醫(yī)院無菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

無菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程〔一〕目的無菌檢驗是指檢查經(jīng)滅菌方法處理后的醫(yī)療器械(具)、植入物品、敷料等是否到達(dá)無菌標(biāo)準(zhǔn)的一種方法。臨床部門不應(yīng)常規(guī)進展無菌檢驗，如有需要，可聯(lián)系當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防把握中心派專人來采樣檢測?！捕吃囼炃邦A(yù)備．無菌檢驗應(yīng)在干凈度為100內(nèi)實施，并證明該試驗室各項指標(biāo)符合 GB50073—2023《干凈廠房設(shè)計標(biāo)準(zhǔn)》、GB／T16292～162941996藥工業(yè)干凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》等相關(guān)要求，且在有效期范圍之內(nèi)。．按衛(wèi)生部《消毒技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》(2023年版)制備無菌檢驗用洗脫液、需氧一厭氧培育基與真菌培育基(見附)。．在無菌檢驗前三日，分別在需氧一厭氧培育基與真菌培育基內(nèi)各接種1ml洗脫液，分別置30～35℃與20～25℃：培育72h，應(yīng)無菌生長。．陽性比照管菌液制備：在檢驗前一天取金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的一般瓊脂斜面穎培育物，接種一環(huán)至需氧一厭氧培育基內(nèi)，在30～35℃培育16～18h后，用0．9％無菌氯化鈉溶液稀釋至10～100cfuml(1m1取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厭氧菌培育基穎培育物一接種環(huán)種于一樣培育基內(nèi)，于30～35℃培育18～24h后，用0.8510～100cfuml。取白念珠菌[CMCC(F)98001]真菌瓊脂培育基斜面穎培育物一接種環(huán)種于一樣培育基內(nèi)，于 20～25℃培育24h后用085％無菌氯化鈉溶液稀釋至10～100／ml?！踩硺颖局苽湟罁?jù)檢樣的類型與大小，以及帶孔(腔)與否，可以依據(jù)以下不同的方法進展制備。．敷料類等非管道類樣品：取2個包裝內(nèi)的樣本，剪成約10mm×30mm大小的樣片21菌培育管5管與真菌培育管2管。每培育管含培育基40m1，各接種3．注射針、針灸針、縫合針、棉簽等小樣本：可直接接種需氧一厭氧菌培育管5管與真菌培育管2含培育基15ml．對不能用破壞性方法取樣的特別醫(yī)療用品可用浸有洗脫液的無菌棉拭子涂抹采樣，被采外表<100cm100cm100cm。．輸液(血)器等導(dǎo)管類樣本：選7支樣本，以無菌注射器吸取5.O～10.Oml無菌洗脫液注入管內(nèi)來回?fù)u蕩5次。將樣本洗脫液分別接種需氧一厭氧菌培育管 5管與真菌培育管215ml，每管接種樣本洗脫液1.0ml72.O～10.0ml，將芯桿抽取至全程刻度，振搖5次。將各管洗脫液分別接種需氧一厭氧菌培育管5管與真菌培育管2洗脫液接種量分別為：1ml注射器0.5ml2ml注射器1.0m1；5～10m12.0ml；20～50ml5.0m1。培育基含量按以下標(biāo)準(zhǔn)選擇：洗脫液接種量在2m1以下者，每管為15ml；接種量在5ml者，每管為40ml。6．其他樣本：不能用上述方法處理的，可用浸有洗脫液的無菌棉拭子涂抹法采樣。每個樣本涂采面積不得少于25c㎡。采樣后將棉簽直接剪人培育管中。每次檢測 個樣本，分別接種需氧一厭氧菌培育管5管與真菌培育管215m1〔四〕樣本培育在不同樣本制備過程中，都必需在其中一支加有樣本的需氧一厭氧菌培育管中接種預(yù)先預(yù)備的 1：1000稀釋的金黃色葡萄球菌1ml，以作為陽性比照管。將含有檢樣的需氧一厭氧培育管以及陽性與陰性比照管均于 30～35℃培育5日；含有檢樣的真菌培育管與陰性比照管于20～25℃培育7日。培育期間逐日檢查是否有菌生長，如上推斷時，可取培育液轉(zhuǎn)種人另一支一樣的培育基中或斜面培育基上，培育48～72h斜面上有無菌落生長，并在轉(zhuǎn)種的同時，取培育液少量，涂片染色，用顯微鏡觀看是否有菌生長。陽性比照在24h內(nèi)應(yīng)有菌生長，陰性比照在培育期間應(yīng)無菌生長，如需氧一厭氧菌及真菌培育管內(nèi)均為澄清或雖顯渾濁但經(jīng)證明無菌生長(接種管內(nèi)液體到相應(yīng)的培育皿，以證明是否有菌生長，培育時間不得少于 48h)，判為滅菌合格；如在7支需一厭氧菌及真菌培育管中，任何1支顯示出渾濁現(xiàn)象，并證明有菌生長，應(yīng)重取樣，分別用同樣方法復(fù)試2次。除陽性比照外，其他各管均不得有菌生長，否則判為滅菌不合格。無菌試驗結(jié)果為合格，應(yīng)報告：未檢出需氧一厭氧菌及菌。．提倡“四手操作”，嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。凡有塑料、紙塑、紙袋等包裝的物品，翻開前應(yīng)承受 75％乙醇棉球在開口處擦拭3遍(每一次更換1中所使用的血管鉗、鑷子等應(yīng)先浸蘸乙醇溶液，再過酒精燈消毒，反復(fù)消毒3次前方可使用；當(dāng)操作不同物品時應(yīng)重復(fù)上述消毒方法。．試驗前操作者應(yīng)嚴(yán)格手衛(wèi)生，必要時應(yīng)佩戴無菌乳膠手套。操作者應(yīng)穿戴滅菌帽子、口罩與隔離衣。在整個操作過程中，操作者的肢體動作幅度不應(yīng)過大；被檢物品一旦與污染物品外表接觸，應(yīng)馬上終止操作，該件樣本制備作廢，重選另一件未被污染的物品進展采樣。．在實施樣本制備前，應(yīng)先取需氧一厭氧菌及真菌培育管各1支，翻開培育管的蓋子(塞子)，置高效過濾器下方的臺面，直接暴露于空氣中直至試驗完畢，旋上蓋子(塞回塞子)后，作為陰性比照與樣本一起培育。的中和劑。無菌檢驗用試劑與培育基配方吐溫--80 1g蛋白胨 10g氯化鈉 8.5g蒸餾水 1000ml將各成分參與到1000ml0.03molLPBS熱溶解后用NaOHpH至7．2～7.4，于121℃壓力蒸汽滅菌20min．需氧一厭氧菌瓊脂培育基：酪胨(胰酶水解) 15g牛肉膏 3g葡萄糖 5g氯化鈉 2．5gL一胱氨酸 0．5g硫乙醇酸鈉 0．5g酵母浸出粉 5g穎配制的0．110ml(05m1)配制的0．2％亞甲藍(lán)溶液)瓊脂 0．5～0.7g蒸餾水 1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分參與蒸餾水中，微溫溶解后，調(diào)pHNaOH或鹽酸調(diào)pH6．9～7．3，分裝，于115℃：壓力蒸汽滅菌：30min．無菌檢驗用真菌培育基：磷酸二氫鉀