葡萄球菌屬檢驗(yàn)

元謀縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物室葡萄壬球菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號：生效日期：2011-11-01文件版本：第一版文件頁碼：1/3概述葡萄球菌屬是一類觸酶試驗(yàn)陽性的革蘭陽性球菌，包括金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中間型葡萄球菌等35個種，17個亞種。金黃色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。標(biāo)本類型血液、尿液、腦脊液、穿刺液、膿液等標(biāo)本。鑒定3.1形態(tài)與染色革蘭陽性球菌，成單、雙、短鏈或不規(guī)則葡萄狀排列。3.2培養(yǎng)特性金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上的典型菌落為金黃色，周圍有明顯的溶血環(huán)，部分菌落也可呈灰白色或檸檬色。在高鹽甘露醇平板上呈淡橙黃色菌落。表皮葡萄球菌在血瓊脂平板上菌落為白色或檸檬色，多數(shù)不溶血。3.3生化反應(yīng)金黃色葡萄球菌觸酶試驗(yàn)陽性，分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水楊苷，明膠、血漿凝固酶和DNA酶試驗(yàn)陽性，七葉苷試驗(yàn)陰性。3.4鑒別要點(diǎn)3.4.1本菌屬特征革蘭陽性球菌，呈葡萄狀排列，觸酶試驗(yàn)陽性。金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上菌落呈金黃色或白色，DNA酶和血漿凝固酶試驗(yàn)均陽性，發(fā)酵苷露醇。3.4.2與微球菌屬的鑒別葡萄球菌屬葡萄糖O/F試驗(yàn)為發(fā)酵型，鏡下以葡萄狀排列為主，菌體較小，而微球菌屬為氧化型或無反應(yīng)，鏡下以四聯(lián)排列為主，且菌體較大。3.4.3與鏈球菌屬的鑒別葡萄球菌屬O/F試驗(yàn)為發(fā)酵型，觸酶試驗(yàn)陽性，鏈球菌屬葡萄糖O/F試驗(yàn)為氧化型，觸酶試驗(yàn)陰性。3.4.4凝固酶試驗(yàn)陽性葡萄球菌的鑒別見下表1。表1凝固酶陽性葡萄球菌鑒別的關(guān)鍵性試驗(yàn)菌名凝固酶觸酶溶血硝酸鹽海藻糖半乳糖苷酶金黃色葡萄球菌金黃色亞種+++++-金黃色葡萄球菌厭氧亞種+-+---施氏葡萄球菌聚集亞種++++-ND中間葡萄球菌++d+++海豚葡萄球菌++++-NDS.lutrae++++++豬葡萄球菌d+-++-注：“+”為90%以上菌株為陽性，“-”為90%以上菌株為陰性，“d”為11%-89%陽性，“ND”為無資料。3.5操作步驟3.5.1涂片、染色觀察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色鏡檢。3.5.2觸酶試驗(yàn)參見《觸酶試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。3.5.3凝固酶試驗(yàn)參見《凝固酶試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。3.5.4鑒定從血瓊脂平板上挑取純菌落，用微生物鑒定儀或傳統(tǒng)生化反應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定。藥敏參見《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》及CLSIM100-S20最新版本文件。質(zhì)量控制元謀縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物室葡萄壬球菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號：生效日期：2011-11-01文件版本：第一版文件頁碼：2/3參見《質(zhì)量管理程序》。檢驗(yàn)結(jié)果解釋與分析6.1由于葡萄球菌分布廣泛，從臨床標(biāo)本中分離到金黃色葡萄球菌時，將其定為致病菌時應(yīng)慎重。應(yīng)根據(jù)凝固酶試驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)。對可疑菌株的鑒定，最好利用商品化的鑒定系統(tǒng)根據(jù)生化圖譜進(jìn)行確定。表皮葡萄球菌分離自導(dǎo)管相關(guān)血流感染時，通常視為致病菌。溶血性葡萄球菌從泌尿感染病人分離得到時，尤其是細(xì)菌量較大或作為優(yōu)勢菌時，通常被視為致病菌。6.2甲氧西林耐藥的金黃色葡萄球菌（MRSA）對多種廣譜強(qiáng)效抗菌藥物呈多重耐藥性。如果檢測出耐甲氧西林的葡萄球菌菌株則報(bào)告耐所有青霉素、頭抱菌素、碳青霉烯類和p-內(nèi)酰胺藥/阡內(nèi)酰胺酶抑制劑類抗生素，對氨基糖苷類和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素常協(xié)同耐藥。若葡萄球菌屬對四環(huán)素敏感，則對多西環(huán)素和米諾環(huán)素敏感。某些菌對四環(huán)素中介或耐藥，而對多西環(huán)素和米諾環(huán)素敏感。臨床感染葡萄球菌的病人用喹諾酮類治療3-4日后，原來敏感的葡萄球菌易產(chǎn)生耐藥。所以對這類葡萄球菌需多次反復(fù)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。大環(huán)內(nèi)酯類耐藥葡萄球菌包括固有耐藥和誘導(dǎo)耐藥。所以臨床試驗(yàn)室須進(jìn)行“D”試驗(yàn)以檢測克林霉素誘導(dǎo)性耐藥，根據(jù)“D”試驗(yàn)結(jié)果來報(bào)告克林霉素的耐藥性。臨床意義葡萄球菌屬在自然界分布很廣。存在于空氣、水、塵埃及皮膚上的葡萄球菌大多數(shù)無致病性。金黃色葡萄球菌主要引起局部組織的化膿性感染（癤、癰和創(chuàng)傷感染）、菌血癥、心內(nèi)膜炎等全身感染等，也可引起骨髓炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、肺炎和深部膿腫等。腐生葡萄球菌引起尿道感染、前列腺炎、外傷和菌血癥等。溶血葡萄球菌引起心內(nèi)膜炎、菌血癥、腹膜炎、尿道感染、外傷、骨折和關(guān)節(jié)炎等。MRSA的治療：輕度感染可選用SMZ-TMP和喹諾酮類，嚴(yán)重全身感染選用萬古霉素或其他糖肽類藥物。鑒定流程元謀縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物室葡萄壬球菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號：生效日期：2011-11-01文件版本：第一版文件頁碼：3/3參考文獻(xiàn)[1]中國合格評定國家認(rèn)可委員會.CNAS-GL23:2008醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的指南.2008⑵周庭銀編著.臨床微生物學(xué)診斷與圖解.第二版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2007葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006Mu