豬瘟乳前免疫相關(guān)試驗(yàn)

豬瘟乳前免疫相關(guān)試驗(yàn)

豬瘟疫的牛奶免疫是中國(guó)許多豬繁殖地使用的一種豬繁殖力免疫方法。1979年，臺(tái)灣的賴(lài)秀興和法國(guó)的coitiew提出“豬磺鹿前免疫不僅可以避免母性抗體的干擾，還可以獲得對(duì)豬瘟疫的終身免疫”。其實(shí),對(duì)于豬瘟乳前免疫問(wèn)題,國(guó)際學(xué)術(shù)界一直頗具爭(zhēng)議。在養(yǎng)豬發(fā)達(dá)國(guó)家,學(xué)者們大都對(duì)其持懷疑態(tài)度。然而,這一國(guó)際學(xué)術(shù)領(lǐng)域爭(zhēng)議頗大的問(wèn)題,在我國(guó)卻得到高度一致的肯定。學(xué)術(shù)文獻(xiàn)庫(kù)中有關(guān)乳前免疫的論文,99%以上都是贊同豬瘟乳前免疫。以致傳統(tǒng)教科書(shū)均認(rèn)為豬瘟乳前免疫是排除母源抗體干擾、迅速提高仔豬豬瘟抗體水平和整齊度的有效方法。在豬瘟常發(fā)地區(qū),無(wú)論是集約化豬場(chǎng)還是個(gè)體養(yǎng)豬戶(hù),推行乳前免疫是控制豬瘟發(fā)生和流行的有效措施。而對(duì)于臨床大量存在的乳前免疫效果不佳或免疫失敗現(xiàn)象,則大都簡(jiǎn)單地歸因于未嚴(yán)格按照技術(shù)操作要求去落實(shí)。至今,乳前免疫在我國(guó)似有濫用之勢(shì)。有的學(xué)者已經(jīng)開(kāi)始鼓吹把乳前免疫應(yīng)用到高致病性豬藍(lán)耳病和偽狂犬病等疾病的預(yù)防,似乎乳前免疫是解決豬場(chǎng)各種疑難雜癥的“靈丹妙藥”。這種現(xiàn)象,值得警惕!1豬鼠疫基因的研究1.1成年豬的及時(shí)分離豬的免疫系統(tǒng)雖然已在子宮內(nèi)發(fā)育,一出生便可行使其功能,但初生仔豬的免疫功能實(shí)際上遠(yuǎn)未成熟,沒(méi)有成年豬那么高效。與成年豬相比,新生仔豬吞噬細(xì)胞的吞噬活性較低。1日齡仔豬肺泡巨噬細(xì)胞的氧化殺菌能力差,至7日齡時(shí),各項(xiàng)功能才可達(dá)到成年水平。新生仔豬的肺血管內(nèi)巨噬細(xì)胞數(shù)量很少,到30日齡時(shí)可增加到原來(lái)的14倍之多。1.2發(fā)病東南角下豬企檢測(cè)結(jié)果2009年3—4月,恩平市XJ豬場(chǎng)35頭初產(chǎn)母豬所產(chǎn)近200頭仔豬出生后相繼出現(xiàn)“抖抖病”癥狀。窩發(fā)病數(shù)為產(chǎn)活仔數(shù)的40%~100%不等。解剖發(fā)病仔豬,幾乎都有腎臟和膀胱針尖狀出血病變。吸食初乳(站立不穩(wěn)不會(huì)吸吮的仔豬人工灌服初乳)后,癥狀一般都能逐漸緩解,癥狀較輕者1周后恢復(fù)正常,嚴(yán)重者約4周后恢復(fù)正常,病死率為15%。因該場(chǎng)母豬產(chǎn)前4周做豬瘟免疫(每頭母豬5頭份),懷疑可能是豬瘟疫苗質(zhì)量問(wèn)題,后改用另一藥廠的豬瘟疫苗,仍是產(chǎn)前4周免疫,“抖抖病”癥狀隨之消失。根據(jù)發(fā)病仔豬的解剖結(jié)果和豬瘟疫苗的使用情況,基本可以確診這種“抖抖病”癥狀完全是豬瘟疫苗使用不當(dāng)所致,因疫苗毒力過(guò)強(qiáng),仔豬在胎兒期感染了疫苗毒。該場(chǎng)獸醫(yī)在這些發(fā)病仔豬吸食初乳前,隨機(jī)抽取8頭做豬瘟抗體檢測(cè),結(jié)果都未檢測(cè)到豬瘟抗體(表1),說(shuō)明其在吸食初乳前都沒(méi)有豬瘟抗體產(chǎn)生。這一檢測(cè)結(jié)果從臨床角度表明,仔豬最早從產(chǎn)前28d直到出生,其免疫功能仍未健全。因母豬在產(chǎn)前4周已做過(guò)豬瘟免疫,仔豬在胎盤(pán)內(nèi)接觸并感染豬瘟苗毒的時(shí)間接近28d。但在這28d,仔豬一直都未產(chǎn)生豬瘟抗體。1.3免疫抗體的免疫接種首先是乳前免疫能否產(chǎn)生有效免疫應(yīng)答的問(wèn)題。豬瘟乳前免疫,一般要求仔豬一出生即接種豬瘟疫苗,2h后吃初乳。在仔豬免疫功能并不健全的情況下進(jìn)行免疫接種,仔豬能否產(chǎn)生主動(dòng)免疫生成豬瘟免疫抗體以抵抗豬瘟強(qiáng)毒攻擊,存在很大的不確定性。其次是誘導(dǎo)仔豬產(chǎn)生免疫耐受性的風(fēng)險(xiǎn)問(wèn)題。有關(guān)乳前免疫導(dǎo)致免疫耐受性的問(wèn)題,樊福好博士已于2008年做過(guò)詳細(xì)闡述,這里不再贅述。豬瘟乳前免疫,在仔豬免疫功能并不健全的情況下接種豬瘟疫苗(特別是當(dāng)前很多豬場(chǎng)都喜歡大劑量接種),存在誘導(dǎo)其對(duì)豬瘟疫苗產(chǎn)生免疫耐受性的巨大風(fēng)險(xiǎn)。2免疫調(diào)度測(cè)定早在2006年初,筆者在對(duì)珠海市NZ豬場(chǎng)仔豬豬瘟抗體跟蹤監(jiān)測(cè)過(guò)程中就曾發(fā)現(xiàn),經(jīng)過(guò)豬瘟乳前免疫的仔豬,其母源抗體消退快,而主動(dòng)免疫抗體卻無(wú)法有效上升。當(dāng)時(shí)沒(méi)有認(rèn)真保存好完整的原始檢測(cè)數(shù)據(jù)。2008—2009年,筆者與相關(guān)技術(shù)人員在珠海市NZ豬場(chǎng)設(shè)計(jì)并完成了豬瘟乳前免疫相關(guān)試驗(yàn),過(guò)程及結(jié)果如下。2.1試驗(yàn)動(dòng)物胎次、體況及預(yù)產(chǎn)日期接近的臨產(chǎn)母豬20頭,及其所產(chǎn)日齡相同或接近、健康、大小均勻的仔豬60頭。2.2細(xì)胞源和制備試驗(yàn)用疫苗為廣東永順生物制藥有限公司豬瘟活疫苗(細(xì)胞源,每頭份1500RID,批號(hào):08115)。豬瘟抗體檢測(cè)采用美國(guó)IDEXX豬瘟抗體ELISA檢測(cè)試劑盒,批號(hào):43220-R141。2.3試驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)豬血清素質(zhì)檢測(cè)20頭供試母豬打耳號(hào)編號(hào),逐頭前腔靜脈采血,做豬瘟抗體ELISA檢測(cè)。從中挑選豬瘟抗體水平接近的母豬12頭,隨機(jī)分為3組。乳前免疫組每窩挑選5頭健康仔豬作試驗(yàn)豬并打耳號(hào)編號(hào),一出生即每頭肌肉注射豬瘟疫苗2頭份,2h后再吃初乳,然后分別于35日齡和70日齡每頭肌肉注射豬瘟疫苗5頭份;常規(guī)免疫組每窩挑選5頭健康仔豬作試驗(yàn)豬并打耳號(hào)編號(hào),分別于35日齡和70日齡每頭肌肉注射豬瘟疫苗5頭份;對(duì)照組每窩挑選5頭健康仔豬作試驗(yàn)豬并打耳號(hào)編號(hào),分別于35日齡和70日齡每頭肌肉注射生理鹽水3mL。3組仔豬統(tǒng)一于7日齡、21日齡、35日齡、70日齡和98日齡前腔靜脈采血(35日齡和70日齡采血均在注射豬瘟疫苗或生理鹽水之前進(jìn)行),分離血清送珠海市安富來(lái)畜牧獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)公司做豬瘟抗體檢測(cè)。檢測(cè)值0.30以下為陰性,0.30~0.40為可疑陽(yáng)性,0.40以上為陽(yáng)性。2.4結(jié)果和分析2.4.1乳前和常規(guī)免疫豬檔案檢測(cè)結(jié)果由表2可得,乳前免疫組仔豬(不包括2頭死亡豬)70日齡豬瘟抗體均值為0.5458,常規(guī)免疫組(不包括2頭死亡豬)為0.5400,兩者差異不大。乳前免疫組豬瘟抗體合格率77.78%(14/18),常規(guī)免疫組為94.44%(17/18),差異不顯著。乳前免疫組豬瘟抗體值方差為0.0266,常規(guī)免疫組為0.0090,差異顯著。由表3可得,乳前免疫組仔豬(不包括2頭死亡豬)98日齡豬瘟抗體均值為0.5893,常規(guī)免疫組(不包括3頭死亡豬)為0.5513,差異不顯著。乳前免疫組豬瘟抗體合格率77.78%(14/18),常規(guī)免疫組為76.47%(13/17),兩者非常接近,均達(dá)到群體合格率要求。乳前免疫組豬瘟抗體值方差為0.0674,常規(guī)免疫組為0.0293,差異不顯著。從70日齡的檢測(cè)結(jié)果來(lái)看,免疫耐受性問(wèn)題似確實(shí)存在。在35日齡免疫過(guò)豬瘟疫苗35d后,乳前免疫組仔豬不但抗體合格率比常規(guī)免疫組低,而且離散度(方差)也比常規(guī)免疫組大。兩組仔豬抗體合格率差異不顯著,并不表示完全沒(méi)有差異,極其可能的原因是試驗(yàn)樣本數(shù)量不夠大。但從98日齡的檢測(cè)結(jié)果來(lái)看,兩組仔豬在70日齡免疫豬瘟疫苗28d后,其抗體均值、合格率和離散度都非常接近。這種結(jié)果又似乎說(shuō)明仔豬存在免疫耐受性的可能性不大。2.4.2豬合成母源抗體的相關(guān)性分析進(jìn)一步對(duì)常規(guī)免疫組和對(duì)照組母豬產(chǎn)前豬瘟抗體值和所產(chǎn)仔豬7日齡豬瘟母源抗體值做相關(guān)性分析,r=0.4101,0.4≤|r|<0.7,仔豬7日齡豬瘟母源抗體值與其母產(chǎn)前豬瘟抗體值呈顯著性相關(guān)。2.4.3豬訓(xùn)母源抗體檢測(cè)由表4可得,乳前免疫組20頭仔豬7日齡豬瘟母源抗體均值為0.7641,常規(guī)免疫組和對(duì)照組39頭仔豬為0.7772,兩者僅相差0.0131或1.69%(0.0131/0.7772),且差異不顯著,說(shuō)明乳前免疫對(duì)豬瘟母源抗體的中和作用非常有限。2.4.4豬不同日齡豬檢驗(yàn)抗體檢測(cè)結(jié)果對(duì)照組仔豬自出生直到98日齡一直未進(jìn)行過(guò)豬瘟免疫,其抗體變化規(guī)律實(shí)際上就是母源抗體的衰退規(guī)律。該組仔豬不同日齡豬瘟抗體情況如表5。本次試驗(yàn)沒(méi)有檢測(cè)42日齡仔豬母源抗體,故42日齡仔豬母源抗體值及合格率用該場(chǎng)后續(xù)的另一次試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果代替。表5數(shù)據(jù)顯示,仔豬母源抗體均值和合格率在35日齡前衰退非常緩慢,35日齡后才開(kāi)始加快。42日齡左右,群體合格率衰退到74.36%,仔豬開(kāi)始逐漸喪失對(duì)豬瘟強(qiáng)毒的抵抗力。2.5結(jié)論和討論2.5.1豬模型中母源抗體的動(dòng)態(tài)這種超強(qiáng)保護(hù)力,首先體現(xiàn)在仔豬豬瘟母源抗體滴度方面。本次試驗(yàn)顯示,仔豬出生后及時(shí)吸食初乳,能獲得與其母幾乎相同的抗體滴度。也即是說(shuō),仔豬出生后通過(guò)吸食初乳,能獲得與其母幾乎完全相同的對(duì)豬瘟強(qiáng)毒的抵抗力。對(duì)大部分仔豬而言,僅僅經(jīng)過(guò)2~3次免疫,其獲得的主動(dòng)免疫抗體滴度遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到通過(guò)吸吮初乳獲得的母源抗體滴度。本次試驗(yàn)中,常規(guī)免疫組仔豬7日齡母源抗體均值為0.7675,經(jīng)過(guò)兩次豬瘟免疫后,98日齡主動(dòng)免疫抗體均值為0.5513。母源抗體均值是主動(dòng)免疫抗體均值的1.39倍,且差異極顯著。生產(chǎn)實(shí)踐中也有同樣的結(jié)果。表6是珠海市NZ豬場(chǎng)2006年對(duì)一批20頭仔豬豬瘟抗體的跟蹤情況。該批仔豬相繼于21日齡和60日齡免疫豬瘟疫苗5頭份。對(duì)比21日齡(初免前)和95日齡的檢測(cè)結(jié)果,只有2頭仔豬95日齡主動(dòng)免疫抗體滴度高于21日齡的母源抗體滴度,6頭仔豬持平,其余11頭仔豬主動(dòng)免疫抗體滴度都低于母源抗體滴度。對(duì)大部分豬場(chǎng)而言,母源抗體對(duì)仔豬的保護(hù)一般都能維持到仔豬出生后35~42d。本次試驗(yàn)中,母源抗體一直到仔豬35日齡,合格率仍高達(dá)100%。表7是珠海市NZ豬場(chǎng)2007年對(duì)另一批仔豬豬瘟母源抗體的跟蹤結(jié)果,從中我們也可以看到,直到35日齡,該批仔豬母源抗體不但合格率100%,而且滴度還相當(dāng)高,1∶160及以上占68.42%。2008年,張新成等對(duì)北京地區(qū)3個(gè)豬場(chǎng)仔豬豬瘟母源抗體進(jìn)行跟蹤。3個(gè)豬場(chǎng)中,一個(gè)豬場(chǎng)42日齡仔豬母源抗體合格率高達(dá)100%,另一個(gè)豬場(chǎng)也高達(dá)88.6%,詳見(jiàn)表8。2.5.2豬檔案和抗體檢測(cè)乳前免疫是一項(xiàng)要求非常嚴(yán)格、并且費(fèi)時(shí)費(fèi)力的工作,不是管理非常到位的豬場(chǎng),根本無(wú)法真正做好。撇開(kāi)免疫耐受性問(wèn)題不談,豬瘟乳前免疫,最起碼完全沒(méi)有必要。由于仔豬母源抗體值與母豬抗體值顯著性相關(guān),完全可以通過(guò)加強(qiáng)對(duì)母豬的免疫來(lái)提高仔豬對(duì)豬瘟的免疫力。同時(shí),由于母源抗體對(duì)仔豬的保護(hù)可以維持到35~42日齡,此時(shí)仔豬的免疫系統(tǒng)已經(jīng)非常健全,我們完全有充足的時(shí)間來(lái)對(duì)仔豬免疫,使仔豬及時(shí)建立起堅(jiān)強(qiáng)的主動(dòng)免疫力。理論上,仔豬最佳的初免時(shí)間是群體母源抗體合格率衰退到75%。如果豬場(chǎng)擔(dān)心這時(shí)才初免,仔豬可能會(huì)因母源抗體繼續(xù)衰退、主動(dòng)免疫抗體又未能有效上升從而失去對(duì)豬瘟強(qiáng)毒的免疫力,那么把初免時(shí)間適當(dāng)提前,在母源抗體較高時(shí)進(jìn)行初免,似未嘗不可。母源抗體雖然會(huì)中和疫苗中部分苗毒,但并不影響巨噬細(xì)胞對(duì)抗原的遞呈及抗體生成,只要適當(dāng)加大初免劑量(如廣東永順生物制藥有限公司豬瘟零免細(xì)胞苗說(shuō)明書(shū)推薦的4頭份),同樣能令仔豬產(chǎn)生較好的主動(dòng)免疫。以珠海市NZ豬場(chǎng)為例,該場(chǎng)仔豬35日齡母源抗體值都非常高,幾乎每次檢測(cè)合格率都是100%,近3年來(lái)一直執(zhí)行“35-70”豬瘟免疫程序,效果都非