溫郁金倍半類化學(xué)成分及指紋圖譜研究

溫郁金倍半類化學(xué)成分及指紋圖譜研究

姜科生姜屬植物溫郁金屬、高.擾動(dòng)和勵(lì)磁物質(zhì)。c.lighter是一種三醇中藥植物。干燥的根為郁金香，干燥的根為假指甲，干燥的根為鮮綠色。這些物質(zhì)在蒸汽中提取的翠盛物元通常被稱為煥葉油。溫郁金主產(chǎn)于浙江瑞安,為著名的“浙八味”之一,現(xiàn)代藥理及臨床研究表明,溫郁金具有抗腫瘤、降血脂、抗輻射及保肝等多種藥理活性。為了更好地控制溫郁金的質(zhì)量,筆者現(xiàn)圍繞其主要化學(xué)成分的含量測(cè)定及指紋圖譜研究作一綜述。1主要化學(xué)成分1.1倍半類化合物倍半萜類是溫郁金揮發(fā)油的主要活性成分,到目前為止,已分離得到約40多個(gè)倍半萜類化合物,常見(jiàn)的有吉馬酮、莪術(shù)二酮、莪術(shù)酮、莪術(shù)醇、牻牛兒酮等。1.2姜黃素類化合物姜黃素類化合物是溫郁金中另一類重要成分,主要指二苯基庚烴類化合物,也包含個(gè)別戊烴類化合物,根據(jù)苯環(huán)上有無(wú)羥基可分為酚性和非酚性兩類。目前已經(jīng)分離并鑒定了19個(gè)姜黃素類化合物,其中以姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素最為常見(jiàn)。結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。2主要成分含量的測(cè)定2.1高效液相色譜法研究溫郁金的揮發(fā)油俗稱莪術(shù)油,是其最重要的活性成分之一。近年來(lái),隨著其藥理活性的深入研究,越來(lái)越多的學(xué)者運(yùn)用先進(jìn)的分析儀器和分析方法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定,文獻(xiàn)報(bào)道的高效液相色譜(HPLC)法較多。2.1.1揮發(fā)油及溫郁金含量測(cè)定潘氏等參考《中華人民共和國(guó)藥典》(以下稱“《藥典》”)方法測(cè)定溫郁金不同部位:溫莪術(shù)(主根莖)、姜黃(側(cè)根莖)、溫郁金(塊根)、溫郁金葉、溫莪術(shù)鮮芽揮發(fā)油含量,采用HPLC法測(cè)定揮發(fā)油中莪術(shù)醇含量,發(fā)現(xiàn)溫莪術(shù)提油率和莪術(shù)醇含量均較高,而溫郁金提油率雖較低,但油中莪術(shù)醇含量較高,宜研究利用。另外,潘氏等還參照《藥典》法提取溫莪術(shù)鮮品中的揮發(fā)油并測(cè)定其不同生長(zhǎng)時(shí)期的含油量,并運(yùn)用RP-HPLC法測(cè)定揮發(fā)油中莪術(shù)醇含量。結(jié)果表明,不同生長(zhǎng)期的溫莪術(shù)鮮品中揮發(fā)油含量在0.471%~0.820%(g/g)之間,揮發(fā)油中莪術(shù)醇含量在0.862%~1.380%(g/g)之間。研究表明,生長(zhǎng)期長(zhǎng)的溫莪術(shù)中揮發(fā)油及油中莪術(shù)醇的含量均高于生長(zhǎng)期短的溫莪術(shù),表明生長(zhǎng)期的長(zhǎng)短會(huì)影響溫莪術(shù)中揮發(fā)油和莪術(shù)醇有效成分的積累。何氏等采用HPLC法測(cè)定溫莪術(shù)和溫郁金中牻牛兒酮的含量,建立的方法簡(jiǎn)便易行,其中主根莖中牻牛兒酮的含量高于塊根,可作為溫莪術(shù)、溫郁金藥材的質(zhì)量控制方法。李氏等首次采用HPLC法測(cè)定不同郁金中吉馬酮和莪術(shù)二酮的總量,發(fā)現(xiàn)瑞安沙洲村一組吉馬酮和莪術(shù)二酮的總量是二組的2倍多,這為郁金類藥材質(zhì)量控制提供了一定的理論依據(jù)。2.1.2醋酸乙酯的分離純化根據(jù)揮發(fā)油成分的特性,近年出現(xiàn)了運(yùn)用氣相色譜(GC)法及氣相-質(zhì)譜(GC-MS)法測(cè)定溫郁金中揮發(fā)油含量的報(bào)道。朱氏等采用毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定溫郁金中吉馬酮的含量,提取揮發(fā)油時(shí)在側(cè)管加入2mL醋酸乙酯提取結(jié)果較理想,而以HP-5毛細(xì)管柱分離效果最好。CaoJie等分別采用不同的提取方法,以水蒸氣蒸餾、固相微萃取、頂空液相微萃取對(duì)溫郁金揮發(fā)油進(jìn)行提取,提取物采用GC-MS測(cè)定。結(jié)果表明,固相微萃取與傳統(tǒng)的水蒸氣提取結(jié)果一致,而且固相微萃取時(shí)間短,所需樣品少,能夠更簡(jiǎn)便地測(cè)定揮發(fā)油。頂空氣相微萃取采用在線提取、在線測(cè)定,不僅結(jié)果可信,而且成本低、萃取劑的選擇空間大、所需樣品少,且可以直接利用藥品粉末,使其成為最快速的測(cè)定方法。DengChunhui等采用微波萃取技術(shù)提取樣品,然后用頂空氣相方法進(jìn)行含量測(cè)定,分析溫郁金中揮發(fā)性成分的含量,為藥材質(zhì)量控制提供了一種更簡(jiǎn)捷環(huán)保的方法。2.2去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素姜黃素類作為姜黃屬植物的特色成分,以姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素最為常見(jiàn)。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外對(duì)溫郁金姜黃素類化合物的研究非?；钴S,所見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道含量測(cè)定方法也主要集中于此3種。2.2.1姜黃素類化合物的提取朱氏等采用HPLC法對(duì)莪術(shù)3種不同來(lái)源的不同炮制品中姜黃素含量進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明,4種炮制品中醋莪術(shù)中姜黃素含量最大,其中又以溫郁金中姜黃素含量最高,為溫郁金炮制工藝和質(zhì)量控制提供了依據(jù)。彭氏等用HPLC法測(cè)定了姜黃、莪術(shù)、郁金中姜黃素、脫甲氧基姜黃素和雙脫甲氧基姜黃素3種主要姜黃素類化合物含量,選擇姜黃素類化合物的最大吸收波長(zhǎng)420nm作為檢測(cè)波長(zhǎng),靈敏度高,干擾少。劉氏等確立了郁金中姜黃素的優(yōu)化提取條件,即用15倍藥材量的60%乙醇回流提取1h,提取1次。建立了姜黃素的HPLC含量測(cè)定方法,精密易行,為尋找提取郁金藥材中姜黃素類化合物的最佳工藝提供了依據(jù)。2.2.2氧基姜黃素和雙脫甲氧基姜黃素的合成薛氏等借助于環(huán)糊精衍生物單-6-O-苯基胺甲?；?β-CD,利用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法對(duì)郁金中所含的姜黃素、脫甲氧基姜黃素和雙脫甲氧基姜黃素3種姜黃素類化合物進(jìn)行了分離研究和含量測(cè)定。最佳試驗(yàn)條件是,硼砂緩沖液濃度為40mmol/L、pH9.0、單-6-O-苯基胺甲酰基-β-CD的濃度為9mmol/L。3種姜黃素類化合物得到基線分離,測(cè)得雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的含量分別為0.40%、0.57%和0.31%。3指紋譜3.1指紋圖譜的建立及相似度評(píng)價(jià)色譜方法是指紋圖譜的主流方法。陳氏等根據(jù)溫郁金所含化學(xué)成分的特性,用6批溫郁金藥材得到GC圖譜,通過(guò)國(guó)家藥典委員會(huì)“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件”,提取出藥材的共有模式作為對(duì)照指紋圖譜,共有22個(gè)色譜峰是6批藥材所共有的,以此確定為共有指紋峰。GC指紋圖譜共有模式的建立,為控制溫郁金藥材質(zhì)量提供了一種新的思路。楊氏等運(yùn)用GC-MS分析了3種基原的18個(gè)莪術(shù)樣品,所得圖譜采用“中藥色譜指紋圖譜計(jì)算機(jī)相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件”進(jìn)行模式分析及相似度計(jì)算。通過(guò)質(zhì)譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照檢視出主要特征峰成分,并根據(jù)主要特征成分對(duì)18個(gè)樣品進(jìn)行SPSS聚類分析?；诰垲惙治鼋Y(jié)果,建立了溫郁金和蓬莪術(shù)的指紋圖譜共有模式。王氏等采用GC色譜法建立指紋圖譜,并用GC-MS法確定指紋圖譜特征峰,采用指紋圖譜全譜相似度計(jì)算方法評(píng)價(jià)指紋圖譜的相似性。通過(guò)GC-MS定性出18個(gè)成分,以黃絲郁金的指紋圖譜為對(duì)照?qǐng)D譜,按占總峰面積2%以上的吸收峰的豐度確定8個(gè)吸收峰為郁金指紋圖譜的特征峰。鄒氏等通過(guò)自身正交投影法對(duì)溫郁金揮發(fā)油HPLC指紋圖譜的峰純度進(jìn)行了鑒定,用目標(biāo)色譜峰的光譜進(jìn)行投影,以投影前后光譜的夾角余弦作為依據(jù)來(lái)鑒別目標(biāo)色譜峰純度,識(shí)別出吉馬酮等2個(gè)純色譜峰。李氏等從藥材整體色譜圖入手,首次建立了溫郁金HPLC指紋圖譜,選取了11個(gè)特征峰構(gòu)成了溫郁金的指紋圖譜,指認(rèn)出4號(hào)峰為莪術(shù)二酮,8號(hào)峰為吉馬酮。劉氏等采用HPLC法,以牻牛兒酮為對(duì)照,通過(guò)對(duì)19批浙江不同產(chǎn)地溫郁金樣品測(cè)定,標(biāo)定了14個(gè)共有峰,并通過(guò)“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件”和聚類分析等輔助手段,建立了浙江產(chǎn)溫郁金揮發(fā)油的HPLC指紋圖譜。3.2郁金的各種鑒定方法黃氏等采用傅里葉變換紅外光譜法(FTIR)對(duì)不同品種的郁金進(jìn)行直接測(cè)定,并進(jìn)行聚類分析;采用差熱分析法(DTA)對(duì)4種樣品進(jìn)行分析研究。FTIR聚類分析結(jié)果顯示,4個(gè)樣品被分為2組,溫郁金、黃絲郁金及桂郁金為一組,川郁金單獨(dú)為一組;差熱分析結(jié)果顯示4種藥材的DTA曲線均有區(qū)別,可以建立用FTIR/聚類分析及結(jié)合DTA對(duì)郁金的不同品種進(jìn)行鑒定。宿氏等建立了FTIR鑒別姜黃屬4種常用藥材姜黃、黃絲郁金、綠絲郁金、莪術(shù),以乙醇、無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚提取,提取物用氯仿充分溶解后,采用液膜法分別測(cè)定400~4000cm范圍內(nèi)各提取物的紅外吸收光譜,依據(jù)各藥材的各自特征吸收峰鑒別各藥材。3.3基于rapd和ssap的溫郁金親緣關(guān)系研究王氏等在提取純化溫郁金DNA的基礎(chǔ)上,利用PCR擴(kuò)增技術(shù),對(duì)Mg2+、dNTP、模板DNA、引物、Taq聚合酶等反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化,建立了溫郁金基因組DNA的RAPD-PCR最佳反應(yīng)體系;另外,還對(duì)蓬莪術(shù)、廣西莪術(shù)和溫郁金共8個(gè)居群的37個(gè)樣本ISSR-PCR分析,用POPGEN32軟件分析其遺傳相似系數(shù)及遺傳距離,UPGMA方法聚類,構(gòu)建親緣關(guān)系系統(tǒng)圖。陳氏等結(jié)合化學(xué)和形態(tài)資料,對(duì)溫郁金和川郁金進(jìn)行了RAPD研究,探討用RAPD技術(shù)解決川郁金和溫郁金的植物和藥物分類存在的問(wèn)題和爭(zhēng)議。冷氏等采用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)不同產(chǎn)地溫郁金樣品進(jìn)行了基因組DNA多態(tài)性分析,構(gòu)建出不同產(chǎn)地溫郁金的DNA指紋圖譜,探討利用SRAP技術(shù)在溫郁金親緣關(guān)系研究中的可行性。該試驗(yàn)研究的對(duì)象涉及范圍較廣,基本上涵蓋了目前全國(guó)溫郁金的主要種植地區(qū)。從研究結(jié)果來(lái)看,溫郁金不同產(chǎn)地樣品間的遺傳相似系數(shù)均在0.89以上,表明各樣品間的親緣關(guān)系近,遺傳變異小,較為保守。陶氏等曾利用ISSR標(biāo)記對(duì)溫州地區(qū)的溫郁金主要種植區(qū)進(jìn)行了遺傳多樣性研究,表明其親緣關(guān)系較近,遺傳穩(wěn)定,與上述研究結(jié)果一致。4中藥質(zhì)量的評(píng)價(jià)與檢測(cè)現(xiàn)行的溫郁金質(zhì)量控制方法中只考慮眾多復(fù)雜成分中個(gè)別成分的含量測(cè)定,至今為止還沒(méi)有一種方法同時(shí)測(cè)定溫郁金中揮發(fā)油和姜黃素類成分。單指標(biāo)成分含量測(cè)定不能反映藥材有效成分整體的協(xié)同作用,未把各中藥材所含的整體化學(xué)信息與其臨床療效相結(jié)合,難以準(zhǔn)確反映中藥材的質(zhì)量。目前,多指標(biāo)成分同時(shí)測(cè)定越來(lái)越成為當(dāng)今國(guó)際流行的中草藥