刺五加總黃酮提取工藝研究

刺五加總黃酮提取工藝研究

傳統(tǒng)的中醫(yī)刺五加在中醫(yī)臨床應(yīng)用中有著悠久的歷史，其中黃酮類化合物具有廣泛的藥理活性。機(jī)械化學(xué)(mechanochemistry)最早發(fā)源于同生理機(jī)能有關(guān)的生物化學(xué)中機(jī)械運(yùn)動(dòng)能與化學(xué)能的轉(zhuǎn)變,目前主要指通過(guò)擠壓、剪切、摩擦等手段,對(duì)物質(zhì)施加機(jī)械能,從而誘發(fā)其物理化學(xué)性質(zhì)變化,使物質(zhì)與周圍環(huán)境中的固體、液體、氣體發(fā)生化學(xué)變化的現(xiàn)象11.1紫外分光光度計(jì)和冷凍干燥機(jī)WZJ(BFM)-6J振動(dòng)研磨機(jī)(濟(jì)南倍力粉技術(shù)工程有限公司);TU-1900雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);FD-ID冷凍干燥機(jī)(北京博醫(yī)康儀器有限公司);標(biāo)準(zhǔn)分樣篩(河南新鄉(xiāng)康達(dá)新機(jī)械有限公司);LS100Q激光粒度儀(美國(guó)BeckmanCoulter公司)。1.2材料表面刺五加根及根莖(購(gòu)自大連開發(fā)區(qū)大藥房,產(chǎn)地吉林,按照《中國(guó)藥典》鑒定22.1機(jī)械化學(xué)法的輔助提取2.1.1添加劑的選擇刺五加中黃酮類物質(zhì)主要為槲皮素及其相關(guān)的黃酮苷類化合物2.1.2試驗(yàn)溶液的制備用小型中藥粉碎機(jī)將刺五加藥材粉碎至60目,60℃下干燥3h備用(即粗粉,以下同)。取粗粉200g與一定量助劑(Na2.1.3單因素實(shí)驗(yàn)分別考察助劑用量、物料粒度(D2.1.4正交實(shí)驗(yàn)根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,作L2.2其他提取方法包括試劑溶液的制備2.2.1超微粉碎輔助提取取刺五加粗粉200g研磨至粒度D2.2.2物理混合樣品的提取取超微粉碎后的刺五加粉200g(D2.2.3供試品溶液的制備精確稱取刺五加粗粉5.0g,用250ml,75%乙醇回流2h,離心,取上清,沉淀重復(fù)提取2次,合并上清液并濃縮,得浸膏,真空干燥,研碎后加入20ml,95%乙醇,超聲充分溶解,過(guò)濾,濾液作供試品溶液。2.3重量測(cè)定2.3.1對(duì)照品液的制備精密稱取120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品11.3mg,2.0ml無(wú)水乙醇溶解,轉(zhuǎn)入50ml量瓶中,用95%乙醇稀釋至刻度搖勻,即得對(duì)照品液(0.226mg/ml)。精密吸取該液0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0ml,分別置25ml容量瓶中,加水至6ml,加5%(2.3.2測(cè)定總黃酮含量準(zhǔn)確吸取供試品溶液2.0ml,置25ml容量瓶中,按“2.3.1”項(xiàng)的方法,自“加水至6ml”起依法測(cè)定其吸光度,與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照得黃酮質(zhì)量,提取率按下式計(jì)算:%=%——提取率;——經(jīng)換算后提取液中黃酮質(zhì)量(——樣品質(zhì)量(mg)。2.3.3精密度實(shí)驗(yàn)精確量取供試品溶液5份,按“2.3.2”項(xiàng)方法分別測(cè)定總黃酮含量,2.3.4總黃酮含量測(cè)定精確量取已知含量的供試品溶液5份各1ml,分別加入1ml對(duì)照品溶液,按“2.3.2”項(xiàng)方法分別測(cè)定總黃酮含量,回收率均在92.7%～102.0%之間,平均回收率96.1%,2.4統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用33.1不同的預(yù)處理方法對(duì)全球黃酮提取率的影響。結(jié)果如表2所示刺五加與3.2單因素實(shí)驗(yàn)3.2.1參考圖。2.添加劑用量對(duì)提取率的影響助劑的最小用量主要取決于機(jī)械化學(xué)過(guò)程的傳質(zhì)速率及目標(biāo)提取物的性質(zhì),如提取松針三萜酸時(shí),為使三萜酸與堿充分作用,3.2.2圖3顯示了材料粒度對(duì)提取率的影響隨研磨時(shí)間延長(zhǎng),物料粒度減小,助劑與目標(biāo)提取物接觸、作用時(shí)間越長(zhǎng)。粒度由3.2.3乙醇濃度對(duì)提取率的影響機(jī)械化學(xué)法處理后,刺五加總黃酮在水和稀醇溶液(20%,40%乙醇)中的提取率最高(平均為1.68%),隨乙醇濃度增加,提取率逐漸降低(P<0.05)。這表明機(jī)械化學(xué)法可提高刺五加總黃酮在極性溶劑中的溶解性,進(jìn)而可用水或稀醇提取。3.2.4參考圖。5.料溶液比對(duì)提取率的影響隨溶劑用量增大,總黃酮提取率增加,當(dāng)料液比小于1∶50(3.2.5表4顯示了提取時(shí)間對(duì)提取率的影響機(jī)械化學(xué)處理后,刺五加總黃酮可快速溶出。在3～303.3最佳工藝的確定根據(jù)以上單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,選擇由級(jí)差分析可知,機(jī)械化學(xué)法輔助提取刺五加總黃酮的最佳工藝為在優(yōu)化的工藝條件下進(jìn)行了3批原料的平行提取,提取率分別為1.74%,1.72%,1.69%,平均提取率為1.72%。3.4總黃酮與熱回流提取對(duì)比按正交實(shí)驗(yàn)確定的最佳工藝條件提取刺五