熒光光度法測定維生素b1

熒光光度法測定維生素b1

維生素b1是維持人體代謝平衡的重要藥物。如果缺乏，可能會導致腳氣病和多發(fā)神經(jīng)炎等疾病。b1存在于水稻、母系、谷物、肝臟、魚類、豆類等動植物組織中。用于測定維生素b1的方法包括重量法、滴注法、熒光法、電位法和示波法。在-190km和-1浩亞色光刻顯微鏡下（vs.sce）中，維生素b1具有兩個緩沖液ph值為10-610-4mol/l的敏感二次還原峰。峰電流值和維生素b1的濃度在10-610-4mol/l范圍內呈線性。它可以用作定量分析的基礎。1實驗部分1.1參比電極的制備JP-303型微機極譜儀(成都儀器廠);PAR-270電化學系統(tǒng)(美國);三電極體系(工作電極:滴汞電極;參比電極:飽和甘汞電極;輔助電極:鉑電極).維生素B1標準溶液:稱取0.3372g維生素B1,配成100mL維生素B1貯備液(0.0100mol/L),用時按需稀釋.HAc～NaAc緩沖溶液:稱取50g無水NaAc溶解,加入20mL冰醋酸,稀釋至1000mL(pH為5.00).實驗所用試劑均為分析純,用水為重蒸水.1.2hacnaac緩沖溶液極譜峰形取適量維生素B1溶液于25mL容量瓶中,加入10mLHAc～NaAc緩沖溶液,定容.在譜儀上測其二階導數(shù)峰,峰電位在-1390mV(vs.SCE),極譜峰形見圖1(原電位-500mV).2結果與討論2.1掃描速度的確定底液:維生素B1易溶于水,水溶液呈酸性.維生素B1在酸性介質中穩(wěn)定,在堿性介質中將導致其噻唑環(huán)打開而失效,故底液pH應低于7.試驗考察了維生素B1在氨基乙酸、磷酸鹽、Britton-Robinson廣泛緩沖溶液、HAc～NaAc等緩沖溶液中的氧化還原行為,發(fā)現(xiàn)在HAc～NaAc底液中,維生素B1在-1390mV(vs.SCE)附近有一個靈敏的還原峰,此峰電流和峰電位與底液pH有關,當pH=5.00,緩沖溶液總濃度在0.22～0.40mol/L范圍內時,維生素B1的還原峰穩(wěn)定,對稱性好.掃描速度:掃描速度對峰電流的影響見表1,由此可以繪制ip～V1/2圖(本文略去),表明在一定掃速范圍的峰電流(ip)與掃描速度(V)的1/2次方成正比,符合Randles-Sevcik方程ip=KV1/2(其他條件一定),即掃速越大,峰電流越大.顯然,可通過增大掃描速度來提高分析方法的靈敏度,但由于掃速增大,充電電流也會相應增大,甚至會比峰電流增大得更快,所以掃描速度過大反而對方法靈敏度產生不利影響,此外,還使掃描穩(wěn)定性降低.本實驗選擇掃描速度為250mV/s.同時發(fā)現(xiàn),隨掃描速度增大,ip～V1/2曲線逐漸偏離Randles-Sevcik方程向上彎,表明維生素B1在汞表面有吸附.除氧:由于單掃描極譜法掃速快,與經(jīng)典極譜法相比,氧的影響較小;又氧為不可逆波,經(jīng)二次微分后,其影響更小;且在本實驗中,氧的峰電位與維生素B1的峰電位相距甚遠,因此,本實驗所有溶液均不必除氧.起掃電位:起掃電位的變化對峰電流有一定影響,對峰電位無影響,本實驗選擇起掃電位為-500mV.2.2個陽離子對維生素b汞表面的吸附pH與峰電位:實驗表明溶液酸度對峰電位有顯著影響,這說明有質子參與電極反應,又pH每增大一個單位,出峰電位大約平移負105mV.由公式m=ΔV/59(mV)ΔpH(m為參與反應的質子數(shù))可知,有2個質子參與了維生素B1汞表面的電極反應.pH與峰電位曲線見圖2.圖3為維生素B1在汞膜電極上的循環(huán)伏安圖.由圖可知,此電極反應為一準可逆過程.電毛細管曲線見圖4,曲線2(維生素B1)明顯低于曲線1(緩沖溶液),說明維生素B1在電極上有吸附.電子轉移數(shù):取1.0mL0.1mol/L的維生素溶液,用100mLpH為5.00的HAc～NaAc緩沖溶液稀釋,以鉑電極為陽極,汞池為陰極,在-1390mV(vs.SCE)下電解,利用氫氧庫侖計測得電量為19.29C,根據(jù)公式:n=Q/n(B1)F(Q為電量;F為法拉弟常數(shù);n(B1)為維生素B1的物質的量),求得電極反應電子轉移數(shù)n=2.2.3測定實驗結果峰電流與維生素B1濃度在10-6～10-4mol/L范圍內呈線性,按實驗數(shù)據(jù)求得的回歸方程為ip(μA)=0.2250+2.419c(10-5mol/L),相關系數(shù)r=0.999.實驗證明,濃度10倍于維生素B1的維生素C,B2,B6在給定實驗條件下均不影響測定.2.4試樣測定結果藥片:取10克維生素B1藥片準確稱量,水溶于燒杯中,過濾,濾液移至1000mL容量瓶中,定容.取1.00mL按實驗方法測定.大豆:取新鮮大豆用水洗凈,自然涼干.準確稱取20g于研缽中,加入2%的鹽酸10mL及少量石英砂一起研磨,放置,過濾提取液,濾液移入100mL容量瓶中,每次用5.0mL,2%的鹽酸洗滌提取試樣,過濾,濾液移入量瓶中,共3～5次,最后用2%的鹽酸定容.取1.00mL試液測定.米糠:準確稱取米糠10g,放入燒杯中,加入20mL2mol/L的H2SO4溶液,在沸水浴上加熱10min,冷卻后過濾提取液,