液相維修保養(yǎng)講座

液相維修保養(yǎng)講座第1頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月第2頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月

HPLC的梯度系統(tǒng)

溶劑輸送系統(tǒng)(泵)檢測器進樣器色譜柱梯度混合器溶劑輸送系統(tǒng)(泵)高壓梯度比例閥檢測器進樣器ABCD色譜柱溶劑輸送系統(tǒng)(泵)低壓梯度阻尼器混合器第3頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM能引起HPLC發(fā)生問題的潛在因素:機械方面,化學方面,環(huán)境方面,操作方面,保養(yǎng)方面工作環(huán)境:如電源及地線,濕度,灰塵,環(huán)境溫度等;化學品:如溶劑質(zhì)量,樣品狀況,色譜柱/保護柱狀況等;機械方面:泵,進樣器,檢測器,在線過濾器,管路連接質(zhì)量等;操作保養(yǎng):正確的操作程序,完善地日常及定期保養(yǎng);第4頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM

邏輯判斷及處理

觀察現(xiàn)象,分析色譜圖及相關參數(shù),問題分類,尋求正確的切入點,從最易最簡處如手;

問題

化學品

環(huán)境

機器 *色譜柱/保護柱 *電源 *泵 *溶液 *地線 *進樣器 *樣品 *溫度 *檢測器 *濕度 *數(shù)據(jù)處理單元 *清潔程度

第5頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM

分析系統(tǒng)工作狀況的最直觀的表現(xiàn): 系統(tǒng)壓力 色譜圖-基線 峰形 重疊譜圖(重現(xiàn)性)第6頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM

基線問題分析第7頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM基線噪聲流動相內(nèi)含有空氣-脫氣處理泵有問題.如單項閥,梯度閥,泵桿及密封件的問題清洗或更換系統(tǒng)有漏液之處-

檢漏并處理檢測池內(nèi)有氣泡-

沖洗檢測池或在檢測池出口家適當反壓,如接一段內(nèi)徑常 0.009“的管子(此法只適用于UV檢測器!!!)

電噪聲-

去除噪聲源,信號線屏蔽,檢查系統(tǒng)接地狀況檢測器光源燈能量低-

更換光源燈檢測池污染-

沖洗檢測池第8頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM基線周期性噪聲絕大多數(shù)情況下是來源于泵的問題泵頭內(nèi)有氣泡

-

流動相脫氣

,泵頭排氣(注意正確的排氣方法)泵進出口閥有問題

-

清洗或更換閥組件柱塞桿有問題

-

更換柱塞桿及其密封圈溶劑混合不良

-

加裝混合器電噪聲

-

去除噪聲源第9頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月非周期性噪聲氣泡-流動相脫氣檢測池內(nèi)有氣泡-

流動相脫氣,檢測池后加適當反壓系統(tǒng)有漏液之處-

檢漏并處理電噪聲-

去除噪聲源Waters?ConnectionsSM第10頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月基線漂移系統(tǒng)未充分平衡環(huán)境溫度影響(尤其對示差,電導,電化學檢測)-

室溫,柱溫,檢測池溫度控制梯度系統(tǒng)-溶劑A于溶劑B的ABS值相差大

-試用另種溶劑色譜柱污染或有其他組份被洗脫出-

沖洗,直至基線穩(wěn)定溶劑發(fā)生變化(如溶入氣體或溶劑揮發(fā))-

氦氣或脫氣機脫氣,溶劑瓶避光,密封(但要 注意防止溶劑瓶內(nèi)產(chǎn)生負壓)系統(tǒng)有漏液之處-

檢漏并處理

Waters?ConnectionsSM第11頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM基線周期性波動溫度影響-

環(huán)境溫度及檢測池溫度控制.注意空調(diào)機的影響溶劑混合不良-

加裝混合器流動相脫氣不良-

流動相脫氣供電電源的影響泵不良-

檢修處理

第12頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM基線有無規(guī)律的尖峰氣泡-

溶劑脫氣電路接觸不良-保證清潔,接線牢固,接點無氧化光源燈不良-

檢查處理電噪聲-

去除噪聲源第13頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM脫氣方法在線脫氣機脫氣氦氣脫氣真空過濾脫氣注意:溶劑應每天脫氣第14頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月超聲脫氣注意事項：1.在加入改性劑前脫氣溶劑2.氦氣脫氣只有在溶劑比例不變時比較好—因溶劑或添加劑揮發(fā)會改變比例3.流動相應該天天脫氣第15頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM無樣品峰未進樣泵未工作漏液流動相或樣品的問題柱子或保護柱的問題數(shù)據(jù)采集裝置的問題或其與檢測器連線的問題第16頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM負峰組份的ABS值小于溶劑的ABS值氣泡通過了檢測池對RI檢測器不一定是有了問題，很可能是正常的所有峰都是負峰-可能是檢測器輸出與數(shù)據(jù)單元連線 極性接反第17頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM峰形不好-如峰拖尾,峰分叉,出肩膀機械原因還是化學原因系統(tǒng)有不正常的死體積在線過濾器(INLINEFILTER)污染(通常會伴隨有系統(tǒng)壓力升高之現(xiàn)象)色譜柱污染保護柱(GUARDCOLUMN)污染溶劑不好或使用不對(包括流動相及樣品溶解液)樣品不好色譜柱不良-

*溶劑的影響 *流速變化率不可太大-操作上應注意*日常保養(yǎng)第18頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月

檢測池為什么會得到變形的色譜峰所有色譜峰都變形（變壞）？

第19頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月

Voids-highbackpressure,distortedand/ordoublepeaks相似的變化第20頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月誘發(fā)原因展寬是以下兩種因素的綜合結(jié)果：儀器/系統(tǒng)影響;色譜柱的影響;進樣器連接管線進樣器至色譜柱色譜柱至檢測器接頭及篩板檢測池體積進樣體積色譜柱本身死體積篩板阻塞第21頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月‘差的’色譜結(jié)果注意：色譜峰高降低，峰寬加大.‘良好的’色譜結(jié)果譜帶展寬比較第22頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月譜帶展寬體積與系統(tǒng)體積死體積/譜帶展寬體積(無色譜柱時)滯后(系統(tǒng))體積滯后(系統(tǒng))體積溶劑輸送系統(tǒng)(泵)檢測器進樣器色譜柱梯度混合器溶劑輸送系統(tǒng)(泵)高壓梯度注意∶滯后體積包括進樣器、阻尼器、混合器及其管路！比例閥檢測器進樣器ABCD色譜柱溶劑輸送系統(tǒng)(泵)低壓梯度阻尼器混合器第23頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月

**\

A12,000

B7,000相同色譜柱A儀器：譜帶展寬較小--(70mL)塔板數(shù)較高(12,000)儀器B：譜帶展寬較大--(130mL)塔板數(shù)較低(7,000)

塔板數(shù)：柱效測定結(jié)果塔板數(shù)是反映色譜柱及儀器性能狀態(tài)—的關鍵參數(shù)第24頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月0.090"ParkerStyle0.130"WatersStyle其它Waters?色譜柱

WatersSpherisorb?和許多其它品牌色譜柱安裝及連接好壞帶來的影響第25頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月

確保色譜柱適當連接確保螺釘和錐箍固定在合適位置注：色譜柱接頭連接不當—產(chǎn)生死體積(Parker型錐箍與Waters接頭連接)密封(連接)良好(PEEK接頭比較方便)死體積第26頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月KeystoneSLIPFreeRConnectors*錐箍位置可根據(jù)需要進行調(diào)節(jié)*AvailablefromWaters方便使用的連接器第27頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月

.009".020".040"注意：連接管線內(nèi)徑的差異！管線內(nèi)徑對柱外譜帶展寬的影響第28頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月

連接管線對系統(tǒng)譜帶展寬的影響.009".020".040"樣品譜帶在管線內(nèi)發(fā)生了擴散

注：過長的管線亦會造成較大的譜帶展寬第29頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月實例：管線內(nèi)徑對柱效的影響

—在色譜柱與進樣器之間使用不同內(nèi)徑的管線J.Li下圖：柱效：4000用0.04″內(nèi)徑的管路測柱效的色譜圖上圖：柱效：1,1000用0.009″內(nèi)徑的管路測柱效的色譜圖注：使用相同色譜柱第30頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月譜帶展寬對分離度的影響 ES-TIC不正確的管線連接靈敏度降低儀器：QuattroUltima

代謝產(chǎn)物研究

改善了管線連接更換了進樣器與切換閥及質(zhì)譜檢測器之間的10個接頭拆掉了內(nèi)徑0.005英寸的多余管線4英尺靈敏度提高一倍代謝產(chǎn)物可以從尾部分離出來使用某一用戶的原有色譜系統(tǒng)優(yōu)化的系統(tǒng)J.Li第31頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月系統(tǒng)性能考察

-譜帶展寬試驗儀器譜帶展寬試驗(不接色譜柱)將色譜柱從系統(tǒng)上卸下來，連接換上零死體積兩通流速：1mL/min.用單波長紫外檢測器測定。(notaPDA/DAD)用流動相稀釋測試混合物使檢測器產(chǎn)生0.5-1.0AUFS的響應(可以使用系統(tǒng)啟動測試混合物，其中含有尿嘧啶、對羥基苯甲酸乙酯和羥基苯甲酸丙酯;Waters部件號：Wat034544)進樣2到5uL上述溶液使用5sigma法測量峰高4.4%處的峰寬：譜帶展寬(mL)=峰寬(PW,seconds)/60典型的LC系統(tǒng)譜帶展寬體積應為100uL±20uL微柱系統(tǒng)之展寬應小于20uL第32頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月系統(tǒng)譜帶展寬試驗:測量“峰”寬(系統(tǒng)中未連接色譜柱)測量峰寬(W)，將其換算成以μL為單位的體積。因系統(tǒng)未連接色譜柱，故V接近于零。注：隨著色譜峰的加寬，譜帶展寬加大，分離度亦下降第33頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月影響色譜峰形的化學因素色譜柱毀壞溶解樣品的溶劑不當色譜柱過載質(zhì)量過載體積過載其它柱外效應采樣速率時間常數(shù)第34頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月當上樣量超過一定限度時發(fā)生–注意峰起點提前6.25μginjected2Minutes分析規(guī)模上樣量(6μg)獲得良好的色譜峰形46AbsorbanceAbsorbance25mginjected制備規(guī)模上樣量(25mg)產(chǎn)生質(zhì)量過載的色譜峰形注意：分析與制備之色譜峰的落點位于相同保留時間(-------)24Minutes6濃度/質(zhì)量過載對峰形的影響第35頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月進樣體積對色譜峰形的影響500μL300μL100μL10μL色譜柱/體積過載第36頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月體積過載注意：色譜峰起點相同第37頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月

檢測池為什么色譜圖中某個或一些色譜峰變形?為什么得到一個或一些變形的色譜峰?變形譜帶某一個樣品組分與顆粒表面發(fā)生陽離子交換第38頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月一些色譜峰峰形很好，但某一個或幾個色譜峰峰形差Minutes0510152025此化合物因化學問題導致拖尾—錯誤地選擇了填料或流動相pH這些色譜峰峰形良好第39頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月硅膠溶解

PH的影響

傳統(tǒng)硅膠基質(zhì)填料的pH局限性鍵合相水解XTerra雜化填料—寬pH范圍第40頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月硅膠在水中的溶解(ppm)12345678910240-220-200-180-160-140-120-100-80-60-40-20-0-pHSilicaSolubilityCurve硅膠基質(zhì)

pH2-8聚合物基質(zhì)pH2-12

AtpH>8硅膠溶解流動相pH和色譜柱壽命pH>8導致傳統(tǒng)硅膠鍵合相顆粒溶解，形成死體積第41頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月所有色譜峰都變壞(變形)–溶解樣品的溶劑不正確—洗脫強度比流動相強(Toostrong)較強溶劑第42頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月(Toostrong)STRONGERSAMPLESOLVENT所有色譜峰都變形—化學問題溶解樣品的溶劑不當溶劑強度強于流動相第43頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月堿性物質(zhì)拖尾—化學問題(色譜柱品牌/pH)Time(min)50普通C18現(xiàn)代C18中性物質(zhì)堿性物質(zhì)中性物質(zhì)堿性物質(zhì)0pH7不同品牌色譜柱的硅醇基活性的差異第44頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月

填裝良好的色譜柱良好的色譜結(jié)果系統(tǒng)、色譜柱、連接狀況皆可良好第45頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月

色譜柱對峰形的影響--色譜柱塌陷柱頭有死體積 -Channeling填料塌陷第46頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月

Voids-highbackpressure,distortedand/ordoublepeaks色譜柱塌陷(存在死體積)(機械振動或高pH{顆粒溶解})會導致所有峰都變形！第47頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月SeeAppendixformoreinformation色譜峰形欠佳的其它原因色譜峰形問題：展寬且拖尾的色譜峰色譜柱進口過濾器(篩板)部分阻塞卸下接頭在線過濾器污染更換篩板保護柱污染更換保護柱或柱芯第48頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM關注系統(tǒng)性能兩個要點-峰保留時間(RT)重現(xiàn)性,峰面積重現(xiàn)性RT重現(xiàn)性不好

-無規(guī)律變化:*流量不穩(wěn)-氣泡,漏液,泵 *溫度影響 有規(guī)律的變化,且逐漸趨于穩(wěn)定:系統(tǒng)未充分平衡RT重現(xiàn)性好,但峰面積重現(xiàn)性不好

-*進樣量-選用定量管進樣時,進樣 體積應大于3倍定量管容積; *樣品,氣泡; *樣品在流動相各組份中不能充分 溶解(通常伴隨有柱壓逐漸升高 且經(jīng)反沖后,柱壓會恢復正常之現(xiàn) 象); *基線噪聲的影響; *積分處理的影響;第49頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM工作環(huán)境的影響電源-

容量穩(wěn)定性地線-

系統(tǒng)統(tǒng)一電源,統(tǒng)一接地清潔-

不要輕視灰塵的影響濕度-

特別是近海地區(qū)溫度-

空調(diào)機的影響

第50頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月

保留時間重現(xiàn)性重現(xiàn)性流動相比例溫度

pH

離子對峰漂移平衡固定相穩(wěn)定性色譜柱污染疏水塌陷有機相低于5%第51頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月溫度對保留時間重現(xiàn)性的影響增加溫度降低保留溫度每變化1°，保留變化1%到2%選擇性漂移(通常較小)第52頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月300C500C600C Minutes1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.00400C溫度的影響(等度分離)1920psiN=1680N=2250塔板數(shù)1160psi較高溫度的益處：*縮短運行時間*改善靈敏度*獲得較為尖銳的峰形,N*降低色譜柱反壓(流動相的粘度減小)反壓第53頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月溫度的影響(等度分離)較高溫度的益處：*縮短運行時間*改善靈敏度*獲得較為尖銳的峰形,N*降低色譜柱反壓(流動相的粘度減小)*不同的選擇性26.523.5第54頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月溫度的影響AU0.000.050.100.15AU0.000.050.100.15AU0.000.050.100.15Minutes0.001.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0012345112345234530°C40°C50°C1Triamterene2Althiazide3Bumetanide4Benzthiazide5EthacrynicAcid影響較小，但由溫度變化可獲得有明顯的選擇性變化.有助于對選擇性的細微調(diào)節(jié)Column:XTerraMSC183.5μm,4.6mmx50mmMobilephase:25%MeOH,65%water,10%ammoniumbicarbonatebuffer,pH9Wagrowski,Tran第55頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月保留時間變化

有些色譜峰

保留時間變化

化學問題色譜柱類型不對(CNvsC18)pH流動相中有機相比例不對，或有機溶劑類型不對。第56頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月溶劑(有機相)組成對保留時間重現(xiàn)性的影響溶劑組成每變化1%，保留時間變化5%到15%on

在含有大量水相為流動相時，鍵合相塌陷第57頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月等度色譜-溶劑組成變化，保留時間變化12341234有機相比例高--運行時間短有機相比例低--運行時間長第58頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月PH對保留時間重現(xiàn)性的影響中性物質(zhì)：無影響酸性物質(zhì)：pH增加，保留降低堿性物質(zhì)：pH增加，保留提高0.1pH的變化會導致高達10%的保留時間變化.第59頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月注：色譜填料顆粒，溫度及有機相比例保持恒定pH是方法開發(fā)中選擇性調(diào)節(jié)的有力工具。–pH控制可能是關鍵因素pH0.111010002468101214log(k)Acid(Un-ionized)NeutralBase1SilicaC18pHlimitsXTerraBase1+2(Ionized)Acid(Ionized)Base2NA,B1B2Un-ionized反向模式B1NAB2pH5.5pH6.0流動相pH對保留因子的影響(k)Reproducibility第60頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月色譜峰形良好，但有些色譜峰發(fā)生移動

Minutes0102030Amitriptyline不同pH第61頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月保留時間重現(xiàn)性非色譜柱的影響：

離子對試劑(己烷磺酸)保留在低濃度下，離子對試劑濃度增加，保留增加在高濃度下，離子對試劑的濃度對保留幾乎無影響需要長時間的平衡由于固定相試劑吸附試劑(平衡可能需要使用多達500個柱體積的流動相)第62頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月使用離子對流動相的色譜柱-明顯需要相對較長的平衡時間

1μmol/m2 300m2/g 2g

(表面覆蓋率) (硅膠表面積) (色譜柱中的填料量)

*覆蓋此色譜柱需要相當于600μmoles的離子對試劑*如果PIC試劑的流動相濃度是1mM/升，需要600mL溶劑

***600minutes@1mL/min***離子對法的平衡(10小時)第63頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月鬼峰：來自樣品的原因樣品溶解性用流動相溶解樣品避免產(chǎn)生沉淀—阻塞色譜柱或管線色譜峰變形樣品中被測物的穩(wěn)定性

pH

光(使用棕色瓶)溫度時間/溶劑注意：*樣品的問題可能與樣品瓶相關第64頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM某些意想不到的因素或不良的工作習慣會影響您的工作無線裝置或于儀器同一供電線路中的高頻設備及頻繁啟動的大功率設備可能會帶來噪聲干擾載液/氣容器,實驗器皿和器械的清潔實驗器皿和器械的清潔不清潔帶來干擾質(zhì)量不良的化學品或使用不當(如濾膜)帶來的影響實驗前/后的準備和收尾工作.正確的開機/關機操作第65頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM 用戶可自己作的日常檢查系統(tǒng)壓力檢查:系統(tǒng)壓力主要是柱壓. 若系統(tǒng)有不正常的高壓,可分段檢查,以判斷故障來源;流量檢查-用脫氣的甲醇,泵后要有約1000PSI的反壓

進樣器自動進樣器洗針系統(tǒng)的檢查2690/2695PLUNGERWASH及NEEDLEWASH的檢查吸樣針內(nèi)是否有氣泡同樣進樣量的重現(xiàn)性檢測器開機自檢(CALIBRATION)定期清洗系統(tǒng)-溶劑過濾頭,泵,進樣器,檢測器 清洗方法定期清潔系統(tǒng)-防/除塵.清潔電路時,需注意人身安全及防止靜電損壞電路 板第66頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM溶劑更換的正確程序:用中間溶劑過度有機溶劑和鹽類溶劑不準直接過度!!!第67頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM溶劑過濾:選用合適的濾膜-脂溶性,水溶性,通用性過濾方式:過濾后混合,混合后過濾

第68頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月510泵示意圖第69頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月515泵示意圖第70頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月第71頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月7725i第72頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月717自動進樣器第73頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月486光路示意圖第74頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月2487光路示意圖第75頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月示差檢測器流路示意圖第76頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM2690/2695標準啟動程序:1.溶劑管理系統(tǒng)的準備:啟動-溶劑脫氣-初始化密封墊清洗裝置-初始化溶劑管理系統(tǒng)

第77頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM脫氣啟動脫氣機前一定要保證脫氣機真空腔內(nèi)充滿溶劑.使用DRYPPIME使所有真空腔內(nèi)充滿溶劑第78頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM啟動柱塞桿密封墊清洗系統(tǒng)作用-柱塞桿密封墊清洗液可潤滑柱塞桿及其密封墊并 沖去溶劑或鹽類沉積物,起到保護柱塞桿及其密封 墊的作用;清洗液的選擇-對反相色譜,選用80%水及20%甲,或 80%水及20%乙腈;步驟-*在MAIN屏幕內(nèi)按DIAG鍵; *取下柱塞桿密封墊清洗液管入口端的過濾頭; *注射針管充滿清洗液并接于清洗液管入口端;*按PRIMESEALWSH鍵,START,推注射器;*當清洗液充滿清洗系統(tǒng)后,按HALT鍵; *裝回過濾頭,將清洗液管置于清洗液內(nèi); *按CLOSE返回;第79頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSMDRYMRIME什么情況下作DRYMRIME-溶劑管理系統(tǒng)的管路是干的或者有空氣存在;操作步驟-*將注射器插入啟動/排氣閥中,反時針旋 轉(zhuǎn)扭1/2圈,打開閥門; *在2690/2695屏幕進入DRYMRIME; *選欲作PRIME的管路; *抽動注射器,直至溶劑充滿管路;第80頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSMWETPRIME什么情況下作WETMRIME-溶劑管理系統(tǒng)的管路中含有液體,并且要更換儲液瓶和溶劑時;注意:只有溶劑管理系統(tǒng)的管路中含有液體時才可作WETPRIME;操作步驟-*進入2690/2695DIRECTFUNCTION*選WETPRIME,按屏幕指示操作;第81頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM平衡脫氣機操作步驟-*在STATUS屏幕輸入要運行的初始溶劑 組成; *將DEGASSERMODE的參數(shù)設 為CONTINUOUS; *在DIRECTFUNCTIONS菜單中選WET PRIME,按比例ENTER; *輸入0.000ML/MIN,定時為10分鐘;

……...第82頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM2690/2695標準啟動程序:2.樣品管理系統(tǒng)啟動-初始化進樣針清洗裝置-沖洗樣品管理系統(tǒng)什么情況下作沖洗樣品管理系統(tǒng)- *初始化溶劑管理系統(tǒng); *更換溶劑; *進樣器針管內(nèi)發(fā)現(xiàn)氣泡; *每天開始使用2690/2695之前;注意:為避免鹽類析出,當從緩沖液換為有機溶劑時,應使用中介溶劑,入如水.操作步驟-*按MENU/STATUUS鍵以顯示CONTROL屏幕; *在COMPOSITION欄中輸入相應的溶劑組成; *選PURGEINJECTOR,按屏幕指示操作;

注意:初次啟動該系統(tǒng)時要使COMPRESSIONCHECK框空白,以免作壓縮檢測. 在密封件調(diào)整之前不可作壓縮檢測.

第83頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月Waters?ConnectionsSM啟動針清洗系統(tǒng)作用-保持進樣針的清潔,避免進樣之間的樣品交叉污染.同時,還清洗了進樣針,從而保護了進樣器密封墊.清洗液的選擇-

色譜條件 清洗液 緩沖液,反相 90%水及10%甲醇 非水溶液,反相 100%甲醇 正相 流動相

GPC 流動相 離子交換 水步驟-*在MAIN屏幕內(nèi)按DIAG鍵; *按PRIMENDLWSH鍵.可重復多作幾遍;第84頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月疏水塌陷(流動相中有機相比例低時發(fā)生)當使用有機相比例較低的流動相（極性較高的）時，觀察到保留完全喪失的現(xiàn)象

使用100%水溶液流動相，進樣77針，運行時間超過20小時，保留時間皆比較穩(wěn)定

但當

停止流速后，再開機時，保留喪失。此現(xiàn)象表明：當色譜柱卸壓時，流動相被排出孔外?40min40minVo第85頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月未濕潤的孔濕潤的孔注意：保留性質(zhì)與填料表面積與配體密度有關。然而，如果硅膠表面未濕潤，那么有效的色譜表面積會減少95%，因此，降低被分析物的保留特性即等于“疏水塌陷”，記?。簬缀跛械谋砻娣e都在孔內(nèi)！低有機溶劑或純水溶液流動相被排出孔外C18

硅膠什么是“疏水塌陷”？第86頁，課件共92頁，創(chuàng)作于2023年2月為什么卸壓會導致色譜柱疏水塌陷—可能機理停止輸液時，迫使水相流動相進入孔中的壓力降低為零。壓力降低時，疏水的孔表面會排斥極性流動相，使孔中“dewet”thepor