6細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

本實(shí)驗(yàn)采用羅氏全新的方法來監(jiān)測細(xì)胞侵襲，將CIM-Plate16RTCADPAnalyzer使用，這個(gè)獨(dú)特的裝置可在無標(biāo)記條件下對細(xì)胞侵襲進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控。CIM-Plate16由上室和PET膜下層，并覆蓋80%表面積。趨化劑添加到下室，上室內(nèi)添加研究的細(xì)胞和選擇性添加細(xì)胞外基質(zhì)側(cè)細(xì)胞數(shù)目的增多，電阻抗增大，表現(xiàn)為細(xì)胞指數(shù)的變化，并被RTCADPAnalyzer記錄下RTCAsoftwareIDadministrator登錄，密碼為小寫的administrator。userone和usertwo登錄時(shí)無需密碼。點(diǎn)擊確認(rèn)后，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)experimentnote頁面下，填寫本次實(shí)驗(yàn)的相關(guān)信息，包括實(shí)驗(yàn)名稱，所使用細(xì)胞板的IDnumber信息等，備注欄內(nèi)填寫一些簡單的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。到Layout頁面下，輸入本次實(shí)驗(yàn)的設(shè)置，選中A1-H1，填寫細(xì)胞系名稱，細(xì)胞類型是HT-108020000個(gè)細(xì)胞，點(diǎn)擊apply，信息復(fù)制到第二排。此時(shí)可見16孔板設(shè)置完成的實(shí)驗(yàn)信息。示為IDLE，表示未完成，請勿更改背景檢測步驟參數(shù)。從冰箱中取出AssemblingtoolCIMplate上板。拆開上板，可見板上和蓋子上均有Matrigel50μlmatrigel4個(gè)孔后，馬上從孔內(nèi)輕輕吸出30μlMatrigel。如果出現(xiàn)氣泡，用槍頭小心剔除。取出CIMplateAssamblingtool160μl預(yù)溫好的完全培養(yǎng)基，動(dòng)作緩慢且在最后輕抬槍頭，可見整個(gè)液面形成漂亮的弧形。將CIM-Plate16AssemblyTool90度，小心不要干擾液面forstartingnextstep.回到Message頁面，看是否有任何報(bào)錯(cuò)信息。取出CIMplateAssamblingtool10020000CellPlotadd可見不同組得到的實(shí)驗(yàn)信號。的信號就非常明顯。根據(jù)包被Matrigel的濃度由高到低，細(xì)胞侵襲能力逐漸增強(qiáng)。驗(yàn)細(xì)胞必須在前一天進(jìn)行細(xì)胞傳代，并保證消化時(shí)細(xì)胞融合達(dá)60%-80%MatrigelMatrigel置于冰上。侵襲所有需要接觸Matri