高中生物一輪高效復(fù)習(xí)全套之-選修-第3章-第3節(jié)課件

基因工程的原理及對操作步驟的理解

1．原理：不同生物DNA的組成單位和空間結(jié)構(gòu)相同，所有生物共用一套遺傳密碼。2．基因工程操作步驟的理解(1)提取目的基因的常用方法①原核生物——直接分離法(2)“目的基因的檢測”與“目的基因的表達”的比較

特別提醒]

①由于一種氨基酸可對應(yīng)多種密碼子，因此根據(jù)蛋白質(zhì)中已知氨基酸序列合成的目的基因可能有多種，但這并不影響目的基因的表達產(chǎn)物。②質(zhì)粒是基因工程最常用的運載體，但并不是所有質(zhì)粒均適合作運載體；同樣，運載體也并非只有質(zhì)粒，噬菌體、動植物病毒等也可以作為運載體。③目的基因與質(zhì)粒結(jié)合的過程可能出現(xiàn)三種情況：目的基因與目的基因結(jié)合；質(zhì)粒與質(zhì)粒結(jié)合；目的基因與質(zhì)粒結(jié)合。④基因成功表達的標(biāo)志是受體細胞通過轉(zhuǎn)錄、翻譯過程合成相應(yīng)蛋白質(zhì)。1．下圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中表示限制性核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的依次是()A．①②③④B．①②④③C．①④②③D．①④③②解析：①表示DNA被限制性核酸內(nèi)切酶切割，暴露出黏性末端；②表示具相同黏性末端的DNA分子通過DNA連接酶連接；③表示DNA在解旋酶的作用下解旋；④表示DNA的自我復(fù)制，需要DNA聚合酶的參與。答案：C基因工程的應(yīng)用

1．“基因治療”與“基因診斷”辨析(1)基因治療①原理：把健康的外源基因?qū)牒谢蛉毕莸募毎校虼瞬∪思毎屑群腥毕莼?，又含有健康基因。②結(jié)果：健康基因的表達掩蓋了缺陷基因的表達。(2)基因診斷①原理：DNA分子雜交。②過程：a．制備用放射性同位素(如32P)、熒光分子等標(biāo)記的DNA(疾病DNA)分子探針。b．待測DNA：患者DNA制成單鏈。c．讓兩者進行雜交，若兩者能進行互補配對，則說明患者患有此病，若兩者不能進行互補配對，則患者無此病。2．基因工程應(yīng)用的理解(1)基因工程的操作工具有限制酶、DNA連接酶、運載體，它們是為基因操作服務(wù)的，只有有了操作工具，才能進行基因工程的四個步驟，只有有了基因工程的四個步驟，才能使基因工程在基因診斷、基因治療、才能生產(chǎn)基因產(chǎn)物定向改造生物的某些遺傳性狀等領(lǐng)域得以應(yīng)用。(2)DNA與基因的關(guān)系是整體與局部的關(guān)系，基因具有相對獨立性，可控制生物的性狀，正因為如此，可人工提取目的基因。①人工合成基因的方法，依據(jù)了“中心法則”、“堿基互補配對原則”、“反轉(zhuǎn)錄”等原理。②利用DNA分子作探針依據(jù)了DNA分子雜交原理。③利用限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因、運載體，可切出相同的黏性末端，依據(jù)了酶的專一性原理。2．下列關(guān)于基因工程應(yīng)用的敘述，正確的是()A．基因治療就是把缺陷基因誘變成正?；駼．基因診斷的基本原理是DNA分子雜交C．一種基因探針能檢測水體中的各種病毒D．原核基因不能用來進行真核生物的遺傳改良解析：基因治療是把健康的外源基因?qū)氲接谢蛉毕莸募毎?，達到治療疾病的目的?；蛱结樣刑禺愋?，一種基因探針只能檢測到水體中的某種病毒。原核基因可以用來進行真核生物的遺傳改良。答案：B基因工程操作的工具

(2009年高考江蘇卷)蘇云金桿菌(Bt)能產(chǎn)生具有殺蟲能力的毒素蛋白。下圖是轉(zhuǎn)Bt毒素蛋白基因植物的培育過程示意圖(ampr為抗氨芐青霉素基因)，據(jù)圖回答下列問題。(1)將圖中①的DNA用Hind

Ⅲ、BamHⅠ完全酶切后，反應(yīng)管中有________種DNA片段。(2)圖中②表示HindⅢ與BamHⅠ酶切、DNA連接酶連接的過程，此過程可獲得________種重組質(zhì)粒；如果換用Bst

Ⅰ與BamHⅠ酶切，目的基因與質(zhì)粒連接后可獲得________種重組質(zhì)粒。(3)目的基因插入質(zhì)粒后，不能影響質(zhì)粒的________。(4)圖中③的Ti質(zhì)粒調(diào)控合成的vir蛋白，可以協(xié)助帶有目的基因的T－DNA導(dǎo)入植物細胞，并防止植物細胞中________對T－DNA的降解。(5)已知轉(zhuǎn)基因植物中毒素蛋白只結(jié)合某些昆蟲腸上皮細胞表面的特異受體，使細胞膜穿孔，腸細胞裂解，昆蟲死亡。而該毒素蛋白對人類的風(fēng)險相對較小，原因是人類腸上皮細胞________。(6)生產(chǎn)上常將上述轉(zhuǎn)基因作物與非轉(zhuǎn)基因作物混合播種，其目的是降低害蟲種群中的__________基因頻率的增長速率?！窘馕觥?/p>

(1)圖①中蘇云金桿菌的DNA共有3個酶切點，所以共可得到4種DNA片段。(2)因Hind

Ⅲ切出的末端與BamHⅠ切出末端不同，則重組的質(zhì)粒2種。Bst

Ⅰ與BamHⅠ切出的末端相同，則有1種重組質(zhì)粒。(3)質(zhì)粒進入宿主細胞必須能正常復(fù)制才能為目的基因的擴增提供必要的條件。(4)能降解T－DNA的酶為DNA水解酶。(5)不同生物的基因不同，表達產(chǎn)物的蛋白質(zhì)也不同。從而造成人類腸上皮細胞表面無相應(yīng)毒素蛋白的受體。(6)轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因作物混種，可降低抗性作物對害蟲的選擇性，使害蟲種群中的抗性基因頻率增長率減慢?！敬鸢浮?/p>

(1)4(2)21(3)復(fù)制(4)DNA水解酶(5)表面無相應(yīng)的特異性受體(6)抗性1．如圖表示限制性核酸內(nèi)切酶切割某DNA分子的過程，下列有關(guān)敘述，不正確的是()A．該限制酶能識別的堿基序列是GAATTC，切點在G和A之間 B．用此酶切割含有目的基因的片段時，必須用相應(yīng)的限制酶切割運載體，以產(chǎn)生與目的基因相同的黏性末端C．要把目的基因與運載體“縫合”起來，要用到基因工程的另一個工具——DNA聚合酶D．限制酶切割DNA分子時，是破壞了同一條鏈上兩個相鄰核苷酸之間的化學(xué)鍵，而不是兩條鏈上互補配對的堿基之間的氫鍵解析：由圖示可知，該DNA分子被切割位點是G與A之間，限制酶識別的特定序列是GAATTC；基因工程操作中，形成重組DNA分子前必須用同一種限制酶切割目的基因和運載體，得到相同的黏性末端，才能使目的基因插入到運載體切口中；能將目的基因與運載體“縫合”起來的工具酶是DNA連接酶，而不是DNA聚合酶；限制酶切割部位是DNA分子每條鏈上相應(yīng)位點的兩脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵，而不是堿基對之間的氫鍵。答案：C基因工程的綜合應(yīng)用

(2009年高考山東理綜)人類在預(yù)防與診療傳染性疾病過程中，經(jīng)常使用疫苗和抗體。已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原，其疫苗生產(chǎn)和抗體制備的流程之一如下圖請回答：(1)過程①代表的是________。(2)過程②構(gòu)建A基因表達載體時，必須使用________和________兩種工具酶。(3)過程③采用的實驗技術(shù)是________，獲得的X是_______。(4)對健康人進行該傳染病免疫預(yù)防時，可選用圖中基因工程生產(chǎn)的________所制備的疫苗。對該傳染病疑似患者確診時，可從疑似患者體內(nèi)分離病毒，與已知病毒進行______比較；或用圖中的________進行特異性結(jié)合檢測【解析】

考查基因工程和細胞工程。①表示遺傳信息從RNA到DNA，故該過程屬于逆轉(zhuǎn)錄。②是目的基因與運載體結(jié)合形成基因表達載體。③是細胞融合，形成雜交瘤細胞?；虮磉_載體的構(gòu)建需要限制性內(nèi)切酶切割目的基因和運載體，用DNA連接酶將運載體和目的基因連接成基因表達載體。A蛋白是抗原，能刺激機體B細胞增殖分化成漿細胞，最終獲得抗A蛋白的單克隆抗體。本題難度中等?！敬鸢浮?/p>

(1)逆(反)轉(zhuǎn)錄(2)限制性核酸內(nèi)切酶(限制性內(nèi)切酶、限制酶)DNA連接酶(注：兩空順序可顛倒)(3)細胞融合雜交瘤細胞(4)A蛋白核酸(基因)序列抗A蛋白的單克隆抗體解析：基因突變也可使體細胞出現(xiàn)新基因，轉(zhuǎn)基因動物應(yīng)是指以實驗室方法導(dǎo)入了外源基因并將外源基因整合并能遺傳給后代的一類動物，A錯。B項中“提高基因的表達水平”應(yīng)是使牛乳腺細胞合成更多的藥物蛋白。人白蛋白基因應(yīng)在受精卵階段導(dǎo)入，并隨細胞增殖，存在于牛的幾乎所有正常體細胞中，只是在乳腺細胞中實現(xiàn)了選擇性表達，而牛的肌肉細胞中該基因不表達。答案：D2．上海醫(yī)學(xué)研究所成功培育出第一頭攜帶人白蛋白基因的轉(zhuǎn)基因牛。他們還研究出一種可大大提高基因表達水平的新方法，使轉(zhuǎn)基因動物乳汁中的藥物蛋白含量提高30多倍，以下與此有關(guān)的敘述中正確的是()A．“轉(zhuǎn)基因動物”是指體細胞中出現(xiàn)了新基因的動物B．“提高基因的表達水平”是指設(shè)法使牛的乳腺細胞中含有更多的人白蛋白基因C．只有轉(zhuǎn)基因牛乳汁中才能獲取人白蛋白，是因為人白蛋白基因只在牛乳腺細胞中是純合的D．轉(zhuǎn)基因牛的肌肉細胞中也有人白蛋白基因，但不發(fā)生轉(zhuǎn)錄、翻譯，故不合成人白蛋白1．下面是5種限制性內(nèi)切酶對DNA分子的識別序列和剪切位點圖(↓表示剪切點、切出的斷面為黏性末端)：限制酶1：——↓GATC——；限制酶2：——CATG↓——；限制酶3：——G↓GATCC——；限制酶4：——CCGC↓GG——；限制酶5：——↓CCAGG——。請指出下列哪組表達正確()A．限制酶2和4識別的序列都包含4個堿基對B．限制酶3和5識別的序列都包含5個堿基對C．限制酶1和3剪出的黏性末端相同D．限制酶1和2剪出的黏性末端相同解析：本題考查了基因工程中限制性內(nèi)切酶的相關(guān)知識。由圖中可以判斷，限制酶1和2都識別4個堿基對，限制酶3和4都識別6個堿基對，限制酶5識別5個堿基對，由圖中的1和3可以看出兩者切出的黏性末端相同。因此答案是C。答案：C2．右圖是DNA結(jié)構(gòu)模式圖，據(jù)圖所作用的下列推測不正確的是()A．限制性核酸內(nèi)切酶能將a處切斷B．DNA連接酶能將a處連接C．解旋酶能切斷b處D．連接b處的酶為RNA聚合酶解析：以DNA結(jié)構(gòu)為背景，考查與DNA有關(guān)的幾種酶的功能。a處為磷酸二酯鍵。限制性核酸內(nèi)切酶能將其切斷，DNA連接酶能催化其形成。b處為氫鍵，解旋酶能使氫鍵斷裂，使DNA雙鏈分開。RNA聚合酶的作用是連接核糖和磷酸，而b處是通過氫鍵連接起來的。答案：D3．質(zhì)粒是基因工程中最常用的運載體，它存在于許多細菌體內(nèi)。質(zhì)粒上有標(biāo)記基因如右圖所示，通過標(biāo)記基因可以推知外源基因(目的基因)是否轉(zhuǎn)移成功。外源基因插入的位置不同。細菌在培養(yǎng)基上的生長情況也不同，下表是外源基因插入位置(插入點有a、b、c)，請根據(jù)表中提供細菌的生長情況，推測①②③三種重組后細菌的外源基因插入點，正確的一組是()A.①是c；②是b；③是a

B．①是a和b；②是a；③是bC．①是a和b；②是b；③是a

D．①是c；②是a；③是b解析：該題考查檢測目的基因?qū)胧欠癯晒Φ臋z測方法及基因的完整性。目的基因若插入b點，抗四環(huán)素基因完整性被破壞，則b基因控制的抗四環(huán)素性狀將消失。若插入c點，則a、b基因控制的性狀正常表達。從在選擇培養(yǎng)基上生長的情況可判斷，A項正確。答案：A4．將螢火蟲的熒光素基因轉(zhuǎn)入煙草植物細胞并整合到其DNA中，獲得了高水平的表達。以下說法正確的有()①螢火蟲與煙草植物的DNA結(jié)構(gòu)基本相同②螢火蟲與煙草植物共用一套遺傳密碼子③煙草植物體內(nèi)合成了熒光素④螢火蟲和煙草植物合成蛋白質(zhì)的方式基本相同A．①③B．②③C．①④D．①②③④解析：不同生物體的DNA能進行重組是因為不同生物體的DNA具有相同的、規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)?；蛟诒磉_過程中，生物體共用一套遺傳密碼子，因而表達的產(chǎn)物在受體細胞中不會發(fā)生改變。答案：D5．(2009年高考廣東理基)錢永健先生因在研究綠色熒光蛋白方面的杰出成就而獲2008年諾貝爾獎。在某種生物中檢測不到綠色熒光，將水母綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)入該生物體內(nèi)后，結(jié)果可以檢測到綠色熒光。由此可知()A．該生物的基因型是雜合的B．該生物與水母有很近的親緣關(guān)系C．綠色熒光蛋白基因在該生物體內(nèi)得到了表達D．改變綠色熒光蛋白基因的1個核苷酸對，就不能檢測到綠色熒光答案：C解析：在轉(zhuǎn)基因生物體內(nèi)能檢測到綠色熒光，說明綠色熒光基因已在生物體內(nèi)成功表達。6．下圖表示從蘇云金芽孢桿菌分離出殺蟲晶體蛋白基因(簡稱Bt基因)及形成轉(zhuǎn)基因抗蟲植物的圖解。請分析回答：(1)寫出b過程的表達式_________________。(2)人工合成目的基因的方法有①____________；②__________。(3)將目的基因和運載體(質(zhì)粒)結(jié)合的工具酶有____酶和________酶。(4)科學(xué)家計劃從哺乳動物的乳汁中提取某種抗體，應(yīng)將控制抗體合成的基因?qū)朐摲N動物的________中，導(dǎo)入基因成功表達的標(biāo)志是________。解析：本題概括了基因工程的過程和應(yīng)用。應(yīng)用基因工程技術(shù)，從蘇云金芽孢桿菌中提取殺蟲晶體蛋白基因(目的基因)導(dǎo)入棉花細胞中形成轉(zhuǎn)基因抗蟲棉，Bt基因的表達使棉花細胞中合成了原毒素，使采食棉花的昆蟲中毒死亡。要使某種動物的乳汁中含有某種抗體，目的基因一般導(dǎo)入受精卵中。這樣，由此受精卵發(fā)育成的哺乳動物的所有體細胞中都含有目的基因。答案：(1)Bt基因mRNA原毒素(2)反轉(zhuǎn)錄法根據(jù)已知氨基酸序列合成(3)限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)DNA連接酶(4)受精卵產(chǎn)生抗體1．(2010年高考全國Ⅱ卷)下列敘述符合基因工程概念的是()A．B淋巴細胞與腫瘤細胞融合，雜交瘤細胞中含有B淋巴細胞中的抗體基因B．將人的干擾素基因重組到質(zhì)粒后導(dǎo)入大腸桿菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株C．用紫外線照射青霉菌，使其DNA發(fā)生改變，通過篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株D．自然界中天然存在的噬菌體自行感染細菌后其DNA整合到細菌DNA上解析：基因工程是指按照人們的意愿，進行嚴格的設(shè)計，并通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，創(chuàng)造出符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品?；蚬こ淌窃贒NA分子水平上進行設(shè)計和施工的。選項中A項屬于細胞工程，C項屬于人工誘變，D項屬于基因重組，只有B項符合基因工程的概念，其中人的干擾素基因是目的基因，質(zhì)粒是運載體，大腸桿菌是受體細胞，人們需要的生物產(chǎn)品是人干擾素。答案：B2．(2010年高考浙江卷)在用基因工程技術(shù)構(gòu)建抗除草劑的轉(zhuǎn)基因煙草過程中，下列操作錯誤的是()A．用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草花葉病毒的核酸B．用DNA連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體C．將重組DNA分子導(dǎo)入煙草原生質(zhì)體D．用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細胞解析：構(gòu)建重組DNA分子時，需用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和載體，再用DNA連接酶連接形成重組DNA分子，而煙草花葉病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，所以A項錯誤。重組DNA分子形成后要導(dǎo)入受體細胞(若是植物細胞，則可導(dǎo)入其原生質(zhì)體)，若導(dǎo)入的受體細胞是體細胞，經(jīng)組織培養(yǎng)可獲得轉(zhuǎn)基因植物。目的基因為抗除草劑基因，所以未成功導(dǎo)入目的基因的細胞不具有抗除草劑的能力，可用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細胞。答案：A答案：A3．(2010年高考江蘇卷)下列關(guān)于轉(zhuǎn)基因植物的敘述，正確的是()A．轉(zhuǎn)入到油菜的抗除草劑基因，可能通過花粉傳入環(huán)境中B．轉(zhuǎn)抗蟲基因的植物，不會導(dǎo)致昆蟲群體抗性基因頻率增加C．動物的生長激素基因轉(zhuǎn)入植物后不能表達D．如轉(zhuǎn)基因植物的外源基因來源于自然界，則不存在安全性問題解析：轉(zhuǎn)入到油菜的抗除草劑基因可能會通過花粉被油菜的近緣物種接受，造成意料之外的抗除草劑基因傳播，形成基因污染，有可能會對生態(tài)系統(tǒng)的平衡和穩(wěn)定構(gòu)成威脅，A項正確；在轉(zhuǎn)入抗蟲基因后，不能適應(yīng)這種抗蟲植物的昆蟲的死亡率將大大增加，只有存在對應(yīng)的抗性基因的昆蟲才能生存下來，增加了昆蟲群體中抗性基因的頻率，B項錯誤；生物界中所有物種基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯用同一套密碼子和相同的氨基酸，所以動物的生長激素基因可以在植物體內(nèi)得到表達，C項錯誤；即便轉(zhuǎn)基因植物的外源基因來自于自然界，通過轉(zhuǎn)基因工程后，可能會使目標(biāo)生物出現(xiàn)非正常進化過程中的性狀改變，有可能會影響生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，D項錯誤。4．(2010年高考天津卷)下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線。圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、Sma

Ⅰ直線所示為三種限制酶的酶切位點。據(jù)圖回答：(1)圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用________限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含________的培養(yǎng)基上進行。(2)能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調(diào)控序列是_____(填字母代號)。A．啟動子B．tetRC．復(fù)制原點D．a(chǎn)mpR(3)過程①可采用的操作方法是________(填字母代號)。A．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化B．大腸桿菌轉(zhuǎn)化C．顯微注射D．細胞整合(4)過程②采用的生物技術(shù)是________。(5)對早期胚胎進行切割，經(jīng)過程②可獲得多個新個體。這利用了細胞的________性。(6)為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用________(填字母代號)技術(shù)。A．核酸分子雜交B．基因序列分析C．抗原—抗體雜交D．PCR解析：(1)基因表達載體的構(gòu)建過程中，將目的基因?qū)胧荏w細胞之前，要用同一種限制性內(nèi)切酶切割目的基因和載體。從圖中可以看出，在目的基因和載體中都有HindⅢ和BamHⅠ限制酶的切割位點，因此要用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同時切割載體和人乳鐵蛋白基因；載體切割后四環(huán)素抗性基因被破壞，因此篩選時要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行。(2)啟動子是一段有特殊序列的DNA片段，位于目的基因的首段，它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，在啟動子存在時才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)。(3)將目的基因?qū)胫参锛毎Ｓ玫姆椒ㄊ寝r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將目的基因?qū)雱游锛毎Ｓ玫姆椒ㄊ秋@微注射技術(shù)。(4)過程②是將早期胚胎移入受體母牛體內(nèi)，用到的技術(shù)是胚胎移植技術(shù)。答案：(1)HindⅢ和BamHⅠ氨芐青霉素(2)A(3)C(4)胚胎移植技術(shù)(5)全能(6)C(5)胚胎分割是利用機械方法將早期胚胎等分，經(jīng)移植后獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)，可以看做動物無性繁殖或克隆的方法，利用了細胞的全能性。(6)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，需要用相應(yīng)的抗體進行抗原－抗體雜交，其他三項技術(shù)檢測的對象都是核酸。5．(2010年高考福建卷)紅細胞生成素(EPO)是體內(nèi)促進紅細胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然EPO來源極為有限，目前臨床上使用的紅細胞生成素主要來自于基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組人紅細胞生成素(rhEPO)，其簡要生產(chǎn)流程如右圖。請回答：(1)圖中①所指的是________技術(shù)。(2)圖中②所指的物質(zhì)是_______，③所指的物質(zhì)是________。(3)培養(yǎng)重組CHO細胞時，為便于清除代謝產(chǎn)物，防止細胞產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害，應(yīng)定期更換________。(4)檢測rhEPO的體外活性需用抗rhEPO的單克隆抗體。分泌該單克隆抗體的________細胞，可由rhEPO免疫過的小鼠B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合而成。解析：基因工程中獲得大量目的基因的技術(shù)為PCR技術(shù)。cDNA是以mRNA為模板通過反轉(zhuǎn)錄獲得的。本基因工程目的基因的表達產(chǎn)物為紅細胞生成素，即EPO。由于天然EPO來源極為有限，一般情況下，基因工程產(chǎn)生的重組人紅細胞生成素(rhEPO)。培養(yǎng)重組CHO細胞時，為了提供適宜的培養(yǎng)條件，需要不斷更換培養(yǎng)液，以防止有害代謝產(chǎn)物的積累對細胞自身造成的危害。單克隆抗體是通過培養(yǎng)雜交瘤細胞獲得的。答案：(1)PCR(2)mRNArhEPO(3)培養(yǎng)液(4)雜交瘤6．(2010年高考江蘇卷)下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點。請回答下列問題：(1)一個圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有________個游離的磷酸基團。(2)若對圖中質(zhì)粒進行改造，插入的SmaⅠ酶切位點越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越________。(3)用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是__________。(4)與只使用EcoRⅠ相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點在于可以防止_____________。(5)為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入________酶。(6)重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了___________。(7)為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在________的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達的初步檢測。解析：環(huán)狀DNA分子中磷酸全部參與形成磷酸二酯鍵，被SmaⅠ限制酶切開后相當(dāng)于一個正常的DNA分子，每個DNA分子單鏈各含有一個游離的磷酸基團；A—T堿基對有兩個氫鍵，而G—C堿基對有三個氫鍵，G—C堿基對含量越多，熱穩(wěn)定性越高；從圖中讀出：SmaⅠ限制酶破壞目的基因和標(biāo)記基因；用BamHⅠ和HindⅢ兩種不同的限制酶處理，形成不同的黏性末端，能有效防止只用一種限制酶形成的相同的黏性末端的質(zhì)?；蚰康幕蛳嗷ミB接、環(huán)狀化；將質(zhì)粒與目的基因“縫合”應(yīng)用DNA連接酶進行處理；標(biāo)記基因的作用在于鑒別和篩選含有目的基因的細胞；大腸桿菌突變體喪失吸收蔗糖的能力，不能在只有蔗糖為碳源的選擇培養(yǎng)基上存活，所以可以用該種選擇培養(yǎng)基對導(dǎo)入的蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因是否表達進行初步檢測。答案：(1)0、2(2)高(3)SmaⅠ會破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因(4)質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化(5)DNA連接(6)鑒別和篩選含有目的基因的細胞(7)蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)7．(2010年高考上海卷)分析有關(guān)基因表達的資料，回答問題。取同種生物的不