新城疫防治技術(shù)規(guī)范

PAGEPAGE219九、新城疫防治技術(shù)規(guī)范新城疫（NewcastleDisease，ND），是由副粘病毒科副粘病毒亞科腮腺炎病毒屬的禽副粘病毒I型引起的高度接觸性禽類烈性傳染病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病，我國將其列為一類動(dòng)物疫病。為預(yù)防、控制和撲滅新城疫，依據(jù)《中華人民共和國動(dòng)物防疫法》、《重大動(dòng)物疫情應(yīng)急條例》、《國家突發(fā)重大動(dòng)物疫情應(yīng)急預(yù)案》及有關(guān)的法律法規(guī)，制定本規(guī)范。1適用范圍本規(guī)范規(guī)定了新城疫的診斷、疫情報(bào)告、疫情處理、預(yù)防措施、控制和消滅標(biāo)準(zhǔn)。本規(guī)范適用于中華人民共和國境內(nèi)的一切從事禽類飼養(yǎng)、經(jīng)營和禽類產(chǎn)品生產(chǎn)、經(jīng)營，以及從事動(dòng)物防疫活動(dòng)的單位和個(gè)人。2診斷依據(jù)本病流行病學(xué)特點(diǎn)、臨床癥狀、病理變化、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)等可做出診斷,必要時(shí)由國家指定實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行毒力鑒定。2.1流行特點(diǎn)雞、火雞、鵪鶉、鴿子、鴨、鵝等多種家禽及野禽均易感，各種日齡的禽類均可感染。非免疫易感禽群感染時(shí)，發(fā)病率、死亡率可高達(dá)90%以上；免疫效果不好的禽群感染時(shí)癥狀不典型，發(fā)病率、死亡率較低。本病傳播途徑主要是消化道和呼吸道。傳染源主要為感染禽及其糞便和口、鼻、眼的分泌物。被污染的水、飼料、器械、器具和帶毒的野生飛禽、昆蟲及有關(guān)人員等均可成為主要的傳播媒介。2.2臨床癥狀2.2.1本規(guī)范規(guī)定本病的潛伏期為21天。臨床癥狀差異較大，嚴(yán)重程度主要取決于感染毒株的毒力、免疫狀態(tài)、感染途徑、品種、日齡、其它病原混合感染情況及環(huán)境因素等。根據(jù)病毒感染禽所表現(xiàn)臨床癥狀的不同，可將新城疫病毒分為5種致病型：嗜內(nèi)臟速發(fā)型(Viscerotropicvelogenic)：以消化道出血性病變?yōu)橹饕卣?，死亡率高；嗜神?jīng)速發(fā)型(NeurogenicVelogenic)：以呼吸道和神經(jīng)癥狀為主要特征，死亡率高；中發(fā)型(Mesogenic)：以呼吸道和神經(jīng)癥狀為主要特征，死亡率低；緩發(fā)型(Lentogenicorrespiratory)：以輕度或亞臨床性呼吸道感染為主要特征；無癥狀腸道型(Asymptomaticenteric)：以亞臨床性腸道感染為主要特征。2.2.2典型癥狀2.2.2.1發(fā)病急、死亡率高；2.2.2.2體溫升高、極度精神沉郁、呼吸困難、食欲下降；2.2.2.3糞便稀薄，呈黃綠色或黃白色；2.2.2.4發(fā)病后期可出現(xiàn)各種神經(jīng)癥狀，多表現(xiàn)為扭頸、翅膀麻痹等。2.2.2.5在免疫禽群表現(xiàn)為產(chǎn)蛋下降。2.3病理學(xué)診斷2.3.1剖檢病變2.3.1.1全身黏膜和漿膜出血，以呼吸道和消化道最為嚴(yán)重；2.3.1.2腺胃黏膜水腫，乳頭和乳頭間有出血點(diǎn)；2.3.1.3盲腸扁桃體腫大、出血、壞死；2.3.1.4十二指腸和直腸黏膜出血，有的可見纖維素性壞死病變；2.3.1.5腦膜充血和出血；鼻道、喉、氣管黏膜充血，偶有出血，肺可見淤血和水腫。2.3.2組織學(xué)病變2.3.2.1多種臟器的血管充血、出血，消化道黏膜血管充血、出血，喉氣管、支氣管黏膜纖毛脫落，血管充血、出血，有大量淋巴細(xì)胞浸潤；2.3.2.2中樞神經(jīng)系統(tǒng)可見非化膿性腦炎，神經(jīng)元變性，血管周圍有淋巴細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞浸潤形成的血管套。2.4實(shí)驗(yàn)室診斷實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)診斷必須在相應(yīng)級別的生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。2.4.1病原學(xué)診斷病毒分離與鑒定（見GB16550、附件1)2.4.1.1雞胚死亡時(shí)間（MDT）低于90h；2.4.1.2采用腦內(nèi)接種致病指數(shù)測定(ICPI)，ICPI達(dá)到0.7以上者；2.4.1.3F蛋白裂解位點(diǎn)序列測定試驗(yàn)，分離毒株F1蛋白N末端117位為苯丙酸氨酸（F），F(xiàn)2蛋白C末端有多個(gè)堿性氨基酸的；2.4.1.4靜脈接種致病指數(shù)測定(IVPI)試驗(yàn)，IVPI值為2.0以上的。2.4.2血清學(xué)診斷微量紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（HI）（參見GB16550）。2.5結(jié)果判定2.5.1疑似新城疫符合2.1和臨床癥狀2.2.2.1，且至少有臨床癥狀2.2.2.2、2.2.2.3、2.2.2.4、2.2.2.5或/和剖檢病變2.3.1.1、2.3.1.2、2.3.1.3、2.3.1.4、2.3.1.5或/和組織學(xué)病變2.3.2.1、2.3.2.2之一的，且能排除高致病性禽流感和中毒性疾病的。2.5.2確診非免疫禽符合結(jié)果判定2.5.1，且符合血清學(xué)診斷2.4.2的；或符合病原學(xué)診斷2.4.1.1、2.4.1.2、2.4.1.3、2.4.1.4之一的；免疫禽符合結(jié)果2.5.1，且符合病原學(xué)診斷2.4.1.1、2.4.1.2、2.4.1.3、2.4.1.4之一的。3疫情報(bào)告3.1任何單位和個(gè)人發(fā)現(xiàn)患有本病或疑似本病的禽類，都應(yīng)當(dāng)立即向當(dāng)?shù)貏?dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)報(bào)告。3.2當(dāng)?shù)貏?dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)接到疫情報(bào)告后，按國家動(dòng)物疫情報(bào)告管理的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。4疫情處理根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀、剖檢病變，結(jié)合血清學(xué)檢測做出的臨床診斷結(jié)果可作為疫情處理的依據(jù)。4.1發(fā)現(xiàn)可疑新城疫疫情時(shí)，畜主應(yīng)立即將病禽（場）隔離，并限制其移動(dòng)。動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)要及時(shí)派員到現(xiàn)場進(jìn)行調(diào)查核實(shí)，診斷為疑似新城疫時(shí)，立即采取隔離、消毒、限制移動(dòng)等臨時(shí)性措施。同時(shí)要及時(shí)將病料送省級動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室確診。4.2當(dāng)確診新城疫疫情后，當(dāng)?shù)乜h級以上人民政府獸醫(yī)主管部門應(yīng)當(dāng)立即劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)、受威脅區(qū)，并采取相應(yīng)措施；同時(shí)，及時(shí)報(bào)請同級人民政府對疫區(qū)實(shí)行封鎖，逐級上報(bào)至國務(wù)院獸醫(yī)主管部門，并通報(bào)毗鄰地區(qū)。國務(wù)院獸醫(yī)行政管理部門根據(jù)確診結(jié)果，確認(rèn)新城疫疫情。4.2.1劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)、受威脅區(qū) 由所在地縣級以上（含縣級）獸醫(yī)主管部門劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)、受威脅區(qū)。疫點(diǎn)：指患病禽類所在的地點(diǎn)。一般是指患病禽類所在的禽場（戶）或其它有關(guān)屠宰、經(jīng)營單位；如為農(nóng)村散養(yǎng)，應(yīng)將自然村劃為疫點(diǎn)。疫區(qū)：指以疫點(diǎn)邊緣外延3公里范圍內(nèi)區(qū)域。疫區(qū)劃分時(shí)，應(yīng)注意考慮當(dāng)?shù)氐娘曫B(yǎng)環(huán)境和天然屏障（如河流、山脈等）。受威脅區(qū)：指疫區(qū)邊緣外延5公里范圍內(nèi)的區(qū)域。4.2.2封鎖由縣級以上獸醫(yī)主管部門報(bào)請同級人民政府決定對疫區(qū)實(shí)行封鎖；人民政府在接到封鎖報(bào)告后，應(yīng)立即做出決定，發(fā)布封鎖令。4.2.3疫點(diǎn)、疫區(qū)、受威脅區(qū)采取的措施疫點(diǎn)：撲殺所有的病禽和同群禽只，并對所有病死禽、被撲殺禽及其禽類產(chǎn)品按照GB16548規(guī)定進(jìn)行無害化處理；對禽類排泄物、被污染或可能污染飼料和墊料、污水等均需進(jìn)行無害化處理；對被污染的物品、交通工具、用具、禽舍、場地進(jìn)行嚴(yán)格徹底消毒；限制人員出入，嚴(yán)禁禽、車輛進(jìn)出，嚴(yán)禁禽類產(chǎn)品及可能污染的物品運(yùn)出。疫區(qū)：對疫區(qū)進(jìn)行封鎖，在疫區(qū)周圍設(shè)置警示標(biāo)志，在出入疫區(qū)的交通路口設(shè)置動(dòng)物檢疫消毒站(臨時(shí)動(dòng)物防疫監(jiān)督檢查站)，對出入的人員和車輛進(jìn)行消毒；對易感禽只實(shí)施緊急強(qiáng)制免疫，確保達(dá)到免疫保護(hù)水平；關(guān)閉活禽及禽類產(chǎn)品交易市場，禁止易感活禽進(jìn)出和易感禽類產(chǎn)品運(yùn)出；對禽類排泄物、被污染飼料、墊料、污水等按國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行無害化處理；對被污染的物品、交通工具、用具、禽舍、場地進(jìn)行嚴(yán)格徹底消毒。受威脅區(qū)：對易感禽只(未免禽只或免疫未達(dá)到免疫保護(hù)水平的禽只)實(shí)施緊急強(qiáng)制免疫，確保達(dá)到免疫保護(hù)水平；對禽類實(shí)行疫情監(jiān)測和免疫效果監(jiān)測。4.2.4緊急監(jiān)測對疫區(qū)、受威脅區(qū)內(nèi)的禽群必須進(jìn)行臨床檢查和血清學(xué)監(jiān)測。4.2.5疫源分析與追蹤調(diào)查根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，分析疫源及其可能擴(kuò)散、流行的情況。對可能存在的傳染源，以及在疫情潛伏期和發(fā)病期間售(運(yùn))出的禽類及其產(chǎn)品、可疑污染物（包括糞便、墊料、飼料等）等應(yīng)當(dāng)立即開展追蹤調(diào)查，一經(jīng)查明立即按照GB16548規(guī)定進(jìn)行無害化處理。4.2.6封鎖令的解除疫區(qū)內(nèi)沒有新的病例發(fā)生，疫點(diǎn)內(nèi)所有病死禽、被撲殺的同群禽及其禽類產(chǎn)品按規(guī)定處理21天后，對有關(guān)場所和物品進(jìn)行徹底消毒，經(jīng)動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)審驗(yàn)合格后，由當(dāng)?shù)孬F醫(yī)主管部門提出申請，由原發(fā)布封鎖令的人民政府發(fā)布解除封鎖令。4.2.7處理記錄對處理疫情的全過程必須做好詳細(xì)的記錄（包括文字、圖片和影像等），并完整建檔。5預(yù)防以免疫為主，采取“撲殺與免疫相結(jié)合”的綜合性防治措施。5.1飼養(yǎng)管理與環(huán)境控制飼養(yǎng)、生產(chǎn)、經(jīng)營等場所必須符合《動(dòng)物防疫條件審核管理辦法》（農(nóng)業(yè)部[2002]15號令）規(guī)定的動(dòng)物防疫條件，并加強(qiáng)種禽調(diào)運(yùn)檢疫管理。飼養(yǎng)場實(shí)行全進(jìn)全出飼養(yǎng)方式，控制人員、車輛和相關(guān)物品出入，嚴(yán)格執(zhí)行清潔和消毒程序。養(yǎng)禽場要設(shè)有防止外來禽鳥進(jìn)入的設(shè)施，并有健全的滅鼠設(shè)施和措施。5.2消毒各飼養(yǎng)場、屠宰廠（場）、動(dòng)物防疫監(jiān)督檢查站等要建立嚴(yán)格的衛(wèi)生（消毒）管理制度。禽舍、禽場環(huán)境、用具、飲水等應(yīng)進(jìn)行定期嚴(yán)格消毒；養(yǎng)禽場出入口處應(yīng)設(shè)置消毒池，內(nèi)置有效消毒劑。5.3免疫國家對新城疫實(shí)施全面免疫政策。免疫按農(nóng)業(yè)部制定的免疫方案規(guī)定的程序進(jìn)行。所用疫苗必須是經(jīng)國務(wù)院獸醫(yī)主管部門批準(zhǔn)使用的新城疫疫苗。5.4監(jiān)測5.4.1由縣級以上動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)組織實(shí)施。5.4.2監(jiān)測方法未免疫區(qū)域：流行病學(xué)調(diào)查、血清學(xué)監(jiān)測，結(jié)合病原學(xué)監(jiān)測。已免疫區(qū)域：以病原學(xué)監(jiān)測為主，結(jié)合血清學(xué)監(jiān)測。5.4.3監(jiān)測對象：雞、火雞、鵝、鵪鶉、鴿、鴨等易感禽類。5.4.4監(jiān)測范圍和比例5.4.4.1對所有原種、曾祖代、祖代和父母代養(yǎng)禽場，及商品代養(yǎng)禽場每年要進(jìn)行兩次監(jiān)測；散養(yǎng)禽不定期抽檢。5.4.4.2血清學(xué)監(jiān)測：原種、曾祖代、祖代和父母代種禽場的監(jiān)測，每批次按照0.1%的比例采樣；有出口任務(wù)的規(guī)模養(yǎng)殖場，每批次按照0.5%比例進(jìn)行監(jiān)測；商品代養(yǎng)禽場，每批次（群）按照0.05%的比例進(jìn)行監(jiān)測。每批次（群）監(jiān)測數(shù)量不得少于20份。飼養(yǎng)場（戶）可參照上述比例進(jìn)行檢測。5.4.4.3病原學(xué)監(jiān)測：每群采10只以上禽的氣管和泄殖腔棉拭子，放在同一容器內(nèi)，混合為一個(gè)樣品進(jìn)行檢測。5.4.4.3監(jiān)測預(yù)警各級動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)對監(jiān)測結(jié)果及相關(guān)信息進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析，做好預(yù)警預(yù)報(bào)。5.4.4.5監(jiān)測結(jié)果處理監(jiān)測結(jié)果要及時(shí)匯總，由省級動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)定期上報(bào)中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心。5.5檢疫5.5.1按照GB16550執(zhí)行。5.5.2國內(nèi)異地引入種禽及精液、種蛋時(shí)，應(yīng)取得原產(chǎn)地動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)的檢疫合格證明。到達(dá)引入地后，種禽必須隔離飼養(yǎng)21天以上，并由當(dāng)?shù)貏?dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測，合格后方可混群飼養(yǎng)。從國外引入種禽及精液、種蛋時(shí)，按國家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。6控制和消滅標(biāo)準(zhǔn)6.1免疫無新城疫區(qū)6.1.1該區(qū)域首先要達(dá)到國家無規(guī)定疫病區(qū)基本條件。6.1.2有定期和快速(詳實(shí))的動(dòng)物疫情報(bào)告記錄。6.1.3該區(qū)域在過去3年內(nèi)未發(fā)生過新城疫。6.1.4該區(qū)域和緩沖帶實(shí)施強(qiáng)制免疫，免疫密度100%，所用疫苗必須符合國家獸醫(yī)主管部門規(guī)定的弱毒疫苗（ICPI小于或等于0.4）或滅活疫苗。6.1.5該區(qū)域和緩沖帶須具有運(yùn)行有效的監(jiān)測體系，過去3年內(nèi)實(shí)施疫病和免疫效果監(jiān)測，未檢出ICPI大于0.4的病原，免疫效果確實(shí)。6.1.6若免疫無疫區(qū)內(nèi)發(fā)生新城疫時(shí)，在具備有效的疫情監(jiān)測條件下,對最后一例病禽撲殺后6個(gè)月，方可重新申請免疫無新城疫區(qū)。6.1.7所有的報(bào)告、記錄等材料詳實(shí)、準(zhǔn)確和齊全。6.2非免疫無新城疫區(qū)6.2.1該區(qū)域首先要達(dá)到國家無規(guī)定疫病區(qū)基本條件。6.2.2有定期和快速(詳實(shí))的動(dòng)物疫情報(bào)告記錄。6.2.3在過去3年內(nèi)沒有發(fā)生過新城疫，并且在過去6個(gè)月內(nèi)，沒有進(jìn)行過免疫接種；另外，該地區(qū)在停止免疫接種后，沒有引進(jìn)免疫接種過的禽類。6.2.4在該區(qū)具有有效的監(jiān)測體系和監(jiān)測帶，過去3年內(nèi)實(shí)施疫病監(jiān)測，未檢出ICPI大于0.4的病原或新城疫HI試驗(yàn)滴度小于23。6.2.5當(dāng)發(fā)生疫情后，重新達(dá)到無疫區(qū)須做到：采取撲殺措施及血清學(xué)監(jiān)測情況下最后一例病例被撲殺3個(gè)月后，或采取撲殺措施、血清學(xué)監(jiān)測及緊急免疫情況下最后一只免疫禽被屠宰后6個(gè)月后重新執(zhí)行(認(rèn)定)，并達(dá)到6.2.3、6.2.4的規(guī)定。6.2.6所有的報(bào)告、記錄等材料詳實(shí)、準(zhǔn)確和齊全。

附件1新城疫病原分離與鑒定當(dāng)臨床診斷有新城疫發(fā)生時(shí)，應(yīng)從發(fā)病禽或死亡禽采集病料，進(jìn)行病原分離、鑒定和毒力測定。1樣品的采集、保存及運(yùn)輸1.1樣品采集1.1.1采集原則。采集樣品時(shí)，必須嚴(yán)格按照無菌程序操作。采自于不同發(fā)病禽或死亡禽的病料應(yīng)分別保存和標(biāo)記。每群至少采集5只發(fā)病禽或死亡禽的樣品。1.1.2樣品內(nèi)容發(fā)病禽：采集氣管拭子和泄殖腔拭子（或糞便）；死亡禽：以腦為主；也可采集脾、肺、氣囊等組織。1.2樣品保存1.2.1樣品置于樣品保存液（0.01MPBS溶液，含抗生素且pH為7.0～7.4）中，抗生素視樣品種類和情況而定。對組織和氣管拭子保存液應(yīng)含青霉素（1000IU/mL）、鏈霉素（1mg/mL），或卡那霉素（50μg/mL）、制霉菌素（1000IU/mL）；對泄殖腔拭子(或糞便)保存液的抗菌素濃度應(yīng)提高5倍。1.2.2采集的樣品應(yīng)盡快處理，如果沒有處理?xiàng)l件，樣品可在4℃保存4天；若超過4天，需置-20℃保存。1.3樣品運(yùn)輸所有樣品必須置于密閉容器，并貼有詳細(xì)標(biāo)簽，以最快捷的方式送檢（如：航空快遞等）。如果在24小時(shí)內(nèi)無法送達(dá)，則應(yīng)用干冰致冷送檢。1.4樣品采集、保存及運(yùn)輸按照《高致病性動(dòng)物病原微生物菌（毒）種或者樣本運(yùn)輸包裝規(guī)范》（農(nóng)業(yè)部公告第503號）執(zhí)行。2病毒分離與鑒定2.1病毒分離與鑒定：按照GB16550附錄A3.3、A4.1、A4.2進(jìn)行。2.2病原毒力測定2.2.1最小病毒致死量引起雞胚死亡平均時(shí)間(MDT)測定試驗(yàn)按照GB16550附錄A4.3進(jìn)行；依據(jù)MDT可將NDV分離株分為強(qiáng)毒力型（死亡時(shí)間≤60小時(shí)）；中等毒力型（60小時(shí)＜死亡時(shí)間≤90小時(shí)；溫和型（死亡時(shí)間＞90小時(shí)）。2.2.2腦內(nèi)致病指數(shù)(ICPI)測定試驗(yàn)收獲接種過病毒的SPF雞胚的尿囊液，測定其血凝價(jià)>24，將含毒尿囊液用等滲滅菌生理鹽水作10倍稀釋(切忌使用抗生素)，將此稀釋病毒液以0.05mL/羽腦內(nèi)接種出殼24～40小時(shí)的SPF雛雞10只,2只同樣雛雞0.05mL/羽接種稀釋液作對照(對照雞不應(yīng)發(fā)病，也不計(jì)入試驗(yàn)雞)。每24小時(shí)觀察一次，共觀察8天。每次觀察應(yīng)給雞打分，正常雞記作0，病雞記作1，死雞記為2（死亡雞在其死后的每日觀察結(jié)果都記為2）。ICPI值=每只雞在8天內(nèi)所有分值之和／(10只雞×8天)，如指數(shù)為2.0，說明所有雞24小時(shí)內(nèi)死亡；指數(shù)為0.0，說明8天觀察期內(nèi)沒有雞表現(xiàn)臨床癥狀。當(dāng)ICPI達(dá)到0.7或0.7以上者可判為新城疫中強(qiáng)毒感染。2.2.3F蛋白裂解位點(diǎn)序列測定試驗(yàn)NDV糖蛋白的裂解活性是決定NDV病原性的基本條件,F基因裂解位點(diǎn)的核苷酸序列分析,發(fā)現(xiàn)在112～117位點(diǎn)處,強(qiáng)毒株為112Arg-Arg-Gln-Lys(或Arg)-Arg-PHe117;弱毒株為112Gly-Arg(或Lys)-Gln-Gly-Arg-Leu117這是NDV致病的分子基礎(chǔ)。個(gè)別鴿源變異株（PPMV-1）112Gly-Arg-Gln-Lys-Arg-PHe117,但I(xiàn)CPI值卻較高。因此，在115、116位為一對堿性氨基酸和117位為苯丙氨酸（PHe）和113位為堿性氨基酸是強(qiáng)毒株特有結(jié)構(gòu)。根據(jù)對NDVF基因112-117位的核苷酸序列即可判定其是否為強(qiáng)毒株。(Arg-精氨酸；Gly-甘氨酸；Gln-谷氨酰胺；Leu-亮氨酸；Lys-賴氨酸)。分離毒株F1蛋白N末端117位為苯丙氨酸（F），F(xiàn)2蛋白C末端有多個(gè)堿性氨基酸的可判為新城疫感染?！岸鄠€(gè)堿性氨基酸”是指113至116位至少有3個(gè)精氨酸或賴氨酸（氨基酸殘基是從后F0蛋白基因的N末端開始計(jì)數(shù)的，113至116對應(yīng)于裂解位點(diǎn)的-4至-1位）。2.2.4靜脈致病指數(shù)(IVPI)測定試驗(yàn)收獲接種病毒的SPF雞胚的感染性尿囊液，測定其血凝價(jià)>24，將含毒尿囊液用等滲滅菌生理鹽水作10倍稀釋(切忌使用抗生素)，將此稀釋病毒液以0.1mL/羽靜脈接種10只6