2023屆新高考生物備考復(fù)習(xí)：發(fā)酵工程

2023屆新高考生物備考復(fù)習(xí)

發(fā)酵工程

一、發(fā)酵

1、概念：

指人們利用微生物，在適宜的條件下，將原料通過微

生物的代謝轉(zhuǎn)化為人類所需要的產(chǎn)物的過程。

2、對(duì)發(fā)酵的理解:

必修1中提到的發(fā)酵特指“微生物的無氧呼吸”，是

狹義的發(fā)酵概念。

這里的發(fā)酵特指微生物的代謝，而'代謝”并非僅指

“呼吸作用”，還包括微生物的其他物質(zhì)合成與分解過

程，最重要的是不同微生物可以產(chǎn)生不同的酶，因而

能利用原料產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物。

3、類型:

根據(jù)是否需氧分為:

需氧發(fā)酵（醋酸、谷氨酸、腐乳）

厭氧發(fā)酵（酒精、泡菜、酸奶）

根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質(zhì)不同分為：

固體發(fā)酵、半固體發(fā)酵和液體發(fā)酵

4、實(shí)例：腐乳的制作

蛋白質(zhì)---------蟄詈--------k小肽

+氨基酸

?旃菌「施麻隹i藤福

i微生物整起主要作用）

脂肪-----------------------"甘油+脂肪酸

脂肪酶

毛塞是一種絲狀真菌，其生殖方式為袍子生殖，代謝類

型是異養(yǎng)需氧型。

二、傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)

1、概念

直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次

發(fā)酵保留下來的面團(tuán)、鹵汁等發(fā)酵物中微生物進(jìn)行發(fā)

酵，制作食品的技術(shù)。

2、類型：傳統(tǒng)發(fā)酵以混合菌種的固體發(fā)酵及半固體發(fā)酵

為主。

3、特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、便于家庭式或作坊式生產(chǎn)（優(yōu)點(diǎn)）

生產(chǎn)條件不易控制，容易受雜菌污染（缺點(diǎn)）

4、發(fā)酵食品：腐乳、泡菜、果酒、果醋、醬、醬油、豆

豉、酸奶、奶酪、米酒、面包、饅頭等。

三、嘗試制作傳統(tǒng)發(fā)酵食品

1、傳統(tǒng)發(fā)酵常見菌種

（1）乳酸菌

①代謝特點(diǎn)：厭氧細(xì)菌，代謝類型為異養(yǎng)厭氧型;

在無氧的情況下能將葡萄糖分解成乳酸。

②發(fā)酵原理（反應(yīng)簡(jiǎn)式）

C6H12。6上2c3H6。3+能量

③生產(chǎn)應(yīng)用：可用于乳制品的發(fā)酵、泡菜的腌制等。

④分布：廣泛分布于空氣、土壤、植物體表、人或動(dòng)

物的腸道內(nèi)。

⑤常見類型：乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。

（2）酵母菌

①代謝特點(diǎn)：?jiǎn)渭?xì)胞真菌，代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧

型；在無氧的情況下能進(jìn)行酒精發(fā)酵

②發(fā)酵原理（反應(yīng)簡(jiǎn)式）

梅

c6Hl2。6”2c2H5<)H+2CO2+能最

③生產(chǎn)應(yīng)用：可用于釀酒、制作饅頭和面包等。

④影響因素：溫度是影響酵母菌生長(zhǎng)的重要因素，釀

酒酵母的最適生長(zhǎng)溫度約為28℃o

⑤分布：在一些含糖量較高的水果、蔬菜表面。

(3)醋酸菌

①代謝特點(diǎn)：好氧細(xì)菌，代謝類型為異養(yǎng)需氧型；

當(dāng)。2、糖源都充足時(shí)，能將糖分解成醋酸；

當(dāng)缺少糖源時(shí)則將乙醇轉(zhuǎn)化為乙醛，再將乙醛變?yōu)?/p>

醋酸。

多數(shù)醋酸菌的最適生長(zhǎng)溫度為30-35℃o

②發(fā)酵原理(反應(yīng)簡(jiǎn)式)

C6Hl2。6+201---2CH3COOH+2H2O+2CO2+能量

C2H5OH+Ch—舞fCH3coOH+H2O+能量

(4)小結(jié)

菌種生物代謝繁殖發(fā)酵對(duì)氧

名稱分類as的需求

乳酸菌原核生物異養(yǎng)厭氧18—20℃二分裂密閉不需氧

前期需氧，

酵母菌真核生物L(fēng)8—30℃出芽生殖

兼性厭氧后期不需氧

醋酸菌原核生物異養(yǎng)需氧30—35℃二分裂一直需氧

2、制作傳統(tǒng)發(fā)酵食品

(1)泡菜的制作

1)原理：利用植物體表面天然的乳酸菌發(fā)酵(種類較

多）b發(fā)酵期間，乳酸不斷積累，當(dāng)乳酸的質(zhì)?百

分比為0.4%?0.8%時(shí)，泡菜品質(zhì)、口味最佳。

2）條件：無氧；18~2（TC（室溫），根據(jù)室溫控制發(fā)酵

時(shí)間，嚴(yán)格控制無氧條件。

3）操作流程

用清水和食鹽配制質(zhì)量百分比

為5%-20%的鹽水，并將鹽水

煮沸，冷卻待用；

將新鮮蔬菜洗凈，切成塊狀或

原料處理、條狀，混合均勻，晾干后裝入

蔬菜裝壇泡菜壇內(nèi)；裝至半壇時(shí)，加入

蒜瓣、生姜及其他香辛料，繼

續(xù)裝至;至滿;

加鹽水一將冷卻好的鹽水緩緩倒入壇中

使鹽水沒過菜料，蓋好壇蓋

向壇蓋邊緣的水槽中注滿水，

封壇發(fā)酵并在發(fā)酵過程中注意經(jīng)常向水

槽中補(bǔ)充水；根據(jù)室內(nèi)溫度控

制發(fā)酵時(shí)間；

4）結(jié)果分析：

①選擇新鮮蔬菜的原因：新鮮蔬菜中亞硝酸鹽少、營(yíng)養(yǎng)

豐富

②鹽水的作用：殺菌、析出蔬菜水分、調(diào)味

③鹽水濃度要合適的原因：過高，乳酸發(fā)酵將受抑制，

泡菜風(fēng)味差；過低，雜菌易繁殖，導(dǎo)致泡菜變質(zhì)

④煮沸的作用：殺菌，去除水中的溶解氧

⑤冷卻的目的：保證乳酸菌等微生物的生命活動(dòng)

⑥原料不能削皮原：泡菜利用的是原料表面的乳酸菌

⑦將菜裝至八成滿的原因：在泡菜發(fā)酵初期，由蔬菜表

面帶入的大腸桿菌、酵母菌等較為活躍，它們可進(jìn)行發(fā)

酵，發(fā)酵產(chǎn)物中有較多的C02,如果泡菜壇裝得太滿，

發(fā)酵液可能會(huì)溢出壇外；另外，泡菜壇裝得太滿，會(huì)使

鹽水不太容易完全淹沒菜料，從而導(dǎo)致壇內(nèi)菜料變質(zhì)腐

爛；同時(shí)留有一定空間，也更方便拿取泡菜。

⑧使鹽水沒過全部菜料的原因：防止菜料腐爛變質(zhì)

⑨泡菜制作過程中，除乳酸菌外，還有一些酵母菌和大

腸桿菌在起作用。

⑩用水密封泡菜壇的目的：給泡菜壇內(nèi)創(chuàng)造無氧環(huán)境,

嚴(yán)格控制厭氧條件。

?制作泡菜往往要加入一些白酒的作用：白酒可抑制泡菜

表面雜菌的生長(zhǎng)，它也是一種調(diào)味劑，可增加醇香感。

?怎樣創(chuàng)造無氧條件？選擇氣密性好的泡菜壇；鹽水煮沸

冷卻待用；裝壇壓實(shí)，鹽水沒過全部菜料；蓋好蓋后，

沿水槽注滿清水，且經(jīng)常補(bǔ)水。

5）泡菜腌制中乳酸菌、乳酸和亞硝酸鹽的變化

發(fā)酵時(shí)期乳酸菌乳酸亞硝酸鹽

發(fā)酵前期少（O抑制乳酸增加（硝酸鹽還原菌的

少

菌活動(dòng)）作用）

發(fā)酵中期達(dá)到最多后開始下降

最多（乳酸積累，

增多（硝酸鹽還原菌受抑制，

抑制其他菌活動(dòng)）

部分亞硝酸鹽被分解）

發(fā)酵后期減少（乳酸積累一蓑續(xù)增多，最下降至保持相對(duì)穩(wěn)定

pH下降，抑制乳（硝酸鹽還原菌被完全

酸菌活ML抑制）

變化曲線，

乳亞

酸乳硝

菌酸酸

廠鹽

發(fā)酵時(shí)間L發(fā)酵時(shí)間發(fā)酵時(shí)間

泡菜制作過程中影響亞硝酸鹽含■的因素有哪些？

溫度過高,食鹽不足，腌制時(shí)間過短會(huì)使細(xì)菌污染、大

■繁殖后，會(huì)導(dǎo)致亞硝酸鹽含■增加。

（2）果酒的制作

1）原理：新鮮水果表面附著有不同類型的野生酵母菌,

在有氧條件下，酵母菌可以大量繁殖，在無氧條件

下，酵母菌可以將葡萄糖轉(zhuǎn)變?yōu)榫凭?/p>

2）條件:18~30℃發(fā)酵時(shí)間:1512天

3）操作流程

4）結(jié)果分析:

①體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精的作用是：消毒。

②沖洗的目的是：去除表面灰塵、污物。

③沖洗1?2次即可，不能連續(xù)沖洗的原:防止果皮表面

的野生菌種數(shù)?減少，影響發(fā)酵。

④去梗前沖洗的原因：避免葡萄破損，減少被雜菌污染

的機(jī)會(huì)

⑤葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，留有1/3空間的原

a、先讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，快速繁殖，耗盡。2后，

再進(jìn)行酒精發(fā)酵；

b、防止發(fā)酵過程中產(chǎn)生的CO2造成發(fā)酵液溢出。

⑥每隔12h左右將瓶蓋擰松一點(diǎn)的目的：排出氣體。

⑦擰松但不打開的目的：防止雜菌污染。

⑧在制作果酒的過程中，除了酵母菌，是否還有其他微

生物生長(zhǎng)？它們會(huì)對(duì)果酒發(fā)酵產(chǎn)生影響嗎？如果有，如

何避免這種影響？（還有一些乳酸菌和醋酸菌；乳酸菌

能將糖分解為甘油、酒石酸等，從而使果酒變質(zhì)，而在

有氧的情況下，醋酸菌能把糖分解成醋酸或者把乙醇轉(zhuǎn)

化為乙醛進(jìn)而轉(zhuǎn)化為醋酸。

可以通過調(diào)節(jié)發(fā)酵的溫度、pH等來控制乳酸菌含量;可

以通過減少。2含量、調(diào)節(jié)發(fā)酵溫度、pH來控制醋酸菌

含

⑨檢測(cè)果酒產(chǎn)生：聞、品嘗、用酸性條件下的重錨酸鉀

溶液檢測(cè)(橙色一灰綠色x

⑩果酒制作過程中，在不滅菌的情況下，酵母菌成為優(yōu)

勢(shì)菌種的原因：發(fā)酵后期在缺氧和酸性發(fā)酵液中，絕大

多數(shù)微生物的生命活動(dòng)受到抑制，而酵母菌可以適應(yīng)這

一環(huán)境成為優(yōu)勢(shì)菌種。

?溫度是18~3(TC,而不是一個(gè)確定的值的原因：多種

酵母菌同時(shí)發(fā)酵。

?如果密封不嚴(yán)會(huì)變酸的原：醋酸菌大量繁殖的結(jié)果。

?在果酒制作過程中往往會(huì)出現(xiàn)“先來水、后來酒”的現(xiàn)象,

原因是：前期酵母菌進(jìn)行有氧呼吸產(chǎn)生了水，后期酵母

菌進(jìn)行無氧呼吸才產(chǎn)生酒精。

?果酒制作過程中酵母菌數(shù)量和酒精濃度的變化：酵母菌

先增加后趨于穩(wěn)定，發(fā)酵后期數(shù),減少，酒精濃度先增

加后趨于穩(wěn)定

-酒精濃度

酵母菌數(shù)量

°MNP發(fā)酵時(shí)間

（3）果醋的制作

1）原理：空氣中或人工接種的醋酸菌在有氧條件下,

將酒精轉(zhuǎn)變?yōu)榇姿?，?dāng)糖源充足時(shí)，醋酸菌還可以

將葡萄糖直接分解為醋酸。

2）條件：30~35℃發(fā)酵時(shí)間：7-8天氧氣充足

3）操作流程

4）結(jié)果分析:

①在制作果醋的過程中，酵母菌不會(huì)繼續(xù)發(fā)酵的原因:

隨著醋酸發(fā)酵的進(jìn)行，發(fā)酵液的pH、發(fā)酵溫度等均不利

于酵母菌的生長(zhǎng)繁殖，因此酵母菌活性很低，不會(huì)繼續(xù)

發(fā)酵。

②醋酸菌的來源：打開瓶蓋后，空氣中的醋酸菌會(huì)進(jìn)入

果酒發(fā)酵液中大■繁殖，其他的菌因不適應(yīng)環(huán)境條件（不

能利用乙醇）而不能繁殖。

③工業(yè)上加快果醋制作的措施：在工業(yè)上，后期醋的發(fā)

酵需要人工接種醋酸菌；或者買一瓶醋，將其打開暴露

于空氣中，一段時(shí)間后在醋的表面會(huì)有一層薄膜（即醋

酸菌膜），用這層薄膜進(jìn)行接種亦可。

④在制作果酒和果醋的過程中，發(fā)酵液分別有哪些變化？

其中最明顯的變化發(fā)生在發(fā)酵后多少天？引起變化的原

是什么？

a.在葡萄酒的制作過程中，發(fā)酵液會(huì)產(chǎn)生氣泡，這是

為酵母菌發(fā)酵產(chǎn)生了C02；

b.開始發(fā)酵后，C02產(chǎn)生越來越多，會(huì)使發(fā)酵液出現(xiàn)“沸

騰”現(xiàn)象，在發(fā)酵的10天后，這種現(xiàn)象最明顯；

c.發(fā)酵過程產(chǎn)熱，會(huì)使發(fā)酵液溫度上升，應(yīng)注意控溫；

d.發(fā)酵過程中，由果皮進(jìn)入發(fā)酵液的花青素會(huì)越來越多,

而發(fā)酵液的顏色會(huì)逐漸加深變成深紅色9

e.果醋發(fā)酵完成后，發(fā)酵液的液面上會(huì)出現(xiàn)一層菌膜，

即醋酸菌膜；

⑤在果酒和果醋制作中，哪些做法可防止發(fā)酵液被污

染？

a.發(fā)酵瓶、榨汁機(jī)等器具用洗潔精清洗干凈，并用體積

分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒，晾干備用；

b.處理葡萄時(shí)應(yīng)先沖洗再去除枝梗；

c.排氣時(shí)只需擰松瓶蓋，不要打開瓶蓋

⑥檢測(cè)果醋的發(fā)酵情況的方法：a.聞；b.品嘗；c,使用pH

試紙檢測(cè)檢測(cè)和比較發(fā)酵前后的pH值；d.觀察醋酸菌膜

是否形成。

5）果酒發(fā)酵與果醋發(fā)酵的比較

果酒發(fā)酵果醋發(fā)酵

發(fā)酵菌種酵母菌醋酸菌

菌種來源附著在新鮮水果果皮空氣中的醋酸菌或

表面的野生酵母菌人工接種的醋酸菌

菌種代謝類型異養(yǎng)兼性厭氧型異養(yǎng)需氧型

菌種生物類型真核生物原核生物

發(fā)酵原理

-Ji-=-?eovia1oim|a^ani<■■）知MM

s他

=Mi-z*

CJHIA--*2C,II.（HI（MM）?灌管

發(fā)

溫度℃

酵18-3030-35r

條時(shí)間10-12d7-8d

件

氧氣前期需氧，后期不需氧始終需氧

6）果酒與果醋的發(fā)酵裝置

充氣口

排氣口

結(jié)構(gòu)作用果酒發(fā)酵時(shí)狀態(tài)果醋發(fā)酵時(shí)狀態(tài)

充氣口通入空氣關(guān)閉打開，并接入氣泵

排氣口排出電打開打開

出料口便于取樣監(jiān)測(cè)關(guān)閉關(guān)閉

思考：

1、為什么排氣口膠管長(zhǎng)而彎曲？

防止空氣中微生物的污染

2、該裝置還能繼續(xù)改進(jìn)嗎？

可以在充氣口填充棉花或者安裝其他過濾裝置，以防

止充入的氣體攜帶外來雜菌污染發(fā)酵液等。

、傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的缺點(diǎn)

菌種差異、雜菌情況不明，發(fā)酵過程的控制缺乏標(biāo)

準(zhǔn)，造成發(fā)酵食品品質(zhì)不一。

為了縮短發(fā)酵時(shí)間，確保品質(zhì)穩(wěn)定，工業(yè)上常通過

微生物純化和培養(yǎng)技術(shù)獲得單一菌種，然后將它們接種

到物料中進(jìn)行發(fā)酵。

五、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

(-)微生物的范

難以用肉眼觀察到的微小生物的統(tǒng)稱。

偏毒：如噬菌體等無細(xì)胞結(jié)構(gòu)

原核生物：如乳酸菌、大腸桿菌、醋酸菌等

微生物類群Y

原生生物：?jiǎn)渭?xì)胞的動(dòng)植物

如草履蟲、硅藻等

真核細(xì)胞

菌：如酵母菌、霉菌等

在固體平板培養(yǎng)基上，單個(gè)微生物細(xì)胞或袍子可生長(zhǎng)繁

殖成一個(gè)具有特定形狀、肉眼可見的子細(xì)胞群體，稱為

菌落。

菌落的大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等不同，是

鑒定菌種的重要依據(jù)。

（二）培養(yǎng)基的配制

1、概念:

指人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求（溫度、。2、

pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)），配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì),

稱為培養(yǎng)基。

2、用途：培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝

產(chǎn)物。

3、必備營(yíng)養(yǎng)成分

水、碳源（提供碳元素的物質(zhì)X氮源（提供氮元素

-無機(jī)碳源：、2自養(yǎng)微生物

C02CO3\HCO3-

①碳源:

I有機(jī)碳源:葡萄糖、牛肉膏、蛋白膝等晝養(yǎng)微甄

無機(jī)氮源：等

fNH4\NO3\N2,NH3

②氮源:

、有機(jī)氮源：牛肉膏、蛋白陳、尿素、氨基酸等

注：含c、H、O、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源

③無機(jī)鹽：Ca、K、Mg為大量元素

Zn、Cu、Mn、Fe、Mo等微量元素

的物質(zhì)x無機(jī)鹽等

還需滿足微生物對(duì)pH、。2、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（維生素、氨

基酸、瞟吟、嗡嚏）等的需求。

微生物特殊需求

乳酸桿菌添加維生素

騫菌pH調(diào)至酸性

細(xì)菌pH調(diào)至中性或弱堿性

厭氧微生物無氧

表1-11000ml牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)組成

組分-含量一提供的主要營(yíng)養(yǎng)"

牛肉膏〃5g.碳源、磷酸鹽和維生素等-

蛋白陳，lOg2氮源和維生素等，

NaCb5g.無機(jī)鹽“

H2Oe定容至］000mh水

總結(jié)：

①含有C、H、0、N的有機(jī)物可作為異養(yǎng)型微生物的碳

源、氮源、能源；

②自養(yǎng)型生物與異養(yǎng)型生物培養(yǎng)基的主要差別在于碳源;

③自養(yǎng)型微生物所需的碳源來自無機(jī)碳源，異養(yǎng)型微生

物所需的碳源來自有機(jī)碳源此可以根據(jù)培養(yǎng)基中營(yíng)

養(yǎng)物質(zhì)判斷微生物的代謝類型;

④無機(jī)氮源不但能給自養(yǎng)型微生物提供氮源，也能作為

能源物質(zhì)，如NH3既作為硝化細(xì)菌的氮源，也作為能源

（NH3氧化釋放的化學(xué)能）

⑤無機(jī)鹽除了可以調(diào)節(jié)酸堿平衡、維持一定的滲透壓之

外，有些無機(jī)鹽離子可以作為化能合成菌的能源（如鐵

細(xì)菌）

4、培養(yǎng)基的種類及用途

標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基特點(diǎn)作用

固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂微生物的分離與鑒定，

活菌計(jì)數(shù)，菌種保藏

物理半固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂。容器放倒不致觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定、

性質(zhì)流出，劇烈震動(dòng)則破散菌種保藏

液體培養(yǎng)基不加凝固劑常用于擴(kuò)大培養(yǎng)，工業(yè)生產(chǎn)

選擇培養(yǎng)基允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)培養(yǎng)、分離出特定微生物

抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)

功能

鑒別培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)鑒別不同種類微生物

藥品，用以鑒別不同種類的微生物

成分天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)

來源合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確微生物的分類、鑒定

注意：實(shí)驗(yàn)室常用的培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基中加入瓊脂制

成的瓊脂固體培養(yǎng)基，微生物可在其表面或內(nèi)部繁殖形

成菌落。（其他固體培養(yǎng)基如腐乳等，不需要向液體中加

瓊脂配制）

5、配制原則：目的明確、營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)、pH適宜

（三）無菌技術(shù)

兩個(gè)方面：消毒f對(duì)操作的空間、操作者的衣著和手

滅菌f培養(yǎng)微生物用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)器皿、接種工具

1、消毒

(1)概念：使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法,

殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。

(2)消毒方法：

1)煮沸消毒法：100℃煮沸5~6min,可以殺死微生物

的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽抱。

2)巴氏消毒法：62~65℃下消毒30min或80~90℃處

理30s-1min,適合一些不耐高溫的液體，如牛奶?？?/p>

以殺死牛奶中的絕大多數(shù)微生物，并且不破壞牛奶的營(yíng)

養(yǎng)成分。

3)化學(xué)藥劑消毒法：用70%酒精擦拭雙手、用氨氣消毒

水源等。

4)紫外線消毒法：接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)在使用

前可用紫外線照射30mino在照射前，適,噴灑石碳酸

或煤酚皂溶液等消毒液，可以加強(qiáng)消毒效果。

2、滅菌

(1)概念：指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有微

生物，包括芽抱和抱子。

釋放芽抱

發(fā)一

芽

地

芽袍：有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)萌

發(fā)

胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫

細(xì)菌

做芽袍。芽抱壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)

境有很強(qiáng)的抵抗力。

袍子：細(xì)菌、原生動(dòng)物、真菌和植物等

產(chǎn)生的一種有繁殖作用的細(xì)胞。能直接

青毒的他于生殖J

發(fā)育成新個(gè)體。

（2）滅菌方法

1）濕熱滅菌法

利用沸水、流通蒸汽或高壓蒸汽進(jìn)行

滅菌的方法。高壓蒸汽滅菌效果最好,

100kPa.1210c下維持15~30min,n

常用于培養(yǎng)基、無菌水等的滅菌。

注：使用后的培養(yǎng)基必須滅菌才能丟棄，以免污染環(huán)境。

2）干熱滅菌法

將滅菌物品放入密閉容器如干熱滅菌箱,

在160~1709的熱空氣中維持2~31%

適用于耐高溫，需保持干燥的物品，如：

玻璃器皿（如試管、培養(yǎng)皿、吸管、注射器）

金屬器具（如針頭、鎰子、剪刀等）的滅菌

3）灼燒滅菌法

將滅菌對(duì)象直接在酒精

燈火焰的充分燃燒層灼

燒，使微生物燃燒，可以

迅速地徹底地滅菌

適用于微生物的接種工具，如：

涂布器、接種環(huán)、接種針或其它金屬用具,

試管口、瓶口等容易被污染的部位。

防止外來雜菌入侵

關(guān)鍵

----------消毒---------無菌技術(shù)-------滅菌-------------

較為溫和的理化生方法條件強(qiáng)鞏的理化因素

殺死物體表面或內(nèi)部的部分注里，殺死物體表面或內(nèi)部所有

微生物，不包括芽匏和匏子。用木微生物，包括芽匏和匏子。

煮沸消毒、巴氏消毒、化熊常見濕熱滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌

學(xué)藥物消毒、紫外線消毒

A實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周

的物品相接觸

A為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在超凈

工作臺(tái)并在酒精燈火焰附近進(jìn)行。

A使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)，一定要將鍋內(nèi)冷空氣徹底排

出，才能密封升溫，否則，可能引起鍋內(nèi)壓力達(dá)到設(shè)

定值而溫度不能達(dá)到要求。

A高壓蒸汽滅菌鍋滅菌完畢后，不可立刻放氣減壓，否

則瓶?jī)?nèi)液體會(huì)劇烈沸騰，沖掉瓶塞而外溢，甚至導(dǎo)致

容器爆裂，須待滅菌鍋內(nèi)壓力降至與大氣壓相等后才

可打開排氣閥開蓋；

A用酒精消毒時(shí)，體積分?jǐn)?shù)為70%?75%的酒精消毒效

果較好，原因是酒精濃度過高時(shí)，菌體表面蛋白質(zhì)變

性過快，從而凝固形成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能滲

入其中，酒精濃度過低時(shí)，殺菌能力減弱。

如）微生物的純培養(yǎng)

1、培養(yǎng)物：將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的

含特定種類微生物的群體（培養(yǎng)基可以是液體或固

體，培養(yǎng)物只指微生物，不包含培養(yǎng)基成分或微生

物的代謝廢物卜

純培養(yǎng)物：由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體。

單菌落一般是由單個(gè)微生物在固體培養(yǎng)基上繁殖

形成的純培養(yǎng)物。

純培養(yǎng)：獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。

2、微生物的純培養(yǎng)步驟：配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、

分離和培養(yǎng)。

3、實(shí)例：酵母菌的純培養(yǎng)

(1)原理：將酵母菌微生物群體分散呈單個(gè)細(xì)胞，方法

是平板劃線法和稀釋涂布平板法，然后對(duì)單個(gè)細(xì)胞

進(jìn)行培養(yǎng)，使之成為單個(gè)菌落。

(2)實(shí)驗(yàn)步驟

1)制備培養(yǎng)基―滅菌-倒平板

a.稱或b.溶化c.分裝

翻轉(zhuǎn)

注意事項(xiàng):

①配制培養(yǎng)基后有時(shí)需要用緩沖液調(diào)節(jié)pH,調(diào)節(jié)pH應(yīng)在

定容后，滅菌前進(jìn)行。

②對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行濕熱滅菌，對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行干熱滅菌。

③培養(yǎng)基冷卻至5(TC左右，在酒精燈火焰附近倒平板。

④倒平板時(shí)打開錐形瓶棉塞后讓瓶口迅速通過火焰，是

為了防止瓶口微生物污染培養(yǎng)基。

⑤平板冷卻凝固后倒置的原:既能防止皿蓋上的冷凝

水掉入培養(yǎng)基，造成污染，又可使培養(yǎng)基中的水分更好

地蒸發(fā)。

⑥怎么確定所倒平板未被雜菌污染？

將所倒平板放入37P的恒溫箱中培養(yǎng)12h~24h,觀察

是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底。

2）接種與分離菌種

平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃

線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。

在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的

肉眼可見的子細(xì)胞群體。

觸物群?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)胞3單個(gè)麻

平板劃線過程:

①灼燒接種②在火焰旁冷③試管口④在火焰附近

環(huán)，直至接種卻接種環(huán)，拔通過火焰用接種環(huán)蘸取

環(huán)金屬絲燒紅出酵母菌培養(yǎng)—環(huán)菌液

液試管的棉塞

⑦灼燒接種環(huán)，待其冷

⑤試管口通過火焰,⑥將皿蓋打開一條縫

卻后，從第一次劃線的

并塞上棉塞隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基

末端開始作第二次劃線。

表面迅速劃三至五條平重復(fù)以上操作，作第三、

行線，蓋上皿蓋四、五次劃線。

連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法

注意事項(xiàng)：

①首先灼燒接種壞，避免接種環(huán)上可能存在的微生物污

染培養(yǎng)物，其次冷卻后再熊取培養(yǎng)液，是防止接種環(huán)溫

度過高殺死菌種。

②接種環(huán)只熊一次菌液，然后在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)

劃線多次，每次都是從上一次劃線的末端開始，劃線首

尾不能相接。

③劃線不能劃破培養(yǎng)基的原因：若劃破，微生物接種于

裂口內(nèi)，生長(zhǎng)空間變小，裂口會(huì)擠壓菌落，使菌落形態(tài)

發(fā)生改變，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落，影響培養(yǎng)、分離效

果，難以達(dá)到分離單菌落的目的。

④接種環(huán)的灼燒時(shí)期及目的

灼燒時(shí)期目的

取菌種前殺死接種環(huán)上原有微生物。

殺死上次劃線時(shí)殘留菌種，使下一次劃線的菌種

每次劃線前直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時(shí)菌

⑤劃3個(gè)平板（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）和1個(gè)不劃線（空白對(duì)照卜

⑥劃線后，培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)。

3）培養(yǎng)酵母菌

完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的

平板（一般做三組，重復(fù)實(shí)驗(yàn)）和一個(gè)未接種的平板倒

置，放入28P左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍

有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48ho

六、微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

自然界中微生物數(shù)

■繁多，種類龐雜,

要想從中分離出需

要的特定微生物并

不容易，尤其當(dāng)要分離的微生物在混合菌群中不是優(yōu)勢(shì)

種群時(shí)，更難實(shí)現(xiàn)，僅通過一般的平板劃線法或稀釋涂

布平板法很難實(shí)現(xiàn)。

?思路一：根據(jù)生物與環(huán)境相適應(yīng)的觀點(diǎn)從自然界直接獲

取特定微生物。

美國(guó)黃石國(guó)家公園的熱泉f水生棲熱菌f提取出耐高溫的

DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）-PCR。

篩選原因:水生棲熱菌能在70-80C高溫條件下生存，而

絕大多數(shù)微生物在此條件下不能生存。

?思路二：實(shí)驗(yàn)室篩選：人為提供有利于目的菌生長(zhǎng)的條

件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度和pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微

生物的生長(zhǎng)，即配制選擇培養(yǎng)基。

（一）選擇培養(yǎng)基

（1）概念：在微生物學(xué)中，允許特定種類的微生物生長(zhǎng),

同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。

（2）選擇培養(yǎng)基的類型

類型條件分離得到的菌種

改變培養(yǎng)條件70?80c的高溫水生棲熱菌

加入青霉素酵母菌、霉菌等真菌

添加某種化學(xué)物質(zhì)

高濃度食鹽金黃色葡萄球菌

-r,*V.1.Qcdnrtll

培養(yǎng)基中加氨節(jié)青霉素

培養(yǎng)基原

沒有氨采青霉素抗

性的細(xì)菌被淘汰

沒有氨具有氨

羊青霉羊青霉

素抗性素抗性

的細(xì)菌的菌落

(3)選擇培養(yǎng)基的配方設(shè)計(jì)

KH2P041.4g

牛肉膏5.0gNaH2P042.1g

蛋白陳10.0gMgS04-7H200.2g

NaCl5.0g葡萄糖10.0g

瓊脂20.0g尿素C0(NH2)21.0g

瓊脂15.0g

蒸館水定容到1000ml

蒸館水定容到1000ml

尿素會(huì)被土壤中的尿素分解菌（異養(yǎng)生物）分解成NH3,

這些細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣煞?

麻薜釋放到細(xì)胞外,催化土壤中的尿素:3

電也可以作為這些細(xì)菌生長(zhǎng)的氮源。

尿素分解菌

N

H2

尿素>NH3（細(xì)菌生長(zhǎng)的氮源）

編號(hào)①②③④⑤

成分(NH)SOCaCI,HQ

474KH?PO4FeSO4

含量0.4g4.0g0.5g0.5g100mL

該選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，可用于篩選自養(yǎng)型微生物

(利用空氣中的C02),若用該培養(yǎng)基來分離尿素分解菌,

應(yīng)去除①成分，加入尿素和不含氮的有機(jī)物。

(二)選擇培養(yǎng)與計(jì)數(shù)

1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌？

分離：獲得分解尿素的細(xì)菌的純培養(yǎng)物

稀釋涂布平板法

計(jì)數(shù)：測(cè)定分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量

(1)稀釋涂布平板法的概念

將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的

菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。

注意：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一

個(gè)單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。

(2)兩個(gè)基本操作：梯度稀釋和涂布平板

(3)稀釋涂布平板法操作過程

①梯度稀釋

①鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中

注意：取土樣用的小鐵鏟和盛土

樣的的紙袋在使用前都要滅菌

^ImL

1mL

1x1071xIO61x1051乂1。41x1031x102

1x10

90mL

JJ）無菌水

91nL無菌水②將10g土樣加入盛有

90mL無菌水的錐形瓶中,

取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。充分搖勻，制成菌液。

②涂布平板

107106106104103102

④將涂布器浸在盛1I10

有酒精的燒杯中。91nL無菌水

③取0.1mL菌液，

注意：多余的酒滴加到培養(yǎng)基表面。⑥用涂布器將菌液

精在燒杯中滿盡,均勻地涂布在培養(yǎng)

然后再放在火焰基表面。涂布時(shí)可

上灼燒。轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂

布均勻。

⑤將涂布器放在火帽上灼燒,注意：各濃度分別

待酒精燃盡、涂布器冷卻后,涂布3個(gè)平板（重復(fù)

再進(jìn)行涂布。實(shí)臉）

③菌落培養(yǎng)

待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后,

將平板倒置，放入30?37℃的恒

溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)1?2d。

特別注意：

1、10g土樣加入盛有90mL無菌水中后，已稀釋10倍,

再計(jì)算時(shí)，不要忽略。

2、細(xì)菌一般選用104、105、106稀釋倍數(shù)的菌液進(jìn)行

涂布培養(yǎng)。

3、由于使用的是選擇培養(yǎng)基，所以一般情況下，獲得的

單菌落即目的菌，但因?yàn)橛行┪⑸锟梢岳媚康木?/p>

代謝產(chǎn)物來生長(zhǎng)繁殖，所以還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

4、過程中所有操作都應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行;

5、將涂布器從酒精中取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯

中滴盡，然后再放在火焰上灼燒；不要將過熱的涂布器

放在盛有酒精的燒杯中，以免引燃酒精。

(4)微生物的數(shù)量測(cè)定

①稀釋涂布平板法——間接計(jì)數(shù)法

②顯微鏡直接計(jì)數(shù)法——直接計(jì)數(shù)法

1)方法1:稀釋涂布平板法

①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)

的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通

過計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含

有多少活菌。

②要求：A、選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以

保證獲得菌落數(shù)為30-300、適于計(jì)數(shù)的平板。B、

同

一稀釋度至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù),然后求平

均值;

(分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，要考慮重復(fù)組結(jié)果是否接近，如

果相差太大，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。)

③計(jì)算公式：

每克(或每mL)樣品中的菌落數(shù)=(C+V)XM

C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，

V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL),

M代表稀釋倍數(shù)。

?統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)表示。

④缺點(diǎn)：統(tǒng)計(jì)的整數(shù)往往比通董的實(shí)際數(shù)目少

【原因：當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察

到的只是一個(gè)菌落】

醺計(jì)數(shù)板：對(duì)細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行

觀察和計(jì)數(shù)；

每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)=每小格平均細(xì)菌數(shù)*400x104x

稀釋倍數(shù)

優(yōu)點(diǎn)：快速、直觀

缺點(diǎn)：①不能區(qū)分死菌和活菌-結(jié)果偏大

②不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)。

③個(gè)體太小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察。

主要方法稀釋涂布平板法平板劃線法

系列梯度稀釋操作和涂布平接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)

主要步驟

板操作劃線

接種工具涂布器接種環(huán)

從適宜稀釋度的平板上的菌在具有顯著的菌落特征的區(qū)域

菌體獲取

落中挑取菌體挑取菌體

可以計(jì)數(shù)，但是操作復(fù)雜，

能否用于計(jì)數(shù)不能計(jì)數(shù)

需涂布多個(gè)平板

都能將微生物分散到固體培養(yǎng)基表面，以獲得單細(xì)胞菌落,

達(dá)到分離純化微生物的目的，也可以觀察菌落特征。

八、探究?實(shí)踐：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

(1)從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌

(2)統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌

2、實(shí)驗(yàn)原理

絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成服

酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的選

擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。

3、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

利用以“尿素作為唯一氮源”的選擇培養(yǎng)基，可以從土

壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。同時(shí)配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基(牛

肉膏、蛋白陳培養(yǎng)基)作為對(duì)照組，來判斷選擇培養(yǎng)基

是否具有選擇作用。

若基礎(chǔ)培養(yǎng)基或完全培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的菌落數(shù)菌多于該選

擇培養(yǎng)基，則該選擇培養(yǎng)基具有選擇性。

培養(yǎng)基一培養(yǎng)基二

牛肉膏5.0gKH2PO41.4g

wanru2.1g

蛋白陳10.0gI24

teS0?7H(0.2g

NaCI5.0g42

葡荀檐10.0g

瓊脂20.0g

尿素CO?%)21.0g

蒸博水定容到1000mI

瓊脂15.0g

蒸憎水定容到1000ml

4、操作步驟

取樣地點(diǎn)要求：酸堿度接近中性的潮濕土壤

1）土壤取樣」取樣過程：鏟去表土（一般3cm左右）

,注意事項(xiàng)：鐵鏟和取樣袋在使用前都要滅菌；事畢洗手。

中士什.小"選擇培養(yǎng)基*以尿素為唯一氮源

2）配制培養(yǎng)基完全培養(yǎng)基（如牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基）——作為對(duì)照，

來判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用

3）樣品的稀釋與涂布平板

103104

10,

9mL無菌水

已

MMQ

I。"土樣勰夢(mèng)

1尊一107-O

27.O

選擇培養(yǎng)基?*-07V10510610

一

（平行重復(fù)）5一⑤107O

310

f"修f?

牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基4

（作為對(duì)照）B組C組D組

①3組已接種的選擇培養(yǎng)基：

對(duì)土壤中分解尿素的細(xì)菌分離和計(jì)數(shù)；可分離得到單菌落。

②1組已接種的牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基：

判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用；可得到多種菌落。

③未接種的選擇培養(yǎng)基:

驗(yàn)證選擇培養(yǎng)基中是否含有雜菌；無菌落。_____________

④未接種的牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基：

驗(yàn)證牛肉青蛋白陳培養(yǎng)基中是否含有雜菌;無菌落。

4）微生物的培養(yǎng)與觀察

①培養(yǎng)條件：不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。

*細(xì)菌一般在30-37C的溫度下培養(yǎng)「2d

②觀察：每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。

*防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目

③一般來說，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征,

如形狀、大小和顏色等。

5、尿素分解菌的鑒定

(1)原理：

在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。

培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高,指示劑將變紅，說明該

細(xì)菌能夠分解尿素。

CO(NH2)2+H2O」CO2+2NH3呈成性，遇酚紅指示劑呈紅色。

時(shí)M陽(yáng)性

6、選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的區(qū)別

項(xiàng)目郵培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基

加入某種指示劑或化學(xué)藥品（不影響微

加入不影晌甚至促進(jìn)目標(biāo)微生物生

生物正常生長(zhǎng)），使微生物的臬種代謝

原理長(zhǎng)，而抑制或阻止其他種類微生物生

產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定指示劑或化學(xué)

長(zhǎng)的化學(xué)物質(zhì)

藥品發(fā)生反應(yīng)

用途培養(yǎng)、分離出目標(biāo)微生物鑒別目標(biāo)微生物

培養(yǎng)酵母菌和霉菌時(shí)，可在培養(yǎng)基中

可用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒定飲用水或乳

加入青霉素，抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)；利用

舉例制品中是否含有大腸桿菌（若有，則菌

以尿素為唯一包源的培養(yǎng)基來培養(yǎng)可

落呈黑紫色，且?guī)в薪饘俟鉂桑?/p>

分解尿素的細(xì)菌

.?巴漢

圖示尿素分解葭

用赤霉素溶液浸泡

用清水浸泡48h,

48h,切半放入加

切半放入加淀粉

淀粉的瓊脂平板。

的瓊脂平板。

放入種子6h后,用碘液沖洗平板。

九、發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié)

發(fā)酵

罐內(nèi)

發(fā)酵

1、選育菌種

1）目的：獲得性狀優(yōu)良的菌種。

2）菌種來源：從自然界中篩選、誘變育種（產(chǎn)生的是常

規(guī)菌，生產(chǎn)微生物自身能合成的產(chǎn)品，如青騫素x基因

工程、細(xì)胞工程定向育種（產(chǎn)生的是工程菌，生產(chǎn)微生

物自身不能合成的產(chǎn)品，如胰島素）

3）菌種選育的重要性（意義）

優(yōu)良的菌種不僅具有健壯，不易退化，其發(fā)酵產(chǎn)品的

產(chǎn)?高、質(zhì)■穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，它往往還會(huì)賦予發(fā)酵產(chǎn)品獨(dú)

特的風(fēng)味，因此菌種選育環(huán)節(jié)在很大程度上決定了生物

發(fā)酵產(chǎn)物的成敗

4）實(shí)例

篩選產(chǎn)酸量高的黑曲霉用來生產(chǎn)檸檬酸；

使用基因工程改造的啤酒酵母，加速發(fā)酵、縮短生產(chǎn)

周期

2、擴(kuò)大培養(yǎng)

1）目的：獲得更多的菌種。

2）原：工業(yè)發(fā)酵罐的體積一般較大此，需要接入

的菌種總體積大。

3）擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)基：一般為液體培養(yǎng)基。

3、培養(yǎng)基的配制、滅菌

1）配制要求

①在菌種確定之后（結(jié)合菌種代謝特點(diǎn)）選擇原料制

備培養(yǎng)基;

②在生產(chǎn)實(shí)踐中，培養(yǎng)基的配方要經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)才能

確定（即不斷優(yōu)化培養(yǎng)基）;

2）滅菌原

發(fā)酵工程種所用的菌種大多是單一菌種，一旦有雜菌

污染，可能導(dǎo)致產(chǎn)■大大降低。

如在青霉素生產(chǎn)過程中如果污染了雜菌，某些雜菌會(huì)

分泌青騫素酶將青霉素分解掉。

培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須經(jīng)過嚴(yán)格的滅菌

4、接種

將擴(kuò)大培養(yǎng)后的菌種投放到發(fā)酵罐中

5、發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵

1）地位：發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)

2）要求：①發(fā)