金黃色葡萄球菌實驗活動風(fēng)險評估報告

金黃色葡萄球菌實驗活動風(fēng)險評估報告金黃色葡萄球菌是一種廣泛存在于自然界的革蘭陽性球菌，可分布于空氣、水、土壤、物品，以及人和動物的皮膚和外界相通的腔道中。大部分是不致病的腐物寄生菌。葡萄球菌屬有20余種，其中金黃色葡萄菌、表皮葡萄球菌及腐生性葡萄球菌為常見致病菌。金黃色葡萄球菌的抗原種類多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，已發(fā)現(xiàn)的抗原在30種以上，其中以葡萄球菌A蛋白較為重要。金黃色葡萄球菌的SPA抗原為完全抗原，可與人類IgG1、IgG2和IgG4的Fc段非特異性結(jié)合。采用含SPA的葡萄球菌作為載體，結(jié)合特異性抗體后，可開展簡易、快速的協(xié)同凝集試驗。莢膜多糖有利于金黃色葡萄球菌黏附到細胞或生物合成材料表面。多糖抗原具有群特異性，存在于細胞壁。A群多糖抗原從金黃色葡萄球菌中提出，化學(xué)組成是磷壁酸中的N-乙酰葡糖胺核糖醇殘基。B群多糖抗原分離自表皮葡萄球菌，化學(xué)組成是磷壁酸中的N-乙酰葡糖胺甘油殘基。金黃色葡萄球菌是世界性衛(wèi)生問題，是人類化膿感染中最常見的病原菌。上呼吸道感染患者的鼻腔帶菌率為83%，所以人畜化膿性感染部位常稱為污染源。傳播途徑包括接觸傳播、空氣傳播、食品傳播等。在實驗室中，應(yīng)嚴格遵守生物安全規(guī)范，采取必要的防護措施，避免感染和傳播。金黃色葡萄球菌是一種常見的致病菌，傳播途徑包括消化道、皮膚黏膜損傷、醫(yī)務(wù)人員帶菌、吸入染菌塵埃以及食品污染等。食品在加工過程中容易受到污染，導(dǎo)致食物中毒。此外，奶牛和禽畜患化膿性乳腺炎或局部化膿也會造成肉體和其他部位的污染。人類對金黃色葡萄球菌有一定的天然免疫力，但只有當(dāng)皮膚黏膜受創(chuàng)傷或免疫力降低時才容易感染。易感人群包括有創(chuàng)口的外科病人、嚴重?zé)齻颊摺⑿律鷥?、老年人、免疫缺陷者、血液病、惡性腫瘤、糖尿病患者以及患流感、麻疹伴肺部病變者。金黃色葡萄球菌感染的潛伏期較短，一般為半小時到兩天。其腸毒素對人的中毒劑量一般認為是20~25μg。當(dāng)葡萄球菌污染食物后，在氧氣不足夠數(shù)量的條件下，溫度20~30℃經(jīng)4~5h繁殖，即可產(chǎn)生大量的腸毒素。人若進食含有腸毒素的葡萄球菌污染的食物，即可發(fā)生食物中毒。金黃色葡萄球菌中毒力最強，可通過在宿主體內(nèi)的增殖、擴散和產(chǎn)生有害的胞外物質(zhì)（酶和毒素）引起宿主疾病。金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染、肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至引發(fā)敗血癥、膿毒癥等全身感染。其致病力的強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶。其中，血漿凝固酶可阻礙吞噬細胞對細菌的吞噬作用，并有利于感染性血栓的形成。透明質(zhì)酸酶可使感染擴散，溶脂酶有利于細菌侵入皮膚和皮下組織，過氧化酶則有保護細菌免受吞噬的作用。金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的溶血毒素外毒素分為α、β、γ、δ四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起機體局部缺血和壞死。殺白細胞素可破壞人的白細胞和巨噬細胞。血漿凝固酶可阻礙吞噬細胞的吞噬作用，導(dǎo)致感染局部化。脫氧核糖核酸酶則能耐受高溫，可用來作為鑒定金黃色葡萄球菌的依據(jù)。金黃色葡萄球菌是一種能夠產(chǎn)生多種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素的細菌。其中，A型和D型腸毒素引起的食物中毒最為常見。腸毒素能夠耐受高溫，不易被破壞，引起的癥狀主要是嘔吐和腹瀉。此外，金黃色葡萄球菌還能夠產(chǎn)生多種酶類。金黃色葡萄球菌和耐加氧西林金黃色葡萄球菌對抗生素產(chǎn)生的耐藥性普遍存在，說明其存在著各種不同的生物學(xué)結(jié)構(gòu)的變異。相比其他無芽孢菌，金黃色葡萄球菌對外界因素的抵抗力更強。它能在空氣中存活，但不會繁殖。在干燥的膿汁或痰液中，它也可以存活2~3個月。金黃色葡萄球菌對青霉素、金霉素、紅霉素和慶大霉素高度敏感，對鏈霉素中度敏感，但對磺胺和氯霉素的敏感性較差。由于廣泛使用抗生素，金黃色葡萄球菌易產(chǎn)生耐藥性變異，約90%的菌株產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，成為青霉素的耐藥菌株。近年來，耐加氧西林金黃色葡萄球菌已成為醫(yī)院內(nèi)感染最常見的致病菌。金黃色葡萄球菌對消毒劑敏感，能夠被5%石炭酸、1g/L升泵等消毒劑殺死。70%乙醇也可以抑制其生長繁殖。加熱至60℃1h或80℃30min才能夠?qū)⑵錅缁睢Ｋ诶鋬鍪称分胁灰姿劳?，對營養(yǎng)的要求也不高。金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，可以在空氣、水、灰塵以及人和動物的排泄物中找到。人和動物的體表、黏膜等處也常有其存在。因此，食品受其污染的機會很多。預(yù)防和治療方案包括注意個人衛(wèi)生、消毒隔離和防止醫(yī)源性感染，及時使用消毒藥物處理皮膚創(chuàng)傷，皮膚有化膿性感染者不宜從事食品制作或飲食服務(wù)行業(yè)。正常人鼻咽部的細菌感染率為20%~50%，但醫(yī)務(wù)人員的感染率可高達70%，因此成為醫(yī)院內(nèi)交叉感染的重要傳染源。治療應(yīng)根據(jù)藥物敏感試驗結(jié)果制定方案，以防止耐藥性菌株的擴散。針對反復(fù)發(fā)作的頑固性癤瘡，可采用自身菌苗或類毒素進行人工自動免疫，具有一定的療效。實驗室感染性因子的種類、來源和危害需要進行評估和控制。根據(jù)金黃色葡萄球菌的生物特性和實驗室檢測能力范圍，本實驗室可能的感染因子為金黃色葡萄球菌病原體本身。感染性因子的來源包括可疑食物、日常檢測的食品、公共場所的空氣等樣品，以及在實驗室操作過程中導(dǎo)致的感染性物質(zhì)飛濺、液滴和氣溶膠污染器物表面或地面等。感染性因子可能造成的危害包括實驗器材、器皿等被污染、含有病原體的實驗室廢棄物對環(huán)境造成污染、實驗室含病原體的氣溶膠對實驗室環(huán)境造成污染，以及對實驗室人員造成的威脅。在實驗方法中，應(yīng)采用國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進行檢測，或使用經(jīng)過充分驗證的實驗方法，以降低安全風(fēng)險。在樣品采集過程中，應(yīng)使用防水、防漏的容器，并包裹足量的吸收性材料，以防容器打破或泄漏時污染環(huán)境。同時，采樣人員應(yīng)規(guī)范操作，做好防護，防止制傷或劃傷。在食物中毒事件中，需要采集糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物、剩余食物等樣品。為了進行采樣，需要使用PV螺旋蓋采便盒（管）、玻璃試管或培養(yǎng)皿、采樣棉簽等設(shè)備和器材。但是在采集過程中，存在樣本濺出從而形成小顆粒氣溶膠的風(fēng)險。同時，采樣人員采樣不規(guī)范、個人防護不到位，也可能導(dǎo)致環(huán)境污染和人員感染。為了控制這些風(fēng)險，采樣人員應(yīng)戴手套、口罩，采樣動作輕柔，采樣容器盡量使用外螺旋蓋塑料管；發(fā)生污染時，應(yīng)立即進行消毒處理。在采集樣品后，需要進行包裝和運送。為了保證樣品的安全運輸，需要使用外螺旋蓋玻璃瓶、PV螺旋蓋采樣罐（管）主容器、95千帕樣品運輸罐、B類標(biāo)本運輸箱（UN3373冷藏箱）、運送車輛等設(shè)備和器材。但是在包裝和運送過程中，存在樣品濺酒、溢出、滲漏的風(fēng)險，也可能導(dǎo)致樣品的側(cè)翻、滲漏，造成污染擴散。為了控制這些風(fēng)險，盛裝樣品容器必須堅固、不易破碎，盡可能選用塑料制品，采樣后必須檢查容器的密合性。樣品嚴格按照B類要求包裝和運送，由采樣人員專車運回實驗室。在實驗室中，需要進行樣品接收和前處理。為了進行前處理，需要使用剪刀、鑷子、振蕩器、均質(zhì)器、均質(zhì)袋、離心機、生物安全柜、潔凈工作臺等設(shè)備和器材。但是在操作過程中，存在樣品側(cè)翻、手剪傷、均質(zhì)袋破裂、離心管破裂等意外情況的風(fēng)險。為了控制這些風(fēng)險，樣品接收必須在專用的區(qū)域進行，合同評審人員和收樣人員嚴格按照《樣品管理程序》（XJK/CX32）要求交接樣品，不得擅自打開樣品包裝，收樣后及時洗手。開始檢測前，對盛裝感染性材料樣品的容器，必須在生物安全柜中緩慢打開，食品和水樣必須在潔凈工作室內(nèi)打開，開啟的容器管口不能對著操作者。對食品等固體物樣品取樣，要小心使用剪刀和攝子，盡可能剪取食物的可食部分，以防止樣品均質(zhì)時堅硬物質(zhì)刺破均質(zhì)袋，造成樣液濺酒。對含有感染性的樣品進行離心振蕩時，必須將離心蓋封嚴實，并關(guān)上離心機蓋。3.在分離細菌時，應(yīng)使用直徑2~3mm且完全封閉、手柄長度小于6cm的接種環(huán)，并盡可能使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)，以避免在酒精燈的明火上加熱引起感染性物質(zhì)的爆濺。同時，應(yīng)盡量使用塑料器皿代替玻璃器皿，若必須使用玻璃器皿，則應(yīng)使用實驗室級玻璃（副硅酸鹽），任何破碎或有裂紋的器皿都應(yīng)丟棄。使用后的針頭、刀片、玻璃碎片等銳器不得用手直接接觸，嚴禁用帶有注射針頭的注射器吸液，用過的銳器應(yīng)直接放入利器盒，經(jīng)消毒后廢棄。4.在菌株使用、保存和運輸中，主要設(shè)備和器材包括接種環(huán)（針）、菌株保存管、生物安全柜、95千帕樣品運輸罐、B類標(biāo)本運輸箱（UN3373冷城箱）和運輸車輛。風(fēng)險點識別包括保菌操作不規(guī)范、個人防護不到位、保菌容器意外破損、磁珠掉落等會導(dǎo)致病原菌污染實驗室環(huán)境和實驗人員，金黃色葡萄球菌使用和保存未按照規(guī)程要求實施管理，存在菌株被惡意使用及污染環(huán)境等生物安全隱患，金黃色葡萄球菌陽性菌株上送時，運送包裝不符合生物安全要求，或運輸工具無安全保障，則易造成污染擴散，甚至樣本丟失。為控制風(fēng)險，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進行金黃色葡萄球菌分離純化及保菌操作，并按規(guī)程要求使用和保存標(biāo)準(zhǔn)菌株，嚴格執(zhí)行B類運輸包裝，攜帶相應(yīng)許可證，并由專業(yè)人員全程護送。5.在分子生物學(xué)檢測實驗中，應(yīng)將易燃易爆物質(zhì)無水乙醇放置在通風(fēng)柜內(nèi)，遠離熱源；有毒物質(zhì)溴化乙啶應(yīng)專人專管。在任何可能導(dǎo)致潛在的傳染性物質(zhì)濺出的操作過程中，應(yīng)保護好面部、眼睛和嘴。發(fā)生大量液體濺出、溢出等事故，或者明顯暴露于傳染源時，應(yīng)立即向科室負責(zé)人報告，及時處理并對事故的發(fā)生與處理作記錄。7.實驗室的清潔和消毒主要使用70%~75%的酒精和84消毒液。工作完畢后，應(yīng)及時對工作表面和生物安全柜進行消毒，以避免對下次的操作人員造成污染或感染。所有涉及到電氣操作的工作人員必須接受相關(guān)的安全培訓(xùn)，并嚴格按照操作規(guī)程進行操作。在實驗室內(nèi)應(yīng)設(shè)置相應(yīng)的安全警示標(biāo)識，以提醒工作人員注意電氣安全。同時，實驗室電氣設(shè)備應(yīng)定期檢查和維護，確保設(shè)備正常運行，減少電氣故障的發(fā)生。在進行電氣操作時，必須佩戴符合標(biāo)準(zhǔn)的防護手套和鞋子等防護裝備，以最大程度地保護工作人員的安全。1.電氣設(shè)備的設(shè)計和制造必須符合相關(guān)安全標(biāo)準(zhǔn)的要求。如果實驗室工作區(qū)內(nèi)有380V電源插座，則必須明確標(biāo)識，并由有資質(zhì)的專業(yè)人員進行操作。新的、改裝過的或修理過的電氣設(shè)備在未經(jīng)過專業(yè)人員（如有資質(zhì)的電工）進行電氣安全測試和設(shè)備符合安全使用要求之前，不允許使用。電氣設(shè)備使用人員必須接受正確的操作培訓(xùn)，并且操作方式不能降低電氣安全性。電器設(shè)備使用人員需要定期檢查設(shè)備中可能引起電氣故障的破損。只有專業(yè)人員可以從事電氣設(shè)備和電路工作，未經(jīng)授權(quán)的工作是禁止的。2.實驗室給排水設(shè)施設(shè)備是主要的風(fēng)險點。這些設(shè)備包括位于工作區(qū)和洗消區(qū)的高壓滅菌器和洗滌池。當(dāng)水管道意外破裂或排水管道阻塞時，可能會導(dǎo)致感染性材料溢出，有污染實驗人員和環(huán)境的風(fēng)險。為了預(yù)防這種情況，實驗室產(chǎn)生的所有染菌物及器具必須先經(jīng)過高壓滅菌或含氯消毒劑浸泡消毒后洗滌。洗消產(chǎn)生的污水必須集中排入污水池進行消毒處理，嚴禁直接排放。至少每月檢測糞大腸菌群，定期檢查實驗室給排水管道各接口的密封性，及時發(fā)現(xiàn)安全隱患。4.實驗室設(shè)施設(shè)備管道的主要風(fēng)險點是穿越維護結(jié)構(gòu)的部位可能存在密封不嚴的問題。當(dāng)感染性材料溢出時，會有污染環(huán)境的風(fēng)險。為了預(yù)防這種情況，所有管道穿越維護結(jié)構(gòu)的部位應(yīng)嚴格密封，并定期進行檢查檢測，避免感染性材料外溢從而污染環(huán)境的風(fēng)險。5.主要檢測儀器設(shè)備包括細菌鑒定和藥敏測試儀（ATB儀）、核酸提取儀、PCR儀、全自動快速致病菌檢測儀（miniVIDAS）、凝膠成像儀、顯微鏡等設(shè)備。對可疑金黃色葡萄球菌鑒定時，需要使用ATB儀或miniVIDAS進行生化鑒定及藥敏試驗，或使用PCR儀進行分子生物學(xué)檢測。這些設(shè)備使用時，如果不按操作規(guī)程進行，則會導(dǎo)致病原體濺出、滲漏而污染實驗環(huán)境。為了預(yù)防這種情況，必須嚴格按ATB儀、miniVIDAS、核酸提取儀、PCR儀、凝膠成像儀等設(shè)備的操作規(guī)程操作和維護，每次使用完畢后對設(shè)備箱體及可能污染的實驗環(huán)境進行消毒。此外，在濃縮菌液、核酸提取過程中會使用到離心機，離心過程中可能存在離心管破裂、離心管蓋脫落、離心轉(zhuǎn)子和離心腔被污染的風(fēng)險。為了避免這種情況，必須定期檢查離心機并注意操作規(guī)程。預(yù)防控制措施實驗室檢測人員應(yīng)定期進行健康檢查，確保身體健康狀況符合工作要求。同時，應(yīng)提供必要的個體防護用品，如口罩、手套等，防止職業(yè)暴露風(fēng)險的出現(xiàn)。3.培訓(xùn)與教育①主要風(fēng)險點識別實驗室檢測人員缺乏相關(guān)知識和技能，無法正確識別和處理實驗中出現(xiàn)的問題，導(dǎo)致生物安全風(fēng)險增加。②預(yù)防控制措施加強實驗室檢測人員的培訓(xùn)與教育，提高其相關(guān)知識和技能水平，確保其能夠正確識別和處理實驗中出現(xiàn)的問題，減少生物安全風(fēng)險的出現(xiàn)。4.個體防護①主要風(fēng)險點識別實驗室檢測人員在操作過程中可能會接觸到金黃色葡萄球菌等病原體，導(dǎo)致職業(yè)暴露風(fēng)險增加。②預(yù)防控制措施提供必要的個體防護用品，如口罩、手套等，確保實驗室檢測人員在操作過程中能夠有效地防止職業(yè)暴露風(fēng)險的出現(xiàn)。同時，應(yīng)定期進行個體防護用品的檢查和更換，確保其有效性。近期有報道稱，實驗室人員感染金黃色葡萄球菌的情況增多，主要原因是實驗室人員在采樣、檢驗和廢棄物處置等過程中未能做好個人防護。因此，為防止職業(yè)暴露，必須嚴格遵守實驗室相關(guān)規(guī)定，規(guī)范操作，做好個人防護。三、實驗室理化因素風(fēng)險評估及安全防護措施（一）紫外線1.主要風(fēng)險點：潔凈實驗室內(nèi)傳遞窗和生物安全柜均使用紫外線燈進行物體表面消毒。紫外線波長為250~280nm，主要影響眼鏡和皮膚，引起急性角膜炎和結(jié)膜炎、慢性白內(nèi)障等眼疾病，還可誘發(fā)皮膚癌。人員在紫外線燈開啟時，不知情的情況下容易受到傷害。2.安全防護措施：在實驗室工作時應(yīng)避免紫外線直接照射人體，特別是眼部。生物安全柜表面應(yīng)張貼紫外線危害的標(biāo)識，提醒實驗人員小心紫外線危害。在進行紫外線消毒時，實驗人員應(yīng)盡量遠離消毒區(qū)域，以規(guī)避紫外線對人體的危害。（二）輻射1.主要風(fēng)險點：實驗室籌建選址時未對周圍輻射源進行排查，使用含輻射的儀器設(shè)備未進行嚴格管理，存在輻射源或輻射事故間接導(dǎo)致病原微生物屏障系統(tǒng)破壞的隱患。2.安全防護措施：實驗室籌建選址時，應(yīng)對周邊建筑群的輻射源進行嚴格排查，實驗室不使用有輻射源的儀器設(shè)備，以規(guī)避輻射造成的風(fēng)險。（三）84消毒液1.主要風(fēng)險點：84消毒液屬于含氯消毒劑，有效氯的含量為4.55%~5.55%，次氯酸鈉為主要殺菌因子。含氯的消毒液會殘留在空氣中，長期使用會使人感到頭疼、惡心，刺激黏膜，對于有體質(zhì)過敏的人，還容易引發(fā)過敏、哮喘疾病等。高濃度的含氯消毒劑對人的呼吸道黏膜和皮膚有明顯的刺激作用，使人流淚、咳嗽，并刺激皮膚和黏膜，嚴重者可發(fā)生氯氣中毒。急性中毒時出現(xiàn)躁動、惡心、嘔吐、呼吸困難等癥狀，甚至因窒息而死。2.安全防護措施：按照使用說明，根據(jù)消毒對象不同而配制不同的稀釋倍數(shù)，避免使用不必要的高濃度的消毒液。在稀釋和使用時戴好手套，消毒后可及時開窗通風(fēng)，以規(guī)避消毒液對人體的危害。（四）其他1.主要風(fēng)險點：實驗室內(nèi)的照明和聲音（生物安全柜等）有可能因強光和噪聲對人員造成損害。2.安全防護措施：對實驗室的照明和聲音等參數(shù)進行檢測，確保合格，避免強光和噪聲對人員的損害。四、實驗室火災(zāi)風(fēng)險評估與預(yù)防控制措施1.主要風(fēng)險點識別：（1）超負荷用電，電線過長。（2）電器和電源老化、電器保養(yǎng)不良，例如電線的絕緣層破舊或損壞。（3）用火不當(dāng)?shù)纫l(fā)火災(zāi)。2.安全防護措施（1）在安全手冊中制定《實驗室地震應(yīng)急預(yù)案》，并對所有實驗室人員進行培訓(xùn)。（2）實驗室應(yīng)定期檢查建筑結(jié)構(gòu)和設(shè)施的安全性，并進行必要的維護和修繕。（3）在實驗室內(nèi)設(shè)置固定的安全柜、容器等，用于存放感染性材料和危險品，防止外溢。（4）在實驗室內(nèi)設(shè)置緊急開關(guān)和緊急停電裝置，以便在地震發(fā)生時能夠迅速斷電，避免火災(zāi)等次生災(zāi)害。（5）在實驗室內(nèi)設(shè)置緊急通訊設(shè)備，以便在地震發(fā)生時能夠及時聯(lián)系消防人員和其他緊急救援機構(gòu)。（6）在實驗室內(nèi)設(shè)置緊急出口標(biāo)識，并確保所有出口暢通無阻，以便實驗人員能夠迅速撤離。院長組織檢驗科、質(zhì)量管理科及其他專業(yè)人員對金黃色葡萄球菌檢驗相關(guān)風(fēng)險進行評估，形成風(fēng)險評估報告。報告經(jīng)生物安全委員會審核后，由省市熟悉相關(guān)領(lǐng)域的專家進行評估和討論，并不斷修訂完善。風(fēng)險評估報告是實驗室采取風(fēng)險控制措施、建立安全管理體系和制訂安全操作規(guī)程的依據(jù)。在記錄風(fēng)險評估的過程中，應(yīng)注明評估時間、編審人員和所依據(jù)的法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)、研究報告、權(quán)威資料、數(shù)據(jù)等。需重新進行風(fēng)險評估的情況包括生物安全實驗室改造前（或新建造前）和正式啟用前、金黃色葡萄球菌的致病性、毒力或傳染方式發(fā)生變化、開展新的實驗活動、發(fā)現(xiàn)未涉及的隱患或生物安全問題、發(fā)生意外事件或事故、評估過的實驗活動發(fā)生改變或相關(guān)政策、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等發(fā)