月季的花藥離體培養(yǎng)課件

課題2月季的花藥培養(yǎng)

花中皇后—月季又稱“月月紅”，自然花期5至11月課題2月季的花藥培養(yǎng)花中皇后—月季又稱“月月紅”，自1主要知識

（一）、被子植物的花粉發(fā)育和產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑（二）、月季花藥離體培養(yǎng)的操作過程（三）、影響花藥培養(yǎng)的因素主要知識2知識回顧單倍體育種的過程？花藥離體培養(yǎng)（N）單倍體植株（N）秋水仙素處理，使染色體翻倍植株（2N）特點：1明顯縮短育種年限2后代植株都為純合子。正常植株（2N）知識回顧單倍體育種的過程？花藥離體培養(yǎng)（N）單倍體植株（N）3花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉雄蕊一、被子植物的花粉發(fā)育花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉雄蕊一、被子植物的花粉發(fā)育4花粉

花粉粒是由花粉母細胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成，因此，花粉粒是單倍體的生殖細胞。

被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷：

四分體時期、單核期和雙核期等階段。花粉花粉粒是由花粉母細胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成，因此，花5造孢細胞造孢細胞6

花粉母細胞（小孢子母細胞）4個小孢子減數(shù)分裂小孢子四分體1個小孢子（單細胞花粉粒）花粉粒（雙核）有絲分裂單核雙核花粉母細胞4個小孢子減數(shù)分裂小孢子四分體1個?。▎渭毎?花粉?；ǚ哿?月季的花藥離體培養(yǎng)ppt課件9

花粉母細胞（小孢子母細胞）4個小孢子減數(shù)分裂小孢子四分體1個小孢子花粉粒（雙核）有絲分裂單核雙核營養(yǎng)細胞核營養(yǎng)細胞生殖細胞核2個精子花粉是單倍體的生殖細胞花粉母細胞4個小孢子減數(shù)分裂小孢子四分體1個小花粉粒10小孢子母細胞小孢子花粉囊花藥花粉粒（雙核期）成熟花粉8個精子小孢子母細胞小孢子花粉囊花藥花粉粒（雙核期）成熟花粉11小孢子母細胞（）時期單核（）期雙核期（）細胞核（）細胞核（）細胞（）細胞（）個精子（）分裂（）分裂單核（）期（）分裂減數(shù)小孢子四分體中邊有絲生殖生殖花粉管營養(yǎng)有絲22NNNNNNNNN小孢子母細胞（）時期單核（）期雙12注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細胞核和生殖細胞核。（精子在花粉管中形成）②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細胞進行一次有絲分裂，形成兩個精子，這樣的花粉在成熟時，含有一個營養(yǎng)核和兩個精子。③兩個精子和一個營養(yǎng)核的基因型相同。注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細胞核和生殖細131、關(guān)于被子植物花粉發(fā)育的說法，不正確的是（）A、花粉粒是在花藥中的花粉囊里形成的B、被子植物精子的形成是直接減數(shù)分裂的結(jié)果C、被子植物的花粉的發(fā)育要經(jīng)歷四分體時期、單核期、雙核期等階段D、花粉粒在發(fā)育過程中，核先位于細胞一側(cè)，再移到細胞中央BD1、關(guān)于被子植物花粉發(fā)育的說法，不正確的是（）BD14取決：培養(yǎng)基中的激素種類及濃度配比二、產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑取決：培養(yǎng)基中的激素種類及濃度配比二、產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑15體細胞胚（胚狀體）：在組織培養(yǎng)過程中，某些體細胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過程亦與合子胚類似，被稱為體細胞胚（胚狀體）。體細胞胚（胚狀體）：16能否成功：1、材料的選擇2、培養(yǎng)基的組成（MS培養(yǎng)基+不同比例的植物生長調(diào)節(jié)激素）此外，植株生長條件、材料低溫預處理、接種密度等三、影響花藥培養(yǎng)的主要因素能否成功：此外，植株生長條件、材料低溫預處理、接種密度等三、17①不選擇單核期之前花藥原因：花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎；②不選擇單核期之后花藥原因：花瓣開始松動，給材料消毒帶來困難；③挑選單核期花藥方法：應當選擇完全未開放的花蕾，菌少，易消毒。1、材料的選擇：⑴不同種類植物的誘導成功率不同。⑵同一種植物，親本植株的生理狀況對誘導成功率有直接影響。⑶合適的花粉發(fā)育時期：花期早期時的花藥最佳。⑷選擇最合適的花粉發(fā)育時期①不選擇單核期之前花藥原因：花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎；1、材料181、材料的選擇⑴不同種類植物的誘導成功率不同。⑵同一種植物，親本植株的生理狀況對誘導成功率有直接影響。⑶合適的花粉發(fā)育時期：花期早期時的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵1、材料的選擇⑴不同種類植物的誘導成功率不同。選材是否成功是19②選擇合適的花粉發(fā)育時期是提高誘導成功率的重要因素

因為并不是任何時期的花粉都可以經(jīng)過培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體，花粉發(fā)育的過程中，只有某一個時期對離體刺激敏感。②選擇合適的花粉發(fā)育時期是提高誘導成功率的重要因素因20一般來說，在單核期，細胞核由中央移向細胞一側(cè)的時期，花藥培養(yǎng)的成功率最高。即：最適合花藥培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時期為單核靠邊期選擇單核期以前的花藥接種，質(zhì)地幼嫩，極易破碎；選擇單核期之后的花藥接種，花瓣已有些松動，又給材料的消毒帶來困難，且難以挑選到單核期的花藥。③花藥培養(yǎng)時期的選擇④其它時期選擇的缺點一般來說，在單核期，細胞核由中央移向細胞一側(cè)的時期，花藥培養(yǎng)21為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開放的花蕾。盛開的或略微開放的花，都不宜選作實驗材料。⑥選擇完全未開放花蕾的原因完全未開放的花蕾，可挑選到單核期的花藥，菌少、易消毒⑤單核期花藥的挑選為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開放的花蕾。盛開的或略22⑦為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？花瓣松動后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。⑦花藥培養(yǎng)時間一般月季的花藥培養(yǎng)時間選在5月初到5月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾營養(yǎng)狀態(tài)及生理狀態(tài)會比較好，可提高花粉的誘導成功率。⑦為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？花瓣松動后，微23月季花藥培養(yǎng)時的花粉粒最好是（）A、四分體時期B、單核居中期C、單核靠邊期D、二核或三核花粉粒C2、培養(yǎng)基：花藥培養(yǎng)基所采用的培養(yǎng)基可能因植物的不同而有所變化小麥為N6培養(yǎng)基，馬鈴薯、月季為MS培養(yǎng)基，油菜為B5培養(yǎng)基。月季花藥培養(yǎng)時的花粉粒最好是（）C2、培養(yǎng)基：花242、其他因素

親本植株的生長條件、材料的低溫預處理以及接種的密度等對誘導成功都有一定的影響2、其他因素25月季花藥培養(yǎng)時的花粉粒最好是（）A、四分體時期B、單核居中期C、單核靠邊期D、二核或三核花粉粒C月季花藥培養(yǎng)時的花粉粒最好是（）C26五、實驗操作（一）材料的選取選擇花藥時，一般要通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。②某些植物的花粉細胞核不易著色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色。①最常用的方法有醋酸洋紅法1、方法五、實驗操作（一）材料的選取②某些植物的花粉細胞核不易著色，27①醋酸洋紅法染色機理醋酸洋紅為堿性染色劑，而花粉細胞內(nèi)有染色體，染色體主要成分是DNA和蛋白質(zhì),易被堿性染料著色染成紅色

。將體積分數(shù)45％的醋酸100ml煮沸，緩緩加入1g洋紅，在加熱回流8h，冷卻至50℃，過濾即可。②醋酸洋紅的配置2、醋酸洋紅法①醋酸洋紅法染色機理醋酸洋紅為堿性染色劑，而花粉細胞內(nèi)有染色28③染色操作2、焙花青—鉻釩法將無水酒精與冰醋酸按體積比為3：1的比例混勻①卡諾氏固定液的配制方法花藥（載玻片上）→1%的醋酸洋紅1滴→用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細胞核被染成紅色）③染色操作2、焙花青—鉻釩法將無水酒精與冰醋酸按體積比為329將5g鉻明礬[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸餾水中，溶解后加入0.1g焙花青，混勻并加熱至沸騰，煮沸5分鐘后冷卻至室溫，過濾，加蒸餾水定容至100ml。②焙花青—鉻釩溶液的配制方法③染色操作

花藥（在卡諾氏固定液中處理20min）→取出，置于載玻片上→焙花青－鉻礬溶液染色→蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細胞核被染成藍黑色）將5g鉻明礬[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入930二、材料的消毒：花蕾（70％酒精）大約30s（無菌水）清洗（無菌吸水紙）吸干水分（1％氯化汞溶液）2～4min（無菌水）沖洗

月季花蕾的消毒與菊花外植體的消毒相比較，二者有何不同？

在酒精消毒前，花藥不需要預先用流水沖洗、洗衣粉洗滌和軟刷刷洗二、材料的消毒：花蕾（70％酒精）（無菌水）清洗（無菌吸水紙31（二）材料的消毒5、無菌水沖洗3～5次

花藥的外面有花萼、花瓣保護，通常處于無菌狀態(tài)1、花蕾用體積分數(shù)為70%的酒精浸泡30秒2、無菌水清洗3、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入質(zhì)量分數(shù)為0.1%的氯化汞溶液中2～4分鐘（質(zhì)量分數(shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）（二）材料的消毒5、無菌水沖洗3～5次1、花蕾用體積分數(shù)為732（二）材料的消毒1、酒精處理①花蕾用體積分數(shù)為70%的酒精浸泡30秒，立即取出。②無菌水清洗③無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分（二）材料的消毒1、酒精處理①花蕾用體積分數(shù)為70%的酒精浸332、消毒液處理①放入質(zhì)量分數(shù)為0.1%的氯化汞溶液中2~4分鐘（也可質(zhì)量分數(shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）②無菌水沖洗3~5次用于培養(yǎng)花藥，實際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護，通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。2、消毒液處理①放入質(zhì)量分數(shù)為0.1%的氯化汞溶液中2~434在無菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥②要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。立即將花藥接種于培養(yǎng)基上，通常每瓶接種花藥7-10個。1、剝?nèi)』ㄋ帰傥饟p傷花藥，否則接種后容易從受傷部位產(chǎn)生愈傷組織。2、接種注意：（三）接種和培養(yǎng)在無菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥②要徹底去除花絲，因35①培養(yǎng)條件：溫度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

3、培養(yǎng)②培養(yǎng)：一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體。長出愈傷組織則將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。③注意：如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內(nèi)就會