2023屆高考生物考前梳理選擇性必修3生物技術(shù)與工程實(shí)驗(yàn)3.酵母菌的純培養(yǎng)_第1頁
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3.酵母菌的純培養(yǎng)分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體,這就是菌落。采用平板劃線法和稀釋涂布平板法能將單個(gè)微生物分散在固體培養(yǎng)基上,之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個(gè)微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。下面,我們嘗試在馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行酵母菌的純培養(yǎng)。目的要求1.學(xué)會(huì)配制培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基并倒平板。2.學(xué)會(huì)進(jìn)行無菌操作。3.嘗試通過平板劃線操作來獲得純化的酵母菌菌落。材料用具酵母菌培養(yǎng)液、馬鈴薯、葡萄糖(或蔗糖)、瓊脂、蒸餾水、天平、小刀、紗布、燒杯、錐形瓶、棉塞、牛皮紙(或報(bào)紙)、皮筋、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、酒精燈、超凈工作臺(tái)、高壓蒸汽滅菌鍋、干熱滅菌箱和恒溫培養(yǎng)箱等。方法步驟1.制備培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基稱取去皮的馬鈴薯200g,切成小塊,加水1000mL,加熱煮沸至馬鈴薯軟爛,用紗布過濾。向?yàn)V液中加入20g葡萄糖(也可用蔗糖代替),15~20g瓊脂,用蒸餾水定容至1000mL。滅菌將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中,加棉塞,包上牛皮紙,并用皮筋勒緊,再放入高壓蒸汽滅菌鍋中,在壓力為100KPa、溫度為121℃的條件下,滅菌1~30min。將5~8套培養(yǎng)皿包成一包,用幾層牛皮紙包緊,放入干熱滅菌箱內(nèi),在160~170℃滅菌2h。倒平板待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí),在酒精燈火焰附近倒平板。倒平板的具體操作步驟如下。將瓶口迅速通過火焰將瓶口迅速通過火焰用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,將培養(yǎng)基(10-20mL)倒入培養(yǎng)皿,立即蓋上皿蓋等待培養(yǎng)基冷卻凝固后,將培養(yǎng)皿倒過來放置。拔出錐形瓶的棉塞拔出錐形瓶的棉塞2.接種和分離酵母菌通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng),可以分離得到單菌落。平板劃線的具體操作見下面的流程圖。將接種環(huán)放在火焰上灼燒,指導(dǎo)接種環(huán)的金屬絲燒紅。將接種環(huán)放在火焰上灼燒,指導(dǎo)接種環(huán)的金屬絲燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán)。同時(shí),拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞將試管口通過火焰。在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液。將試管口通過火焰,并賽上棉塞。在火焰附近將皿蓋貸款一條縫隙,用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條平行線,蓋上皿蓋。灼燒接種環(huán),待其冷卻后,從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作,作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。問1.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50℃左右時(shí),才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度?提示:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。問2.在倒平板的過程中,如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位,這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎?為什么?提示:最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。問3.平板冷凝后,為什么要將平板倒置?提示:平板冷凝后,皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠,凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高,將平板倒置,既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。問4.怎么確定所倒平板未被雜菌污染?提示:將所倒平板放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12h~24h,觀察是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底。問5.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么?灼燒時(shí)期目的取菌種前殺死接種環(huán)上原有微生物每次劃線前殺死上次劃線時(shí)殘留菌種,使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端,從而使每次劃線時(shí)菌種數(shù)目逐漸減少,直至得到單個(gè)細(xì)胞接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上殘留的菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者3.培養(yǎng)酵母菌完成平板劃線后,待菌液被培養(yǎng)基吸收,將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置,放入28℃左右(培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異)的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h。結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1.在未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長(zhǎng)?如果有,說明了什么?提示1:在未接種的培養(yǎng)基表面應(yīng)該沒有菌落生長(zhǎng),如果有,說明培養(yǎng)基被雜菌污染。2.在接種酵母菌的培養(yǎng)基上,你是否觀察到了單菌落?這些菌落

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