乙型肝炎病毒教學課件

乙型肝炎病毒1乙型肝炎病毒1

乙型病毒性肝炎（hepatitisB,HB）是由乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus,HBV）引起的。HBV的感染不僅可以導致急、慢性病毒性肝炎和重性肝炎，而且還與肝硬化（livercirrhosis,LC）和肝細胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的發(fā)生、發(fā)展密切相關。20﹪的慢性乙肝患者將發(fā)展成為肝硬化，HBV慢性感染的人罹患HCC的危險性是正常人的100倍。現(xiàn)狀致病性檢測技術診斷與防治治療簡介HBV感染呈世界性分布。西歐、北美、澳大利亞為低流行區(qū)（乙性肝炎病毒表面抗原攜帶率在2﹪以下）；東歐、日本、南美、北美和地中海國家為中流行區(qū)；中國、東南亞與南非為高流行區(qū)（乙性肝炎病毒表面抗原攜帶率10﹪左右）。

全世界共有約3.5億人為HBsAg慢性攜帶者，其中3/4在亞洲。HBV感染導致全球每年50～120萬人死亡，其中死于HCC的約占32萬。我國是HBV感染的高發(fā)區(qū)，約60﹪的人群感染過HBV，10﹪的人群為攜帶者，多達1.2億?，F(xiàn)有乙型肝炎患者約為1200萬，年發(fā)病率為158/10萬。2乙型病毒性肝炎（hepatitisB,HB）是由乙

1907年，Dane在“澳抗”陽性者血清標本的電子顯微鏡觀察中，發(fā)現(xiàn)了完整的血清型肝炎病毒體，即Dane顆粒，亦稱乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）。乙肝病毒屬于嗜肝DNA病毒科，是一個帶有包膜的DNA病毒，完整的病毒顆粒大小約42nm，具有獨特的基因組結(jié)構(gòu)和生物學特性。

乙肝病毒的結(jié)構(gòu)形態(tài)檢測技術診斷與防治治療簡介致病性31907年，Dane在“澳抗”陽性者血清標本的電子顯微乙肝病毒的結(jié)構(gòu)形態(tài)HBV在動物病毒中是不尋常的，是由于在被浸染的細胞中能產(chǎn)生多類型的與病毒相關的顆粒，電鏡下觀察HBV的提純制品，證明有三種類型顆粒。1.小球型顆粒2.管型顆粒3.Dane顆粒檢測技術診斷與防治治療簡介致病性4乙肝病毒的結(jié)構(gòu)形態(tài)HBV在動物病毒中是不尋常的，是由乙肝病毒的結(jié)構(gòu)形態(tài)檢測技術診斷與防治治療簡介致病性5乙肝病毒的結(jié)構(gòu)形態(tài)檢測技術診斷與防治治療簡介致病性5乙肝病毒的感染特性亞病毒顆粒不包含病毒基因組和衣殼蛋白,主要由病毒的包膜蛋白以及宿主細胞來源的脂質(zhì)成分組成。在HBV感染病人的血清中,HBsAg亞病毒顆粒的含量遠遠超過Dane顆粒,血清濃度能達到1012/mL,是Dane顆粒的10000到1000000倍。甚至在檢測不到病毒DNA的情況下,HBsAg仍能持續(xù)大量存在。這種獨特的現(xiàn)象是乙肝病毒所特有的,迄今尚未在其他病毒中發(fā)現(xiàn)。檢測技術診斷與防治治療簡介致病性6乙肝病毒的感染特性亞病毒顆粒不包含病毒基因組和衣殼蛋乙肝病毒的理化特性及抵抗力檢測技術診斷與防治治療簡介致病性HBV對理化因素有較強的抵抗力。病毒在30～32℃可存活至少6個月，在-20℃可存活15年。病毒濃度高時，60℃加熱10h,或98℃加熱1min,以及乙醚或pH2.4處理均不能有效滅活乙肝病毒，能夠滅活HBV的常用方法和條件包括121℃高壓滅菌20min,160℃干烤1h，100℃直接煮沸2min,以及0.5%過氧化酸，3%漂白粉溶液，5%次氯酸鈉和環(huán)氧乙烷等的直接處理。7乙肝病毒的理化特性及抵抗力檢測技術診斷與防治治療簡介致病性乙肝病毒的基因組結(jié)構(gòu)HBV基因組結(jié)構(gòu)特殊，成不完全閉合的雙鏈形式，負（-）鏈為全長基因，約含3200個核苷酸，而正（+）鏈是負鏈長度的20～80%，病毒顆粒內(nèi)含有DNA聚合酶。在所有已知可感染人體而且具有獨立復制能力的雙鏈DNA病毒中，HBV基因組是最小但又是最高效的。它具有以下4個鮮明的特點：（1）不完全雙鏈環(huán)狀結(jié)構(gòu)；（2）利用重疊的開放讀碼框（openreadingframeORF）編碼多個蛋白質(zhì)；（3）所有調(diào)控序列均位于蛋白質(zhì)編碼區(qū)內(nèi)；（4）基因序列具有多變性。檢測技術診斷與防治治療簡介致病性8乙肝病毒的基因組結(jié)構(gòu)HBV基因組結(jié)構(gòu)特殊，成不完全閉乙肝病毒的復制HBV在細胞內(nèi)的復制過程較為復雜,最主要的特征是其基因組的復制要經(jīng)過由RNA中間體到DNA的這樣一個逆轉(zhuǎn)錄過程。轉(zhuǎn)錄復制循環(huán)修復侵入釋放HBV的復制過程檢測技術診斷與防治治療簡介致病性9乙肝病毒的復制HBV在細胞內(nèi)的復制過程較為復雜,最主要乙肝病毒的復制過程檢測技術診斷與防治治療簡介致病性10乙肝病毒的復制過程檢測技術診斷與防治治療簡介致病性10乙肝病毒的抗原HBsAgHBxAgHBcAgHBeAg檢測技術診斷與防治治療簡介致病性11乙肝病毒的抗原HBsAgHBxAgHBcAgHBeAg檢測技HBsAgHBsAg是糖蛋白，具有抗原性，能刺激機體產(chǎn)生保護性抗體。存在于三種病毒顆粒的表面?？勺鳛镠BV感染的主要標志。具有不同的亞型。各亞型均有共同抗原決定簇a和兩組互相排斥的亞型決定簇d/y和w/r，按不同組合形式，構(gòu)成HBsAg4個亞型，即adr、adw、ayr、ayw。亞型的分布有明顯的地域差異，并與種族有關。檢測技術診斷與防治治療簡介致病性12HBsAgHBsAg是糖蛋白，具有抗原性，能HBcAgHBcAg是磷酸化蛋白質(zhì)，是內(nèi)衣殼成分，存在于Dane顆粒核心部位的表面。其外表被HBsAg覆蓋，血清中不易檢出。HBcAg在感染的肝細胞表面表達，是殺傷性CD8+T細胞識別并清除HBV感染細胞的靶抗原之一。HBcAg抗原性強，能刺激機體產(chǎn)生HBc?？笻BcIgG在血清中持續(xù)時間較長，而抗HBcIgM則提示HBV處于復制狀態(tài)。檢測技術診斷與防治治療簡介致病性13HBcAgHBcAg是磷酸化蛋白質(zhì)，是內(nèi)衣殼成分，HBeAgHBeAg，e是抗原決定簇的名稱，為蛋白質(zhì)，由PreC和C基因編碼。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔，該蛋白質(zhì)經(jīng)過處理后分泌至細胞外，成為HBeAg。HBeAg游離于血清中，因其消長與病毒體及DNA聚合酶的消長一致，故HBeAg作為體內(nèi)有HBV復制及血清具有強感染性的指標。檢測技術診斷與防治治療簡介致病性14HBeAgHBeAg，e是抗原決定簇的名稱，為蛋白質(zhì)HBxAgHBxAg為反式激活蛋白，能廣泛激活病毒和細胞的啟動子，促進病毒復制或細胞癌基因的表達，故HBxAg可作為致癌蛋白，與原發(fā)性肝癌的發(fā)生和發(fā)展有關。臨床上不作為HBV感染的血清學指標。檢測技術診斷與防治治療簡介致病性15HBxAgHBxAg為反式激活蛋白，能廣泛激活病毒和乙肝病毒的傳播途徑簡介檢測技術診斷與防治治療致病性日常生活觸傳播醫(yī)源性傳播

性接觸傳播

母嬰傳播124316乙肝病毒的傳播途徑簡介檢測技術診斷與防治治療致病性日常生活觸乙肝病毒的致病性簡介檢測技術診斷與防治治療致病性乙型肝炎的臨床表現(xiàn)呈多樣性，包括無癥狀病毒攜帶者、急性肝炎、慢性肝炎、重癥肝炎和原發(fā)性肝細胞癌（PHC）發(fā)生相關等。1.急性肝炎HBV感染的前驅(qū)癥狀包括發(fā)熱、疲勞和厭食，常伴有惡心、嘔吐和腹部不適。由于肝損傷出現(xiàn)典型的黃疸。約1%黃疸型肝炎發(fā)生重癥肝炎，死亡率較高。如出現(xiàn)變態(tài)反應，可伴有皮疹、關節(jié)炎、急性壞死性血管炎和腎小球腎炎。2.慢性肝炎在HBV感染中，約5%-10%的患者發(fā)生慢性肝炎，臨床表現(xiàn)輕微或僅能檢出轉(zhuǎn)氨酶輕度升高等肝功能異常。約10%的慢性肝炎發(fā)展為肝硬化和肝功能衰竭。3.原發(fā)性肝細胞癌慢性肝炎與PHC之間的潛伏期短至9年，長達35年。人群流行病學研究顯示，HBsAg攜帶者較無HBV感染者發(fā)生肝癌的危險性高217倍。肝細胞損傷和肝組織的不斷修復、HBV基因組的整合、HBxAg的反式激活作用等均可導致肝細胞的過度生長，最終引發(fā)PHC。17乙肝病毒的致病性簡介檢測技術診斷與防治治療致病性乙型肝乙肝病毒的致病性簡介檢測技術診斷與防治治療致病性HBV在肝細胞內(nèi)增殖，并不直接導致肝細胞的損傷，病毒基因組能與肝細胞整合，引發(fā)病毒的潛伏感染。HBV的致病機制以免疫病理損傷為主。由于患者血液中存在大量的HBsAg或HBeAg，因此體液免疫對肝細胞的損害及中止病毒增殖和擴散作用是有限的；相反與HBsAg或HBeAg的抗原抗體復合物所致的腎小球腎炎、關節(jié)炎等肝外免疫病理性損害有關。在急性乙型肝炎患者外周血中，分離出被HBsAg或HBcAg/HBeAg致敏的CD8+T細胞，但在慢性乙型肝炎患者外周血和肝內(nèi)，上述CD8+T細胞數(shù)量明細那減少，這可部分解釋有效的細胞免疫在清除HBV感染靶細胞的同時損傷肝細胞，從而引起急性感染；而在慢性肝炎中，由于抗HBV特異性CD4+T細胞的缺乏，致使有限的細胞免疫不能有效清除病毒，允許HBV在體內(nèi)持續(xù)存在及引起肝持續(xù)性炎癥反應，甚至由于特異性細胞免疫嚴重缺乏，成為無癥狀攜帶者。18乙肝病毒的致病性簡介檢測技術診斷與防治治療致病性HB1酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測時間分辨熒光免疫分析方法(TRFIA)23免疫放射分析（IRMA）法實時熒光PCR技術45化學發(fā)光免疫分析(CLIA)6免疫膠體金技術檢測技術乙肝病毒檢測技術簡介致病性檢測技術診斷與防治治療191酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測時間分辨熒光免疫分析方法微生物學診斷簡介致病性檢測技術診斷和防治治療乙肝病毒抗原抗體系統(tǒng)的檢測：目前乙型肝炎的病毒學診斷，主要因考血清學方法檢測HBsAg、HBeAg及抗-HBs、抗-HBc、抗-HBe，統(tǒng)稱二對半抗原抗體系統(tǒng)。臨床上ELISE法最常用。20微生物學診斷簡介致病性檢測技術診斷和防治治療乙肝病毒乙肝疫苗簡介致病性檢測技術診斷和防治治療第一代血源性乙肝疫苗第二代基因工程疫苗第三代新型乙肝疫苗21乙肝疫苗簡介致病性檢測技術診斷和防治治療第一代第二代第三代2抗HBV臨床應用的藥物

代表藥物a干擾素（interferon-a,IFN-a）高劑量重組干擾素的持續(xù)應答率低，一般只有30%-40%，而且伴有嚴重的副作用干擾素代表藥物拉米夫定（Lamivudine,3CT）可以通過抑制HBV的DNA聚合酶的活性來發(fā)揮迅速、有效的抗病毒的作用，但停藥后的反彈和耐藥株的出現(xiàn)是個亟待解決的難題。核苷類似物SectionheaderSectionheaderSectionheader抗病毒治療Sectionheader簡介致病性檢測技術診斷和防治治療22抗HBV臨床應用的藥物代表藥物a干擾素（interfero乙型肝炎的基因治療基因治療是指將正常的野生型基因或特定設計的治療基因?qū)霗C體或特定的細胞內(nèi)替代、修正、補償有缺陷的基因功能；或封閉、抑制異常表達的基因以達到治療某種疾病的目的。SectionheaderSectionheaderSectionheader抗病毒治療Sectionheader簡介致病性檢測技術診斷和防治治療23乙型肝炎的基因治療基因治療是指將正常的野生型基因或特定設計的乙型肝炎的基因治療反基因技術反義技術核酶DNA疫苗基因治療主要策略123456單鏈抗體技術負性多變體技術SectionheaderSectionheaderSectionheader抗病毒治療Sectionheader簡介致病性檢測技術診斷和防治治療24乙型肝炎的基因治療反基因技術反義技術核酶DNA疫苗基因治療1反義技術反義技術是指設計與mRNA序列互補的核酸分子，導入細胞，使其遵循堿基配對原則與mRNA特異性位點結(jié)合，從而抑制或阻止蛋白質(zhì)的翻譯，達到抗病毒的目的。反義技術有反義寡聚核糖核苷酸（antisenseoligodexynucleotide,ASODN）和反義RNA（antisenseRNA）。SectionheaderSectionheaderSectionheader抗病毒治療Sectionheader簡介致病性檢測技術診斷和防治治療25反義技術反義技術是指設計與mRNA序列互補的核酸分子反基因技術與反義技術不同，反基因技術是根據(jù)三螺旋結(jié)構(gòu)DNA形成的原理，以靶基因中同聚嘌呤-嘧啶區(qū)域為靶位點，設計、合成反基因寡核苷酸或三螺旋形成寡核苷酸，導入細胞內(nèi)，通過與雙鏈DNA形成三螺旋結(jié)構(gòu)，抑制或阻斷靶基因的轉(zhuǎn)錄。SectionheaderSectionheaderSectionheader抗病毒治療Sectionheader簡介致病性檢測技術診斷和防治治療26反基因技術與反義技術不同，反基因技術是根據(jù)三螺旋結(jié)構(gòu)D核酶（Ribozyme,Rz）

核酶（Ribozyme,Rz）是一種具有核酸內(nèi)切酶活性的RNA分子，可特異性地與靶基因結(jié)合并切割靶mRNA。核酶在切割和降解完靶RNA后可重新形成高級結(jié)構(gòu)，防止RNA酶對其自身的降解并循環(huán)催化其余的靶RNA。核酶是通過堿基互補配對與底物形成雜交雙鏈結(jié)構(gòu)，從而使核酶具較普通酶蛋白更高的底物特異性，同時作為核酶的底物需具備核酶的特異識別位點。SectionheaderSectionheaderSectionheader抗病毒治療Sectionheader簡介致病性檢測技術診斷和防治治療27核酶（Ribozyme,Rz）核酶（RibozymDAN疫苗（DNAvaccine）

DAN疫苗（DNAvaccine）又稱基因疫苗或核酸疫苗，是指將編碼某一特定蛋白質(zhì)抗原的基因片段插入適當?shù)恼婧思毎磉_載體中，構(gòu)建重組質(zhì)粒，然后經(jīng)肌肉注射或基因槍技術直接接種到機體中，宿主細胞攝取質(zhì)粒后，表達抗原蛋白，從而誘導機體產(chǎn)生特異性細胞免疫和體液免疫應答。針對HBV的基因疫苗一般選擇HBVC區(qū)和S區(qū)為靶點構(gòu)建質(zhì)粒，誘導機體產(chǎn)生特異性細胞免疫和體