高效液相色譜法測定化妝品中α

高效液相色譜法測定化妝品中皿"熊果苷及煙酰胺程鵬;陳梅蘭;朱巖【摘要】建立了美白類化妝品中熊果苷的兩種光學(xué)異構(gòu)體a-熊果苷和B-熊果苷及煙酰胺的高效液相色譜檢測方法.樣品用氯化鈉水溶液-氯仿(2:1,v/v)進行萃取.固定相為依利特ODS-BP柱(200mmx4.6mm,5pm),流動相為甲醇-水(10:90,v/v),柱溫為25°C,檢測波長為220nm,流速為0.5mL/min,進樣量為20pL.在上述條件下a-熊果苷、B-熊果苷和煙酰胺的質(zhì)量濃度依次在0.07~50,0.06~50,0.05~50mg/L時與色譜峰面積之間的線性關(guān)系良好相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=7)分別為1.65%、1.73%和1.33%.將該方法用于化妝品的檢測，回收率為91.7%~109.6%.該法簡便、快速、準(zhǔn)確，可用于化妝品美白成分的測定.【期刊名稱】《色譜》【年(卷)，期】2010(028)001【總頁數(shù)】4頁(P89-92)【關(guān)鍵詞】高效液相色譜；a-熊果苷;P-熊果苷;煙酰胺;化妝品【作者】程鵬;陳梅蘭;朱巖【作者單位】桂林理工大學(xué)化學(xué)與生物工程學(xué)院廣西，桂林,541004;浙江樹人大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院，浙江，杭州,310015淮林理工大學(xué)化學(xué)與生物工程學(xué)院廣西，桂林541004;浙江大學(xué)理學(xué)院化學(xué)系，浙江，杭州,310028【正文語種】中文【中圖分類】O658近年來，熊果苷(arbutin)和煙酰胺(niacinamide)在化妝品中的應(yīng)用日益增多，研究表明二者對皮膚都有一定的美白作用［1,2］。熊果苷屬氫醌苷化合物，有兩種差向異構(gòu)體，即a和B型，分子結(jié)構(gòu)見圖1。熊果苷能有效地抑制皮膚中的生物酪氨酸酶活性，阻斷黑色素的形成，是目前國內(nèi)外常用于美白化妝品中的主要原料［2-7］。兩種熊果苷異構(gòu)體的美白效果和安全性有所差異，據(jù)報道，a-熊果苷抑制黑色素生成的效果比來源于烏飯樹提取物的B-熊果苷要強10倍，并強于目前已知的其他美白活性成分［2］。研究還發(fā)現(xiàn)，陽熊果苷可損傷培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞膜，其在化妝品中添加用量大于3%時能產(chǎn)生細(xì)胞毒性，明顯抑制細(xì)胞生長。而a-熊果苷在較高濃度下也不抑制細(xì)胞的生長，因此有效性和安全性均比B-熊果苷高［2,3］。煙酰胺屬于B族維生素化合物［8］,又被稱為維生素B3、維生素PP或尼克酰胺，分子結(jié)構(gòu)見圖1。研究認(rèn)為，煙酰胺可能參與黑素細(xì)胞中黑素小體的轉(zhuǎn)運而達到美白皮膚的效果，因而被用來作為美白和防曬化妝品的添加劑［8,9］。熊果苷和煙酰胺的測定方法已有相關(guān)文獻報道，主要有伏安法［7］、毛細(xì)管氣相色譜法［10］和高效液相色譜法［4,5,9,11,12］、分光光度法［13］和薄層掃描法［14］等。但以往文獻所報道均是測定1種熊果苷或2種異構(gòu)體的總含量，而同時分離熊果苷兩種異構(gòu)體的方法卻未見報道。為此，本文建立了運用高效液相色譜法同時定量檢測化妝品中a-、B-熊果苷和煙酰胺含量的方法。圖1a-、&-熊果苷及煙酰胺結(jié)構(gòu)式Fig.1Chemicalstructuresofa-arbutin邛-arbutinandniacinamide1實驗部分1.1儀器和試劑Agilent1200高效液相色譜儀、四元梯度泵及VWD紫外檢測器購自美國Agilent公司;ODS-BP柱購自大連依利特分析儀器有限公司；UV-2450紫外分光光度計購自日本島津公司;TGL-16B高速臺式離心機購自上海安亭科學(xué)儀器廠。氯化鈉(NaCl)為分析純，購自上海試四赫維化工有限公司;甲醇為色譜純，購自美國Tedia公司;氯仿為分析純，購自衢州巨化試劑有限公司;實驗用水為超純水，電阻率為18.2MQ-cm;熊果苷和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液質(zhì)量濃度均為1g/L,由臺灣露絲貝爾化妝品有限公司提供。美白乳液、美白精華液和美白柔膚露，由臺灣露絲貝爾化妝品有限公司提供;玉蘭油、美白保濕霜和大寶SOD蜜購于杭州超市。1.2色譜條件色譜柱:依利特ODS-BP柱(200mmx4.6mm,5pm)，流動相:甲醇-水(10:90,v/v)混合溶液。進樣量:20pL,流速:0.5mL/min，檢測波長：220nm;柱溫:25二1.3樣品前處理本實驗選定美白精華液、美白柔膚露、美白乳液、美白保濕霜和玉蘭油5種美白類化妝品作為待測樣品，根據(jù)化妝品說明書上產(chǎn)品配料組成可知，美白乳液、美白保濕霜和玉蘭油為含油脂類化妝品，而美白精華液和美白柔膚露為不含油脂類化妝品。分別對兩類化妝品進行樣品前處理。稱取0.2g含油脂類化妝品樣品于20mL燒杯中，加入0.05kg/LNaCl水溶液5mL和氯仿2.5mL,在超聲波中超聲20min充分溶解，移入分液漏斗中分離，氯仿層用2mL超純水反復(fù)洗滌2次，將所得水溶液離心(8000r/min)8min。上層清液移入100mL容量瓶中，定容到100mL。溶液經(jīng)0.22pm水系針頭式過濾器過濾后直接進樣分析。稱取0.2g不含油脂類化妝品樣品直接用水溶解，并定容到100mL,提取液經(jīng)0.22pm水系針頭式過濾器過濾后直接進樣分析。2結(jié)果與討論2.1最佳波長的選擇使用UV-2450分光光度計分別對熊果苷及煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液進行掃描，掃描波長范圍為190~700nm。從掃描譜圖中可看出熊果苷標(biāo)準(zhǔn)溶液在282和220nm處均有吸收峰，煙酰胺在264和214nm處均有吸收峰。在實際分析中發(fā)現(xiàn)同樣濃度的樣品在220nm處信號響應(yīng)值最大，故本實驗采用220nm為檢測波長，以提高檢測靈敏度。2.2流動相的選擇本實驗選擇甲醇-水體系為流動相，對甲醇和水的比例進行了比較實驗。將甲醇-水體積比例依次按5:95,10:90,15:85,20:80,25:75,30:70進行分離實驗，流速為0.5mL/min，考察熊果苷兩種異構(gòu)體及煙酰胺的保留時間和分離情況。實驗材料為a-熊果苷、B-熊果苷和煙酰胺的質(zhì)量濃度均為10mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液。實驗結(jié)果表明:流動相中甲醇的比例對熊果苷兩種異構(gòu)體的保留時間和分離度影響顯著;隨著甲醇比例的降低，組分保留時間明顯延長，且熊果苷兩種異構(gòu)體的分離情況明顯改善，當(dāng)流動相為甲醇-水(10:90,v/v)時兩種異構(gòu)體已基本完全分開，因此本方法采用甲醇-水(10:90,v/v)為流動相。2.3樣品預(yù)處理化妝品從成分上基本可分為不含油脂成分和含油脂成分的產(chǎn)品。對前者預(yù)處理較簡單，選擇合適溶劑就能直接進樣分析;而對于后者則要預(yù)先除去這些物質(zhì)才能進行分析［1］。根據(jù)熊果苷和煙酰胺易溶于水而不溶于氯仿的特性［6,8,11］，采用水和氯仿萃取法除去油脂類物質(zhì)，熊果苷和煙酰胺進入水相，油脂類物質(zhì)進入有機相(氯仿)。據(jù)文獻［11］報道，NaCl的破乳作用可改善待測物的提取效果。因此本文用NaCl水溶液(0.05kg/L)和氯仿混合體系來萃取待測物，并討論了混合體系中NaCl水溶液與氯仿的比例以及超聲時間對萃取效果的影響。2.3.1NaCl水溶液和氯仿比例對萃取率的影響選取不含待測物質(zhì)的大寶SOD蜜為基體探討NaCl水溶液和氯仿的最佳萃取比例，分別稱取5份，每份重0.2g，分別添加1mLa-熊果苷、陽熊果苷和煙酰胺的質(zhì)量濃度均為100mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。實驗結(jié)果表明:NaCl水溶液和氯仿的體積比為2:1時萃取效率最高，因此選定此比例進行萃取。2.3.2超聲時間對萃取率的影響為考察超聲時間對提取效率的影響，根據(jù)2.3.1節(jié)得出的提取液的比例，本文用7.5mL提取液對樣品進行萃取，分別超聲10,15,20,25,30min。實驗結(jié)果表明:隨著超聲時間的增加，待測物提取效率增加，但超聲時間超過20min后，提取率基本無變化，因此設(shè)定超聲時間為20min。2.4標(biāo)準(zhǔn)工作曲線精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制成0.05,0.1,0.5,1,5,10,50mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，依次進樣，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)液質(zhì)量濃度(X,mg/L)為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，其線性方程、線性范圍及相關(guān)系數(shù)如表1所示。圖2為a-熊果苷、B-熊果苷和煙酰胺的質(zhì)量濃度均為0.5mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液及美白精華液的色譜圖。表1a-熊果苷、B-熊果苷和煙酰胺的線性方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)Table1Regressionequations,linearranges,correlationcoefficients(r)ofa-arbutin,^-arbutinandniacinamideY:peakarea;X:massconcentration,mg/L.?圖2(a)標(biāo)準(zhǔn)溶液和(b)美白精華液的色譜圖Fig.2Chromatogramsof(a)standardsolutionand(b)asampleofWhiteningEssence1.&-arbutin;2.a-arbutin;3.niacinamide.2.5精密度實驗吸取a-熊果苷、B-熊果苷和煙酰胺質(zhì)量濃度均為1mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)進樣7次，記錄色譜圖，測定峰面積，計算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差依次為1.65%,1.73%和1.33%。2.6方法檢出限在1.2節(jié)所述實驗條件下，以信噪比(S/N)為3計算檢出限，a-熊果苷、B-熊果苷和煙酰胺的檢出限依次為5.7，5.7和3.9pg/Lo2.7樣品分析及回收率在最佳實驗條件下分別測定了美白精華液、美白柔膚露、美白乳液、美白保濕霜和玉蘭油5種美白類化妝品中a-熊果苷、B-熊果苷和煙酰胺3種美白成分，每個樣品平行測定3次，其中美白精華液、美白柔膚露和美白乳液3種產(chǎn)品中均含有a-熊果苷，煙酰胺在美白精華液、美白乳液、美白保濕霜和玉蘭油中均有檢出邛-熊果苷在5種化妝品種均未檢出，結(jié)果見表2。表2樣品中a-熊果苷、B-熊果苷和煙酰胺的含量測定結(jié)果Table2Contentsofa-arbutin,&-arbutinandniacinamideinthesamples*ND:notdetected.?由于B-熊果苷在樣品中均未檢出，因此為檢驗該方法準(zhǔn)確性，分別添加高、中、低3種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進行加標(biāo)回收實驗，每個樣品平行測定3次，5種樣品的加標(biāo)回收率為91.7%~109.6%(見表3)。表3樣品中3種物質(zhì)的加標(biāo)回收率測定結(jié)果(n=3)Table3Spikedrecoveriesofthreecomponentsinthesamples(n=3)?4結(jié)語本文建立了一種同時分離測定化妝品中熊果苷兩種差向異構(gòu)體及煙酰胺等美白成分的高效液相色譜法。將方法用于實際化妝品樣品分析，加標(biāo)回收率為91.7%-109.6%。該測定方法具有準(zhǔn)確、簡單、快速等優(yōu)點，在化妝品質(zhì)量檢測方面有一定的應(yīng)用價值。參考文獻：[1]HuangSC,HuangBF,ChenQJ,etal.FlavourFragranceCosmetics(黃少嫦，黃百芬，陳青俊，等.香料香精化妝品)，2001(1):13[2]GuoJ,XuP,JinLY.NingxiaMedicalJournal(郭靜，徐平，金立元寧夏醫(yī)學(xué)雜志)，2008,30(3):281[3]YanXY,TangXF,WangXY,etal.InformationonTraditionalChineseMedicine(閻雪瑩，唐曉飛，王雪瑩，等.中醫(yī)藥信息)，2007,24(4):18[4]HuJM,DuanHJ,ZhaoYC.JournalofHygieneResearch(胡俊明，段鶴君，趙月朝.衛(wèi)生研究)，2003,32(5):499[5]ZhuY,YangYW,ZhangTH.JournalofEnvironmentandHealth(朱英，楊艷偉，張?zhí)礻?環(huán)境與健康雜志)，2007,24(4):260[6]LinCH,WuHL,HuangYL.JChromatogrB,2005,829:149[7]LiuXT,WangQX,GaoHW.PhysicalTestingandChemicalAnalysis,PartB:ChemicalAnalysis(劉心同，汪慶祥，高宏偉.理化檢驗:化學(xué)分冊)，2008,44(3):209[8]PatamM,PanJY,HongXY,etal.ChinaSurfactantDetergent&Cosmetics(帕它木?莫合買提，潘建英，洪新宇，等.日用化學(xué)工業(yè))，2004,34(5):296[9]HakozakitT,MinwallalL,ZhuangJ,etal.BrJDermatol,2002,147:20[10]ZhouH,WuXF,ZhangXW,etal.ChinaPublicHealth(周樺，吳曉芳，張曉煒，等.中國公共衛(wèi)生)，2002,18(5):584[11]LiuS.ChineseJournalofChromatography(柳松.色譜