用于固液分其余膜過濾法主要有以下三種:微孔過濾(微濾)、超濾、反浸透。在生物工程下游技術領域，色譜和電泳是當前所知最好的兩種分別蛋白的方法。在生物物質(zhì)分別中，能夠依照一次進樣量多少，將色譜分為：剖析色譜、半制備色譜（中等規(guī)模制備色譜）、制備色譜和工業(yè)生產(chǎn)規(guī)模色譜4大類。不論是什么種類的液相或氣相色譜,其色譜裝置均應包含:流動相供應、進樣、色譜柱、檢測器等四大多半。在色譜過程中，有兩種將目標產(chǎn)品從色譜柱上洗脫下來的方法：一種是保持流動相熱力學參數(shù)不變的等梯度洗脫法，另一種叫梯度洗脫法。徑向色譜填料主要有：離子互換樹脂和親和色譜填料兩種。評論HPLC色譜填料性能的主要表征指標包含：保存值，選擇性，柱效率，填補柱的總縫隙度和穿透性，分別度。請列舉隨意四種破裂細胞的方法：教育資料.高壓勻漿法，高速珠磨法，超聲破裂，酶溶法。在HPLC領域內(nèi)常常能夠碰到的吸附等溫線能夠有以下5種（形狀）:凸形、凹形、S形、H形、階梯形羥基磷灰石在原理上一般被以為是一種無機基質(zhì)高效色譜。請列舉二種丈量蛋白質(zhì)含量的方法：雙縮脲法，考馬斯藍法。常有的無機色譜填料主要包含：多孔硅膠、可控孔徑玻璃、氧化鋁、氧化鈦、羥基磷灰石以及碳和石墨等基質(zhì)。無機HPLC填料最常有的是以多孔大硅膠為基本資料的填料；含硼的Na2O-B2O3-SiO2系玻璃經(jīng)過熱辦理惹起相分別，生成可溶于酸的相及不溶于酸的高硅相。將酸可溶相浸析出來后剩下的另一相就制成了可控孔徑玻璃，可控孔徑玻璃的主要化學成份就是SiO2。(每空1分)不一樣分子量的蛋白質(zhì)在電場中的遷徙速度與其所帶的凈電荷數(shù)成正比，與它自己的半徑及溶液的黏度成反比。溶質(zhì)保存置換理論的核心是：。18．指出三種交聯(lián)葡聚糖的微載體：Cytodex1微載體；Cytodex2微載體；Cytodex3微載體19．指出蛋白質(zhì)復性的三種方法：稀釋法，透析法，液色色譜法等20．固液分其余主要方式包含：離心法，微孔膜過濾法，雙水相萃取，泡沫分別法。教育資料.21．膜的孔徑一般為微米級，依照其孔徑的不一樣（或稱為截留分子量），可將膜分為微濾膜、超濾膜、納濾膜和反浸透膜色譜的保存值能夠用保存時間也能夠用保存體積來表示。23．色譜的峰寬能夠用半峰寬、峰底寬、標準誤差表示。24．指出以下狀況下色譜系統(tǒng)對容質(zhì)的柱效和分派系統(tǒng)差的關系：①柱效較高，△K(分派系數(shù))較大,完整分別；②△K不是很大，柱效較高，峰較窄，基本上完整分別；③柱效較低，，△K較大,但分其余不好；④△K小，柱效低，分別成效更差。25．線性色譜的吸附等溫線是直線，非線性色譜的吸附等溫線的形狀常有的有：凸形、凹形、S形、H形、階梯形。從吸附等溫線的形狀能夠預示色譜曲線的形狀，一般凸形的吸附等溫線代表色譜圖是拖尾的，凹形吸附等溫線代表的色譜圖是吐舌頭形狀、S形的色譜圖是波浪形的。26．ShepadexG25是一種凝膠排阻色譜，主要用于脫鹽。27．ShephadexG100是一種凝膠排阻色譜，主要用于蛋白質(zhì)的純化。教育資料.28．DEAE-ShaphdexA25是一種離子互換層析介質(zhì)。29．CM-纖維素是一種弱陽離子互換介質(zhì)。30．離子互換層析一般是經(jīng)過梯度一般采納兩種方法達到分別蛋白質(zhì)的目的。一種是增添洗脫液的離子強度，一種是改變洗脫液的pH值。31．QAE-葡聚糖是強堿陰離子互換劑，SP—是強酸陽離子互換劑。32．當前徑向色譜柱使用的填料主要有離子互換樹脂和親和色譜兩種;33．蛋白質(zhì)含量和純度測定方法。含量測定:克氏定氮法，TCA比濁度法、雙縮脲法、福林-酚法和紫外線法，考馬斯蘭法（Bradford法）。純度權衡:電泳法，層析法，質(zhì)譜法等。一般應采納二種以上方法，并且同一原理的方法不該當采納二次。34．細胞破裂法包含：機械力和非機械力破裂方法；機械方式又包含：液體剪切力和固體剪切力方法，液體剪切力包含：高壓勻漿法和超聲破裂法；固體剪切力包含：高速珠磨法和壓迫法。35．高壓勻漿法的主要困難包含：溫控和擁塞問題26．高壓勻漿法的破裂率決定于：勻漿閥的構(gòu)造，操作壓力，破裂次數(shù)。34．蛋白質(zhì)的分子量測定：超離心法、光散射方法、凝膠過濾法、SDS-PAG、電泳法。教育資料.三、是非題（請將答案填在下表中相應的題號下邊，對的打“√”，錯的打“×”，每題1分，共10分）題號答案微波加熱法破裂細胞特別適合于對熱不穩(wěn)固的的產(chǎn)物的提取?！聊z過濾操作中，往常上樣量越小，分辨率越高?！晾靡合嗌V方法對包含體蛋白質(zhì)進行復性比稀釋復性法優(yōu)勝.∨一旦液料開始與膜接觸，膜污染就開始發(fā)生?！艥獠顦O化是一個可逆的過程?！拍の廴臼且粋€可逆的過程?！翆游鱿到y(tǒng)中,有效柱長>最短柱長是使最難分其余一對溶質(zhì)將達到完整的基線分其余必需條件.∨層析系統(tǒng)中,當實質(zhì)柱長<最短柱長,則該分別過程不可以達到物質(zhì)的有效分別.∨層析過程中,有效柱長是隨層析條件的變化而變化的.∨層析過程中,能夠經(jīng)過改變洗脫劑的濃度變化梯度改變有效柱長和最短柱長.∨剖析色譜是線性色譜；∨制備型色譜是非線性色譜。∨教育資料.只需樣品進樣量足夠大，色譜過程就是一種非線性色譜?！欧蔷€性色譜的保存值是可變的，峰形是不對稱的，峰高與樣品量不行正比關系?！派秒x子互換樹脂的電荷密度越大，其分別成效越好?！罤PLC填料的顆粒粒度的散布應當是越小越好的，最好是能實現(xiàn)顆粒的單分別?！艠悠分械鞍踪|(zhì)的純度為99%，說明該樣品中目標蛋白質(zhì)的含量為樣品總量的99%?！翆嶒炇夷軌蚴褂肧DS電泳丈量蛋白質(zhì)的分子量。∨所有的蛋白質(zhì)電泳都是利用不一樣蛋白質(zhì)帶的電荷的差異而達到分別不一樣蛋白質(zhì)目的的?！凉枘z在pH1~14的范圍內(nèi)都很穩(wěn)固，所以適合于在極端pH條件下的離子互換色譜。葡聚糖凝膠排阻色譜中，上樣量越大，分辨率越高?！镣坏鞍踪|(zhì)在不一樣種類的緩沖液中，只需緩沖液的pH值同樣，則蛋白質(zhì)所帶的電荷數(shù)目也同樣?！聊z排阻色譜的層析柱越長越好。×細胞破裂過程應盡量完全，使細胞碎片盡可能越小越好?！罤PLC填料的顆粒分別范圍越窄越好。∨利用聚賴氨酸/海藻酸系統(tǒng)進行的細胞微囊化培育，所形成的微囊外膜的孔徑的大小主假如由聚賴氨酸的分子量所決定的。∨非線性色譜的樣品的保存值是可變的?！沤逃Y料.非線性色譜的層析峰形一般來說是高斯正態(tài)散布的對稱峰?！翞榱藴p小樣品在洗脫過程的軸向擴散，可采納增大進樣濃度減少進樣量的方式?！艅游锛毎嘤囟ㄒ杉{貼壁培育的方式?！磷鳛閯游锛毎嘤膬?yōu)秀微載體應當是剛性的?！羷游锛毎嘤⒋黧w的密度應略大于培育基?！粮咚僦槟シū雀邏簞驖{法破裂細胞的成效好?！烈话阒v，親水性膜及膜資料電荷與溶質(zhì)同樣的膜較耐污染?！派V過程中試樣中的各組分擁有不一樣的K值是分其余基礎?！派V過程必定溫度下，組分的分派系數(shù)K越大，出峰越慢?！艈挝恢L的塔板數(shù)越多，表示柱效越高?！庞貌灰粯游镔|(zhì)計算可獲得不一樣的理論塔板數(shù)。∨色譜柱效高說明該色譜對物質(zhì)的分別度高。分別度是由色譜柱的柱效所決定的?！练謩e度是由色譜柱的分派系數(shù)所決定的。×分別度是由色譜的容量因子所決定的?！练謩e度由色譜柱的柱效率和物質(zhì)間的分派系數(shù)的差異共同決定?！牌饰錾V是線性色譜;制備色譜屬于非線性色譜?！旁谀z排阻層析中，流動相的速度越慢越有益于色譜分別和剖析?！艧o機高效液相色譜填料主假如以多孔硅膠為基本資料,還有可控孔徑玻璃,氧化鋁,氧化鋯,羥基磷灰石,碳和石墨等。∨兩性的生物大分子所帶電荷的性質(zhì)和數(shù)目由其等電點及溶液環(huán)境(pH教育資料.值)所決定?！啪郾０窛饪s膠的原理包含其pH值=6.9為甘氨酸的等電點。SDS電泳的遷徙率主要由分子量決定，分子量小的挪動快?！臩DS中SDS的作用是除去蛋白質(zhì)間的電荷差異，也除去了分子間形狀的差異。∨樣品溶解不好簡單造成拖尾?！臡onod常數(shù)隨菌體的濃度的變化而變化。×Monod常數(shù)是細胞培育過程中的一個對菌體性質(zhì)的特色性常數(shù)。×色譜柱效可從峰寬獲得，色譜峰越寬，柱效越低，峰寬同樣，柱效同樣?！翛Q定柱效的要素是分派系數(shù)?！翛Q定柱效的要素是容量因子。×理論塔板數(shù)越多，柱效越高。能夠說“A柱子的柱效高于B柱子?！练峙上禂?shù)與柱效沒相關系?！寥萘恳蜃优c柱效相關系?！胖Р豢梢员硎颈环謩e組分的實質(zhì)分別成效。∨用有效塔板數(shù)和有效塔板高度作為權衡柱效能的指標時，應指明測定物質(zhì)?！艈栴}增補：生物反響器就是細胞生長的場所?！涟l(fā)酵反響器設計要求有盡量高的傳氧系數(shù)?！沤逃Y料.生物放大器的常用控制方法是反應調(diào)理?！旁趧游锛毎嘤校宀粏斡猩L促使作用，并且有生長克制的活力?！艅游锛毎嘤筒僮鞫?，深層培育可分為批式、流加式，半連續(xù)式、連續(xù)式和灌輸式5種?！偶毎L的最優(yōu)化條件其實不必定是表達的產(chǎn)物的最優(yōu)化條件?！欧峙讲僮髂苁辜毎麖念^至尾處于最優(yōu)條件下。×放大的目的是在更大的規(guī)模重現(xiàn)某個過程并實現(xiàn)預期的實驗結(jié)果?！刨N壁信任動物細胞在微載體表面上增殖，可分為貼壁、生長和擴展成單層3個階段。∨明膠涂覆的多孔微載體適應于全部的細胞系?！盼⑤d體應能耐高溫并且是剛性的?！廖⒛一膫髻|(zhì)效率不遇到影響?！廖⒛一毎呐嘤贿m應于貼壁依靠性的細胞系?！廖⒛一毎呐嘤校⒛业拇笮毎纳L和產(chǎn)物的分泌有直接影響。∨當前動物細胞微囊化方法最常用的是聚賴氨酸/海藻酸法?！女a(chǎn)物提純過程包含初級分別階段和純化精制階段兩個階段。∨細胞破裂時破裂率越高越好?！廉斍皫缀跛械哪す桃悍謩e都采納切向流方式?！烹p水相萃取一般考慮使需要的蛋白質(zhì)盡量集中在下相?！粮邏簞驖{法中的破裂效率與勻漿閥構(gòu)造、操作壓力和破裂次數(shù)相關。教育資料.∨膜分別技術中膜構(gòu)造選擇往常原則是選擇不對稱構(gòu)造膜較耐污染。∨理想的反浸透膜應被以為是無孔的，它分其余原理是溶解擴散（或毛細孔流學說）?！湃芤簆H對蛋白質(zhì)在水中溶解性，荷電性及構(gòu)型有很大影響。∨膜分別技術中沖洗過程中主要考慮膜的化學特征和污染物的特征二個要素。膜污染與濃差極化沒有差異與聯(lián)系?！翚庖荷V的固定液在常溫下不必定為液體，但在使用溫度下必定呈液體狀態(tài)?！艢庀嗌V流出曲線的保存值可用時間或體積表示?！庞脕頇嗪馍V峰寬度的參數(shù)有標準誤差()、半峰寬(Y1/2)和峰底寬(Wb)三種表示法?！艢庀嗌V中容量因子越大，保存時間越長。∨離子互換色譜對于大分子和小分子的保存機理基真同樣?！攀静钫酃鈾z測器是除紫外檢測器以外應用最多的檢測器，此檢測器靈敏度低、對溫度敏感、不可以用于梯度洗脫?！乓?固吸附色譜中非線形等溫吸附常惹起峰的拖尾。∨分派系數(shù)差異大的二個溶質(zhì)比差異小的二個溶質(zhì)簡單被分開?！欧蔷€性色譜基本理論包含吸附均衡熱力學、吸附均衡動力學和色譜基本特料均衡方程?！欧蔷€性色譜的柱效與柱長成比率增添。×教育資料.在非線性色譜中，峰高增添的速率隨濃度的增添而漸漸降低，因此峰高不可以作為定量剖析的指標?！脸d洗脫、前沿剖析和置換睜開是非線性色譜中常用的3種操作方式。∨非線性色譜中只用細的顆粒?！聊z過濾中進樣體積和樣品的濃度將顯然地影響蛋白質(zhì)的?！排蚧哪z能夠直接高溫烘干?！聊z層析的分別原理是分子篩作用?！乓话銇碚f只需能溶解被洗脫物質(zhì)其實不使其變性的緩沖液都能夠用于凝膠層析。∨離子互換用的層析柱一般粗而短，不宜過長?！臜PLC中分別柱是色譜的中心,是最為重點的部分?！臩uperdax是葡聚糖與交聯(lián)瓊脂糖的聯(lián)合，而Superose是珠狀瓊脂糖經(jīng)兩次交聯(lián)。∨反相色譜以硅膠基質(zhì)的鍵合相填料為主，特別是鍵合C18，C8烷基以及苯基填料?！挪灰粯犹盍系幕瘜W構(gòu)造是經(jīng)過對基質(zhì)資料的化學改性而實現(xiàn)的?！攀杷曰ハ嘧饔蒙V是為了適應活性生物大分子特別是蛋白質(zhì)的分離而發(fā)展起來的種液相色譜方法?！沤?jīng)過氯硅烷能夠?qū)⒏鳂油榛溡牍枘z表面?！抛鳛榉謩e資料的硅膠，其顆粒的形狀與大小、孔的構(gòu)造、孔徑及其分布、總孔容、比表面積及機械強度等，均為重要的物理參數(shù)?！沤逃Y料.硅膠的化學修飾大概能夠三種不一樣的方式進行，即整體修飾、經(jīng)過表面硅羥基的化學修飾以及涂層法?！盼锢砦剿娜コ枪枘z衍生反響中不行或缺的一步?！殴枘z一般有耐受高壓力,耐壓能力隨孔徑及孔度而降落。∨羥基磷灰石與生物組織有特異性的親和力和相容性?！帕u基磷灰石是一種弱陽離子或弱陰離子互換層析資料?！胖苽淞u基磷灰石的方法經(jīng)過有干法、水熱法和濕法三種?！帕u基磷灰石作為色譜樣填補介質(zhì)能供應專一的選擇性、高的鍵合容量、低的非可逆性吸附以及化學穩(wěn)固性和熱穩(wěn)固性好，完整知足HPLC樣的要求。∨羥基磷灰石能精準地分別,純化構(gòu)造上只有細小差其余生物大分子?！庞緞佣?遷徙率)只取決于帶電質(zhì)點的性質(zhì)。×聚丙烯酰胺凝膠電泳擁有電泳和分子篩兩重作用?！艥舛群徒宦?lián)劑濃度決定膠的物理狀態(tài)及分子篩的孔徑的大小?！烹娪局芯彌_液的種類,濃度和其余電解質(zhì)濃度影響蛋白質(zhì)所帶電荷的極性和數(shù)目,同時還影響蛋白質(zhì)分子間的互相作用?！烹娪炯夹g主假如用于蛋白質(zhì)和核酸類物質(zhì)的剖析和分別?！挪杉{徑向流技術,能夠在較小的柱床層高度時使用較大的流動相速度。∨徑向色譜在較高流動相速度時,反壓降低?！艔较蛏V能夠線性地增添樣品辦理量,樣品能夠在完整同樣的色譜條教育資料.件下直接放大?！女斍皬较蛏V柱使用的填料主要有離子互換樹脂和親和色譜兩種。∨選擇具高選擇的填料能夠戰(zhàn)勝徑向色譜直徑短的弊端,發(fā)揮徑向色譜柱速度快,辦理量大的長處?！偶兌葯嗪庥须娪痉▽游龇百|(zhì)譜法等。一般應采納二種以上方法，并且同一原理的方法能夠采納二次。×蛋白質(zhì)純度是一個相對指標,可用百分比表示。一般指能否含有雜蛋白,而不包含能否含有鹽、離子等小分子的物質(zhì)。∨蛋白質(zhì)含量可用克氏定氮法，TCA比濁度法以及電泳法等方法。×四．單項選擇題（請將正確答案的字母填在下表中相應的題號下邊，每題1分，共10分）題12345678910號答案1．高效液相色譜設施最核心的部分是：（A）高壓輸液系統(tǒng)；（B）高敏捷的檢測系統(tǒng)；（C）高效的層析柱。2．剖析型色譜一般是：（A）線性色譜；（B）非線性色譜；（C）離子互換色譜3．DEAE-SephadexA25是一種：A）離子互換色譜填料；（B）凝膠排阻色譜填料；（C）親和色譜填料教育資料.4．顆粒表面主要含C18、C8基團的色譜填料適合作為：（A）離子互換色譜填料；（B）正相色譜填料；（C）反相色譜填料5．下邊對于高速珠磨法和高壓勻漿法破裂細胞的提法哪一種是正確的？A）高速珠磨法比高壓勻漿法更優(yōu)勝；B）高速珠磨法和高壓勻漿法各有長處；C）高壓勻漿法比高速珠磨法效率更高；6．多孔硅膠分子中最常有的硅羥基是：（A）單硅羥基；（B）二硅羥基；（C）三硅羥基；7．羥基磷灰石是一種：（A）有機色譜填料；（B）無機色譜填料；（C）親和色譜填料8．切合下邊什么條件時的層析方案是不行行的：（A）最短柱長<有效柱長;實質(zhì)柱長>最短柱長;最短柱長>有效柱長利用生物物質(zhì)生物功能的差異進行分其余是：親和層析;離子互換層析；（C）羥基磷灰石層析10．下邊對于蛋白質(zhì)純度的提法哪個是正確的：A）蛋白質(zhì)純度是指目標蛋白質(zhì)占樣品總量的百分比；B）蛋白質(zhì)純度是指目標蛋白質(zhì)占樣品中總蛋白的質(zhì)量百分比；教育資料.（C）蛋白質(zhì)純度能夠經(jīng)過考馬斯亮藍法測定；11．對于細胞破裂方法，以下提法哪一種是正確的：A）細胞破裂是以破裂率為基準的；B）高壓勻漿法比高速珠磨法更為優(yōu)勝；C）高速珠磨法比高壓勻漿法更為優(yōu)勝；D）高速珠磨法和高壓勻漿法各有特色；在理想狀態(tài)下,以下哪一種色譜對二種物質(zhì)的分別度能夠隨柱長的延伸而無窮增添:凝膠排阻色譜;離子互換色譜;親和色譜;分派色譜;以下哪一種色譜填料最適合做為徑相色譜的填料:凝膠排阻色譜;離子互換色譜;疏水色譜;分派色譜;14．S