高效液相色譜法及應(yīng)用-課件

第三講：高效液相色譜法及應(yīng)用1ppt課件慢中等快色譜分離Temporalcourse淋洗液2ppt課件由于液體與氣體性質(zhì)的以下差異：溶質(zhì)在液體中的擴散系數(shù)比它在氣體中小105倍左右液體粘度比氣體約大102倍液體表明張力比氣體大104倍左右液體密度比氣體約大103倍液體不可壓縮3ppt課件液相色譜以液體為流動相，固定相可以是固體或液體（擔(dān)載在固體表面），與氣相色譜比，帶來一系列變化：例如，填充柱氣相色譜柱，一般填料的尺寸為80-100目，粒度大約是2毫米，而一般高效液相色譜的固定相粒度在2－10微米，因此流動相通過這樣一段固定床時就產(chǎn)生了很高的反壓。4ppt課件因此，我們通常所說的高效液相色譜（HighPerformanceLiquidChromatography)實際也是高壓液相色譜(HighPressureLiquidChromatography),因為沒有很高的壓力就不可能產(chǎn)生很高的分離效率。鍵合相高效液相色譜算是一種色譜模式，因為用的是鍵合相的固定相。5ppt課件一、液相色譜的分類按溶質(zhì)在分離過程中的原理：吸附色譜分配色譜離子交換色譜體積排阻色譜親和色譜6ppt課件2.按色譜固定相的形式：平板色譜（平面色譜）柱色譜3.按分離的壓力高壓液相色譜（高效液相色譜）中壓液相色譜常壓液相色譜7ppt課件H－dp關(guān)系圖8ppt課件二、液固色譜法一般也把吸附色譜法稱為液固色譜法。液固色譜法的固定相一般為固體吸附劑，常用的是：碳酸鈣、硅膠、氧化鋁、氧化鎂、活性炭等。其中硅膠最為常用。吸附色譜對中等分子量的油溶性樣品可獲得最佳的分離，而對強極性或離子型的樣品，有時會發(fā)生不可逆吸附，不能得到滿意的結(jié)果。9ppt課件基本原理：吸附劑一般為多孔性的物質(zhì)，在它們的表明存在著分散的吸附中心，溶質(zhì)分子和流動相分子在吸附劑表面的活性中心上進行競爭，同時不同溶質(zhì)之間和同一溶質(zhì)的不同官能團之間液也存在競爭。競爭的綜合結(jié)果就是形成不同溶質(zhì)在吸附劑表面吸附、解吸平衡。10ppt課件吸附解吸X表示溶質(zhì)分子，下標(biāo)m為流動相，s為固定相M表示流動相分子，下標(biāo)m為流動相，s為固定相n為被溶質(zhì)分子取代的流動相分子數(shù)目用一個式子表示如下：11ppt課件12ppt課件極性吸附劑上有機化合物的保留順序如下：氟碳化合物<飽和烴<烯烴<芳烴<有機鹵化物<醚<硝基化合物<腈<叔胺<酯醛酮<醇<伯胺<酰胺<羧酸<磺酸13ppt課件三、鍵合相液相色譜鍵合相固定相：在硅膠的表明用鍵合反應(yīng)把官能基團鍵合到表面上，解決固定相流失的問題。正相色譜：流動相極性比固定相極性小反相色譜：流動相極性比固定相極性大14ppt課件15ppt課件一般認(rèn)為鍵合相色譜的機理分配色譜機理，也有人認(rèn)為它是吸附色譜機理，其實應(yīng)該是有兩種成分在里面，現(xiàn)在又有疏溶劑理論等機理的提出。16ppt課件四、高效液相色譜儀器17ppt課件18ppt課件儲存和輸送液體設(shè)備進樣系統(tǒng)柱系統(tǒng)檢測器控制和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)19ppt課件選擇流動相的原則：保持色譜柱的穩(wěn)定性化學(xué)惰性適合所用的檢測器對樣品有一定的溶解能力清洗、更換方便、毒性小沸點、粘度等物理性質(zhì)合適20ppt課件反相色譜最常用的流動相：水、甲醇、乙腈、四氫呋喃、異丙醇等。水－甲醇體系：大約50％水的時候粘度最大水－乙腈體系：35％水的時候粘度最大。21ppt課件存放流動相的容器一定要惰性的，并且有機溶劑要避光。輸液泵要求流量平穩(wěn),可以調(diào)節(jié)的流量范圍寬，耐高壓。一般是柱塞往復(fù)泵。22ppt課件23ppt課件進樣系統(tǒng)包括手動進樣和自動進樣無論手動進樣還是自動進樣，都要通過六通閥。六通閥進樣是高壓系統(tǒng)的需要，既不影響系統(tǒng)的正常運行又能夠讓樣品進到系統(tǒng)中去。24ppt課件25ppt課件柱系統(tǒng)包括色譜柱和柱溫箱反相鍵合相色譜柱最常用的就是ODS柱，也就是C18柱。柱溫箱的溫度控制要求比較精確，因為流體的粘度受溫度的影響較大。26ppt課件液相色譜檢測器測量原理不同分類：光學(xué)性質(zhì)檢測器電學(xué)和電化學(xué)性質(zhì)檢測器熱學(xué)性質(zhì)檢測器27ppt課件光學(xué)性質(zhì)檢測器：紫外－可見光檢測器示差折光檢測器熒光檢測器蒸發(fā)光散射檢測器化學(xué)發(fā)光檢測器28ppt課件紫外吸收檢測器有三種類型：固定波長紫外吸收檢測器：低壓汞燈提供固定254nm或280nm紫外光?？勺兌嗖ㄩL檢測器：氘燈做光源，光柵分光光二極管陣列檢測器photo－diode－arraydetector（PDAD，PDA,DAD）：鎢燈和氘燈組合光源，進入檢測池的不是單色光，而是一段紫外波長上的光。PDA可以輔助定性。29ppt課件30ppt課件折光指數(shù)檢測器（refractiveindexdetectorRID）：也稱為示差折光檢測器。溶液的折射率等于溶劑及其中所含各組分溶質(zhì)的折射率與其各自的摩爾分?jǐn)?shù)的乘積之和。RID是通用型的檢測器，但是靈敏度不高。RID不能用于梯度洗脫。31ppt課件蒸發(fā)光散射檢測器32ppt課件33ppt課件電學(xué)和電化學(xué)檢測器：安培檢測器電導(dǎo)檢測器庫侖檢測器介電常數(shù)檢測器極譜檢測器34ppt課件熱學(xué)性質(zhì)：光聲檢測器熱透鏡和光熱偏轉(zhuǎn)檢測器35ppt課件工作站：完成數(shù)據(jù)采集和對