特殊染色技術-病理性沉著物染色法（病理檢驗技術課件）

病理檢驗技術

特殊染色病理性沉著物鈣鹽鈣在人體內大量存在,主要構成骨骼,作為支持人體的支架。它在分泌、運送、肌肉收縮、神經傳導等也起重要作用。

鈣在機體內以兩種形式存在,一種是離子鈣,存在血液循環(huán)內,即所謂血鈣;另一種是結合鈣,和蛋白、碳酸或磷酸結合而沉著在組織內。除骨骼和牙齒外,正常時鈣滲透在所有組織和細胞中,一般不以固體狀態(tài)出現(xiàn)在組織內。但在某些情況下,鈣析出成固體并沉著于組織內,則為病理性鈣鹽沉著。沉著的鈣鹽主要是磷酸鈣,其次為碳酸鈣。

在HE染色中,鈣鹽和蘇木精結合形成藍紫色的色淀。鈣鹽在微量時,有時和細菌不易區(qū)別,但鈣鹽的顆粒粗細不一。用以證明鈣鹽的方法有兩種,一種是

Von

kossa的硝酸銀法,另一種是茜素紅S法。硝酸銀法(根據

Von

kossa)(-)試劑配制1.1%的硝酸銀(

silver

nitrate)2.5%的硫代硫酸鈉(

sodium

thiosulphate)(二)染色步驟1.組織固定于10%的緩沖中性甲醛液,常規(guī)脫水包埋。2.切片厚5um,常規(guī)脫蠟至水。3.蒸餾水洗1分鐘。4.切片置入1%的硝酸銀于強陽光處照射15~60分鐘。5.蒸餾水洗1分鐘。6.5%的硫代硫酸鈉處理2分鐘。7.流水沖洗5分鐘。8.HE染色復染。9.常規(guī)脫水透明,中性樹膠封固。(三)結果鈣鹽呈褐黑色至深黑色,細胞核呈藍色,背景呈紅色。病理檢驗技術

特殊染色病理性沉著物

尿酸鹽尿酸鈉多沉積在跖趾關節(jié)、膝關節(jié)及手指各關節(jié)的骨中，亦可沉積在關節(jié)的軟組織、韌帶和耳軟骨等處,形成痛風結節(jié)(又稱痛風石),在結節(jié)中大量的尿酸鹽結晶體沉積。鏡下見結晶體為針狀,互相平行排列,周圍有肉芽組織形異物性巨細胞反應。尿酸鹽易溶于水而不溶于乙醇;在用甲醛固定的常規(guī)制片中,結晶體全部被溶解,只看到針狀的空隙。因此,顯示尿酸鹽時,應采用乙醇固定,選用特殊的染方法。

六胺銀法(根據

Gomori)（一）試劑配制1.5%的硝酸銀(

silver

nitrate)2.3%的六次甲基四胺(

hexamethylenetetramine)3.六胺銀貯備液5%的硝酸銀

5ml3%的六次甲基四胺100ml將5%的硝酸銀傾入3%的六次甲基四胺,即出現(xiàn)白色沉淀,此沉淀物在搖動中很快溶解,溶液變清。置于4℃的冰箱可保存約半年。4.5%的四硼酸鈉(

sodium

tetraborat）5.六胺銀工作液

六胺銀貯備液10ml

蒸餾水

25ml5%的四硼酸鈉

2ml將六胺銀貯備液加入蒸餾水中混合,然后加入5%的四硼酸鈉,待徹底混合后即可用，此液應于臨用時配。6.0.1%的氯化金水溶液7.5%的硫代硫酸鈉(

sodium

thiosulphate)8.0.5%的伊紅液

伊紅Y,水溶性(

eosin

y,

water

soluble)1g

蒸餾水

200ml

冰醋酸

1滴（二）染色步驟1.小塊組織固定于無水乙醇中16小時(過夜),再經無水乙醇3次,每次約30分鐘,滴甲苯2次,每次約15~20分鐘,浸蠟包埋。2.切片厚5um,二甲苯脫蠟至無水乙醇。3.浸入預熱的六胺銀工作液(加蓋)于58~60℃的恒溫箱內作用30分鐘,此時如有尿酸鹽存在,切片即呈黑色。

4.蒸餾水稍洗。5.0.1%的氯化金處理1分鐘。6流水稍洗。7.5%的硫代硫酸鈉處理5分鐘。8.流水沖洗5分鐘。9.0.5%的伊紅液淺染30秒。10.稍水洗。11.常規(guī)脫水透明,中性樹膠封固。（三）結果尿酸鹽結晶呈黑色,背景呈淡紅色。（四）應用若指(趾)關節(jié)等腫大時疑為尿酸鹽沉積所致的痛風結節(jié),可用此染色協(xié)助確診。病理檢驗技術

特殊染色病理性沉著物

纖維素纖維素(abrin)又稱纖維蛋白,它是由存在于血液內的纖維蛋白原分子聚合形成的特殊蛋白質.正常的凝血過程分三步：第一步是一系列凝血酶原激活物的形成；第二步為凝血酶原激活物催化凝血酶原轉變?yōu)槟?；第三步為凝血酶催化纖維蛋白原轉變?yōu)槔w維蛋白,從而使血液凝固形成凍膠狀的血凝塊。

組織內出現(xiàn)的纖維素,可以是血管壁破裂,血液成分直接溢出；也可以是由于血管壁損傷較重,血管壁通透性增高,使血漿內的纖維蛋白原分子通過,這多見于局部的炎癥反應或過敏性反應的表現(xiàn)。纖維素嗜酸性,HE染色為紅染的細絲,并互相連接成網狀,也可相互融合。新鮮的纖維素有嗜蘇丹反應,用類脂染色法染色呈弱陽性,陳舊的纖維素呈膠原染色反應。纖維素樣變(fibrinoiddegeneration)是結締組織中膠原纖維或小血管壁發(fā)生的一種變性,它具有纖維素的染色反應,所以稱為纖維素樣變。這種物質稱為纖維素樣物質。纖維素樣變其形態(tài)在HE染色為邊界不清的顆粒狀或小條、小塊狀的無結構物質,折光性強,強嗜酸性,故被染為深紅色,頗像纖維素,用纖維素染色有時也呈陽性反應。顯示纖維素和纖維素樣變的方法有Mallory磷鎢酸蘇木精法和改良的Gram-Weigert法,此兩法把纖維素染成藍紫色至藍黑色。

Lendrum等介紹的馬休黃猩紅藍法(MSB)把纖維素染成紅色,顏色較鮮艷。磷鎢酸蘇木精法(根據

Mallory)（一）試劑配制1.0.5%的高錳酸鉀(

potassium

permanganate)2.0.5%的硫酸(

sulphuric

acid)3.酸化高錳酸鉀液0.5%的高錳酸鉀1份0.5%的硫酸1份臨用前混合后用,不能保存。4.2%的草酸(

oxalic

acid)磷鎢酸蘇木精法(根據

Mallory)5.磷鎢酸蘇木精液

蘇木精0.1g

蒸餾水100ml

磷鎢酸(

phosphotungstic

acid）2g取潔凈三角燒瓶一只盛蒸餾水30ml,傾入蘇木精,稍加溫使蘇木精完全溶解。另取三角燒瓶盛蒸餾水70ml,加入磷鎢酸后輕輕搖動使其完全溶解。待蘇木精液冷卻后與磷鎢酸液混合,加塞后置于光亮處,隔數(shù)天輕輕搖動一次,待3~6個月成熟后才使用。（二）染色步驟1.組織固定于10%甲醛液中,常規(guī)脫水包埋。2.切片厚4μm,常規(guī)脫蠟至水。3.高錳酸鉀液氧化5分鐘。4.稍水洗。5.2%的草酸漂白1~2分鐘。6.流水沖洗2分鐘,蒸餾水洗一次。7.磷鎢酸蘇木精液浸染(加蓋)24~48小時。8.取出切片直接用95%的乙醇迅速洗