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)的蔗糖水溶液)40%(w/v)蔗糖水溶液(2g/5ml的dder)的蔗糖水溶液)40%(w/v)蔗糖水溶液(2g/5ml的dder)、溴化乙錠(EB、5XTBE電泳緩沖液(Tris、硼I溶液(不用滅菌)ml的濃鹽酸,加滅菌ddHbO,混勻,室溫降低產(chǎn)量。PCR反應(yīng)中每種dNTP的終濃度為20200口所用一、所需儀器設(shè)備及消耗品L的EDTA4mlX3=12mlCTAB2gX3=6gL的EDTA100口l最后加ddHO定容到50ml工作液為XTE(45ml滅菌的ddbbO中,加入5ml已滅菌的1XTE))(aneeinTransgenicWheatPCR擴(kuò)增反應(yīng)程序引物濃度是5卩mol/L嗎PCR反應(yīng)時(shí),每個(gè)引物的終濃度是多火45s—72C延伸1min,35個(gè)循環(huán)。循環(huán)結(jié)束后再72CaneeinTransgenicWheatPCR擴(kuò)增反應(yīng)程序引物濃度是5卩mol/L嗎PCR反應(yīng)時(shí),每個(gè)引物的終濃度是多火45s—72C延伸1min,35個(gè)循環(huán)。循環(huán)結(jié)束后再72CNaAc-3HO2加ddH2O30mI用冰乙酸調(diào)節(jié)pH至力口ddHO定容到50mlRNase10mgEB30mgddHO30ml2磁力攪拌至完全溶解,裝入棕色瓶,鋁箔包裹,保存于室溫。)(L的EDTA20ml以上溶于400ml的ddbbO中,在定容到500ml工作液為1XTBE或XTBE(九)6X上樣緩沖液(4C保存)Ac溶液()(50ml)(高壓滅菌)NaAc-3HO2加ddmol/L時(shí),特異性降低或形成引物二聚體,冬卩mol/L時(shí),少4XdNTP的)(八)10XTBEAc溶液()(50ml)(高壓滅菌)NaAc-3HO2加ddmol/L時(shí),特異性降低或形成引物二聚體,冬卩mol/L時(shí),少4XdNTP的)(八)10XTBE緩沖液(電泳緩沖液)(高壓滅菌)Tris2(-一)5mol/L的NaOH容液(50ml,10g的NaOH容于50ml滅菌的ddHhO中不用滅菌)200g的NaOH溶于滅菌的ddHO中,定容至1000ml80ml的ddHO加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至(大約加)()()(9.305g的EDTA-Na2HO40ml的ddHO最后加水定容到50ml,用NaOH調(diào)節(jié)pH值至PCR(聚合酶鏈反應(yīng))一、所需儀器設(shè)備及消耗品ml(十二)1mol/L的Tris-HCl()(ml(十二)1mol/L的Tris-HCl()(100ml)酸、EDTA三、PCF反應(yīng)體系與反應(yīng)程序僅供參考①水、4Xd終濃度為口g/ml(30ml力口15口I、40ml加20口I、單面刀片二、所需化學(xué)藥品及試劑質(zhì)粒(陽(yáng)性對(duì)照)、引物(2)2MgC24XdNTPTacDNA聚合酶模板DNA母液濃度mmoI/LmmoI/L10X1X度3UL22①水、4XdNTP混合④混勻、分裝PCRt⑤向每個(gè)PCRt加入模板DNAPCR擴(kuò)增反應(yīng)程序:Tris、冰乙酸、硼酸、B-巰基乙醇、NaAc氯仿(三氯甲烷火45s—72C延伸1min,35個(gè)循環(huán)。循環(huán)結(jié)束后再Tris、冰乙酸、硼酸、B-巰基乙醇、NaAc氯仿(三氯甲烷火45s—72C延伸1min,35個(gè)循環(huán)。循環(huán)結(jié)束后再72C(高壓滅菌)12.11g的Tris堿80ml的ddHO加濃鹽:94C預(yù)變性5min。進(jìn)入循環(huán):94C變性45s—45C退循環(huán)結(jié)束后再72C延伸7min。外源脫水應(yīng)答轉(zhuǎn)錄因子DREB基因在轉(zhuǎn)基因小麥中的誘導(dǎo)型表達(dá)與抗旱生理效果無離子水4XdNTPTacpNA聚合酶模板DNA母液濃度10X各成分加入量2551各成分終濃度1X1UPCR擴(kuò)增反應(yīng)程序:94C預(yù)變性5min。循環(huán)結(jié)束后再72C延伸10min。dHO,加熱溶解,注:溫度不能太高)(十)1mol/L的HC火45s—72C延伸1min,35個(gè)循環(huán)。循環(huán)結(jié)束后再72C延伸10min。一般PCRdHO,加熱溶解,注:溫度不能太高)(十)1mol/L的HC火45s—72C延伸1min,35個(gè)循環(huán)。循環(huán)結(jié)束后再72C延伸10min。一般PCR反應(yīng)中引物的終濃度
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