甲氧芐啶和二甲氧芐啶聯(lián)合西藥治療雞球蟲(chóng)病的研究

甲氧芐啶和二甲氧芐啶聯(lián)合西藥治療雞球蟲(chóng)病的研究

球蟲(chóng)病是一種常見(jiàn)的一起嚴(yán)重疾病。目前,防治雞球蟲(chóng)病的主要手段還是依靠抗球蟲(chóng)藥物。但是,抗球蟲(chóng)藥物的使用也帶來(lái)了一些問(wèn)題。最突出的一個(gè)問(wèn)題是球蟲(chóng)很容易對(duì)藥物產(chǎn)生耐藥性,據(jù)報(bào)道,幾乎所有的藥物都有耐藥蟲(chóng)株的出現(xiàn)。為了避免或延緩球蟲(chóng)耐藥性的產(chǎn)生,人們多采用增加藥物濃度、輪換用藥、穿梭用藥及配合用藥等措施。配合用藥可以增加藥物的療效,降低藥物用量,減少不良反應(yīng),也可以延緩耐藥性的產(chǎn)生,并且可以降低藥物的殘留量。因此,進(jìn)行抗球蟲(chóng)藥物配合應(yīng)用方面的研究具有一定的現(xiàn)實(shí)意義?；前粪趷哼?SQ)、磺胺氯吡嗪鈉(Esb3)是常用的磺胺類(lèi)抗球蟲(chóng)藥,甲氧芐啶(TMP)和二甲氧芐啶(DVD)是常用的磺胺增效劑,磺胺藥與增效劑聯(lián)合應(yīng)用可以在不同的環(huán)節(jié)抑制細(xì)菌和球蟲(chóng)的葉酸代謝,因此應(yīng)該存在相互之間的協(xié)同作用。本試驗(yàn)以TMP和DVD分別與不同濃度的SQ和Esb3配伍應(yīng)用,觀察對(duì)人工感染雛雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的治療效果,觀察不同濃度SQ和Esb3對(duì)人工感染柔嫩艾美耳球的治療效果,觀察TMP和DVD對(duì)SQ和Esb3抗雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的增效作用,并比較TMP和DVD之間對(duì)SQ和Esb3抗雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的增效作用的差異。1材料和方法1.1材料表面1.1.1藥物、制劑和儀器磺胺喹ue15e啉,浙江黃巖獸藥廠生產(chǎn),批號(hào)20030804。敵菌凈,如皋市信宇獸藥材料有限公司生產(chǎn),批號(hào)440199。乳酸甲氧芐啶(trimethoprim),佛山市南海北沙制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào)740512007?；前仿冗拎衡c,江都市動(dòng)物藥廠生產(chǎn),批號(hào)20060208。1.1.2飼養(yǎng)方法海蘭褐雛雞,由洛陽(yáng)公華禽業(yè)有限公司提供,飼養(yǎng)于河南科技大學(xué)動(dòng)物藥業(yè)有限公司實(shí)驗(yàn)室,統(tǒng)一采用40W燈泡供暖及照明,箱養(yǎng)密度均勻,自由飲水?dāng)z食,至10日齡供試驗(yàn)用。1.1.3球蟲(chóng)囊柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊,由河南科技大學(xué)禽病室在臨床采集,并分離鑒定,試驗(yàn)前繁殖擴(kuò)增。1.2方法1.2.1mtp/dv的配伍比對(duì)按每組12只隨機(jī)分為16組,其中4個(gè)對(duì)照組(0.02%SQ單獨(dú)應(yīng)用和0.06%Esb3單獨(dú)應(yīng)用的藥物對(duì)照組、1個(gè)陽(yáng)性對(duì)照組和1個(gè)空白對(duì)照組),其余各劑量組分別以TMP和DVD按1∶5的比例與SQ配伍,SQ的濃度分別為0.05%、0.02%和0.01%,拌料給藥;以TMP和DVD按1∶5的比例與Esb3配伍,Esb3的濃度為0.12%、0.06%和0.03%,拌料給藥。1.2.2感染卵囊人工感染初級(jí)柔嫩艾美耳球蟲(chóng),除不感染也不給藥組外,其余各組雛雞經(jīng)口感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊,劑量為5×104個(gè)/只。1.2.3病料及抗球蟲(chóng)指數(shù)接種球蟲(chóng)卵囊后48h,開(kāi)始給藥,全部采取拌料混飼給藥。劑量參照文獻(xiàn)設(shè)計(jì)。藥物與飼料混勻后混飼,自由攝食和飲水。每天觀察并記錄雞群精神狀況、采食量和糞便情況等。對(duì)死亡雞只稱(chēng)重、剖檢,確診是否因感染球蟲(chóng)而死亡,并做好記錄。試驗(yàn)自接種柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊后開(kāi)始算起,第7天末對(duì)各組存活雞只稱(chēng)重、處死。記錄各組雞存活率、相對(duì)增重率、盲腸病變值、盲腸卵囊值(用蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)),并計(jì)算抗球蟲(chóng)指數(shù)。存活率(%)、相對(duì)增重率、病變記分按文獻(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)判定;卵囊值按文獻(xiàn)的方法計(jì)算;抗蟲(chóng)指數(shù)(Anticoccidialindex;ACI)按美國(guó)默克公司推薦的公式計(jì)算。ACI=(相對(duì)增重率+存活率)-(盲腸病變值+盲腸卵囊值)存活率=存活雞數(shù)/試驗(yàn)開(kāi)始雞數(shù)×100%相對(duì)增重率=實(shí)驗(yàn)組平均每只雞增重(g)/不感染不給藥組每只雞平均增重(g)×100%盲腸病變值=盲腸平均病變積分×10病變計(jì)分標(biāo)準(zhǔn):0分:無(wú)肉眼病變;1分:盲腸壁有很少量散在的淤血點(diǎn),腸壁不增厚,內(nèi)容物正常。2分:病變數(shù)量較多,盲腸內(nèi)容物明顯帶血,盲腸壁少增厚,內(nèi)容物正常。3分:盲腸內(nèi)多量血液或有盲腸芯(血凝塊或有灰白色干酪樣的香蕉形塊狀物)盲腸壁肥厚明顯,盲腸中央糞便含量少。4分:因充滿大量血液和腸芯而盲腸腫大,腸芯中有糞渣或不含,死亡雞只也記為+4分。盲腸卵囊值:0表示0萬(wàn)個(gè)～10萬(wàn)個(gè)/雙側(cè)盲腸;1表示10萬(wàn)個(gè)～100萬(wàn)個(gè)/雙側(cè)盲腸;10表示101萬(wàn)個(gè)～500萬(wàn)個(gè)/雙側(cè)盲腸;20表示501萬(wàn)個(gè)～1000萬(wàn)個(gè)/雙側(cè)盲腸;40表示1100萬(wàn)以上/雙側(cè)盲腸。1.2.4評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)抗柔嫩艾美耳球蟲(chóng)指數(shù)<120為無(wú)效;120～160為弱效;160～180為中效;180以上為強(qiáng)效。2結(jié)果2.1tmp和保鮮劑最佳劑量的確定,其與現(xiàn)有藥物組的抗球蟲(chóng)增效作用比較結(jié)果見(jiàn)表1。TMP與0.05%、0.02%、0.01%濃度SQ配伍的劑量組的ACI值分別為196、181和177;DVD與0.05%、0.02%、0.01%濃度SQ配伍的劑量組的ACI值分別為194、194和177,與單獨(dú)應(yīng)用0.02%SQ的藥物對(duì)照組比較,加TMP或DVD后,抗球蟲(chóng)效果明顯提高;從ACI值看不出TMP和DVD之間對(duì)不同濃度的SQ抗球蟲(chóng)增效作用有何差異。TMP+0.02%SQFIC值為181,DVD+0.02%SQACI值為194,與SQ聯(lián)用的增效作用,DVD比TMP似乎更具優(yōu)越性。單獨(dú)應(yīng)用0.06%Esb3藥物對(duì)照組的ACI值為165,抗球蟲(chóng)效果為中效;TMP與0.12%、0.06%、0.03%濃度Esb3配伍的劑量組的ACI值分別為192、188和181,抗球蟲(chóng)效果均為高效,三組均高于不加增效劑的藥物對(duì)照組;DVD與0.12%、0.06%、0.03%濃度Esb3配伍的劑量組的ACI值分別為191、187和185,抗球蟲(chóng)效果也均為高效,也均高于不加增效劑的藥物對(duì)照組。2.2兩組sq-lq-msq藥物對(duì)照組aci值的比較結(jié)果見(jiàn)表1。DVD+0.01%SQ和TMP+0.01%SQ的ACI值分別為177和177,接近0.02%SQ藥物對(duì)照組ACI值(181),顯示有接近2倍的增效作用;TMP+0.03%Esb3和DVD+0.03%Esb3組的ACI值分別為181和185,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于0.06%Esb3藥物對(duì)照組(162)。增效作用應(yīng)在2倍以上。2.3盲腸病變值結(jié)果見(jiàn)表1。聯(lián)合用藥的高劑量組其盲腸病變值遠(yuǎn)低于低劑量組和單獨(dú)用藥組。0.02%SQ+TMP的盲腸病變值為4.2遠(yuǎn)小于0.02%SQ組的盲腸病變值18,經(jīng)非配對(duì)進(jìn)行兩個(gè)樣本平均數(shù)的差異顯著性檢驗(yàn)(t檢驗(yàn)):0.02%SQ+DVD組與0.02%SQ組差異極顯著(P<0.01);在Esb3+DVD組中,0.06%Esb3+DVD組與0.06%Esb3組差異極顯著(P<0.01)。3tmp和dv對(duì)esb3和sq抗球蟲(chóng)的作用本試驗(yàn)所用柔嫩艾美耳球蟲(chóng)蟲(chóng)種是從病雞盲腸中采取的,試驗(yàn)前繁殖擴(kuò)增。Esb3藥物對(duì)照組劑量(即以0.06%的濃度拌料)是依照文獻(xiàn)設(shè)計(jì)的,但從ACI值(162)來(lái)看,抗球蟲(chóng)效果不太理想,顯示球蟲(chóng)對(duì)Esb3的敏感性不高,可能是球蟲(chóng)對(duì)Esb3已產(chǎn)生了一定的耐藥性。SQ單獨(dú)應(yīng)用的藥物對(duì)照組的劑量為0.02%,略低于文獻(xiàn)推薦的劑量,其ACI值為151,沒(méi)能達(dá)到理想的抗球蟲(chóng)活性。添加TMP和DVD后,抗球蟲(chóng)活性明顯增強(qiáng),顯示出TMP和DVD均能增強(qiáng)Esb3和SQ的抗球蟲(chóng)作用。相同劑量的Esb3和SQ分別添加等比例的TMP和DVD,ACI值的變化不明顯,如0.05%SQ+TMP和0.05%SQ+DVD、0.02%SQ+TMP和0.02%SQ+DVD、0.01%SQ+TMP和0.01%SQ+DVD的ACI值分別為195、194、181和194、177、177;0.03%Esb3+TMP和0.03%Esb3+DVD、0.06%Esb3+TMP和0.06%Esb3+DVD、0.12