臨床生物化學方法的選擇建立和評價課件

教學目的通過學習實驗室主要危害，掌握臨床實驗室的生物安全及防護。教學要求掌握

臨床實驗室的生物安全及防護熟悉

實驗室主要危害的來源了解

臨床實驗室的其他安全SARS事件是指嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥，于2002年在中國廣東順德首發(fā)，并擴散至東南亞乃至全球，直至2003年中期疫情才被逐漸消滅的一次全球性傳染病疫潮。SARS實驗室人員感染SARS情況Dr.CarloUrbaniWHO的傳染病專家，首次向世界報告了SARS病例2003年3月29日在泰國曼谷因SARS不治病逝，終年46歲，是死于SARS的首名WHO官員教訓：1967年德國馬爾堡病毒實驗室感染事件2001年10月美國發(fā)生炭疽恐怖事件，造成人員傷亡和世界范圍的社會恐慌2003年9月新加坡國立大學研究生院實驗室中感染SARS病毒2003年12月一名臺灣的SARS研究人員在實驗室感染SARS病毒2004年4月安徽、北京先后發(fā)現(xiàn)新的SARS病例，經(jīng)證實分別來自于在中國疾病預防控制所實驗室受到SARS感染的兩名工作人員?！訌妼嶒炇疑锇踩ㄔO，防止無意或故意造成公共衛(wèi)生危害事件。

臨床實驗室安全重要性了解實驗室生物感染方面的知識防止實驗人員的感染防止感染因子的外泄采取適當?shù)纳锇踩雷o措施掌握正確的實驗室操作方法臨床實驗室安全的內(nèi)容生物安全化學安全放射安全防火安全輻射安全用電安全第一節(jié)

臨床實驗室的主要危害源生物危害源細菌（bacteria）：布魯菌屬、銅綠假單胞菌屬、衣原體屬、腸道致病菌、結(jié)核分枝桿菌病毒（virus）：肝炎、HIV等真菌（fungus）：莢膜組織胞漿菌、真菌孢子寄生蟲（parasite）：瘧原蟲、利什曼原蟲

化學危害源

常見的危險性化學藥品

物理危害源

火的危害電的危害：設備老化、無斷路器和漏電保護器，未定期檢查和測試電氣設備等電離輻射噪聲

第二節(jié)

臨床實驗室的生物安全臨床實驗室生物污染的種類

根據(jù)生物污染的對象分為對空氣的污染–

氣溶膠對水的污染

–

污水的排出對人體的感染-吸入及接觸污染物

對物體表面的污染-傾倒、不正確的擦洗等

實驗室獲得性感染途徑經(jīng)空氣傳播吸入含病原體的氣溶膠、接種環(huán)操作、離心、振蕩、打開培養(yǎng)皿等經(jīng)口傳播攝入病原體、工作區(qū)進餐、吸煙導致“手-口污染”直接接種針刺、劃傷等由皮下或黏膜接觸戴隱形眼鏡、徹底清潔手部節(jié)肢動物媒介喂養(yǎng)動物臨床實驗室的生物安全防護

實驗室生物安全防護：在實驗室環(huán)境下處理和保存感染性物質(zhì)的過程中采用一系列的防護措施。包括一級防護二級防護臨床實驗室的生物安全防護一級防護采用規(guī)范的微生物技術和適當?shù)陌踩O備，以保護實驗室工作人員和室內(nèi)環(huán)境安全免受感染性物質(zhì)污染。二級防護包括合理的實驗室設施設計和嚴格規(guī)范的操作流程，保護實驗室外環(huán)境不受感染性物質(zhì)污染。三要素：實驗室操作和技術、安全設備、實驗室設施設計臨床實驗室的生物安全防護

根據(jù)處理微生物及毒素的危害程度分為臨床實驗室生物安全水平（BSL）分級生物安全1級（BSL-1）生物安全2級（BSL-2）生物安全3級（BSL-3）生物安全4級（BSL-4）基礎實驗室防護實驗室等級最高典型的一級生物安全水平實驗室（BSL-1）通常對健康成人不致病、對實驗室人員及環(huán)境潛在危害性小的病原體在生物安全柜中進行可能發(fā)生氣溶膠的操作程序。門保持關閉并貼上適當?shù)奈ｋU標志。潛在被污染的廢棄物同普通廢棄物隔開。典型的二級生物安全水平實驗室（BSL-2）適用于對實驗人員和環(huán)境中

具有中等潛在危險的病原體。臨床實驗室的生物安全防護生物安全3級（BSL-3）適用于可通過氣溶膠傳播的，可引起嚴重或致死性疾病的病原體的操作。生物安全4級（BSL-4）適用于對人體具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效地疫苗或治療方法的致病微生物及其毒素的實驗操作。不同生物安全水平對實驗室設施的要求a在環(huán)境與功能上與普通流動環(huán)境隔離b取決于排風位置c取決于實驗室中所使用的微生物因子d例如：觀察窗、閉路電視、雙向通訊設備生物安全設備分類

生物安全柜（biosafetycabinet；biologicalsafetycabinet）(一)、生物安全柜的基本工作原理

生物安全柜是防止操作處理過程中某些含有危險性或未知性生物微粒發(fā)生氣溶膠散逸的箱形空氣凈化負壓安全裝置※生物安全柜的基本設計的兩個重要改進：

1、HEPA過濾器

2、HEPA過濾器+層流技術生物安全柜的工作原理主要是將柜內(nèi)空氣向外抽吸，使柜內(nèi)保持負壓狀態(tài)，通過垂直氣流來保護工作人員；外界空氣經(jīng)高效空氣過濾器（high-efficiencyparticulateairfilter,HEPAfilter）過濾后進入安全柜內(nèi)，以避免處理樣品被污染；柜內(nèi)的空氣也需經(jīng)過HEPA過濾器過濾后再排放到大氣中，以保護環(huán)境。

(二)、生物安全柜的分類根據(jù)防護程度的不同，通常將生物安全柜分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級，可適用于不同生物安全等級的媒質(zhì)的操作CLASSI一級生物安全柜Ⅰ級生物安全柜因不考慮處理樣品是否會被進入柜內(nèi)的空氣污染，故對進入柜內(nèi)的空氣潔凈度要求不高空氣的流動為單向、非循環(huán)式，空氣流經(jīng)HEPA過濾器后進入柜內(nèi)，通過工作臺面后又被過濾、經(jīng)排氣口排出為保護操作人員安全，其向內(nèi)的非循環(huán)吸入氣流必須遠離操作者，故要求在使用前方有操作窗口、無手套的Ⅰ級生物安全柜時，避免人員在安全柜前快速走動或操作人員完成操作后將手臂快速從柜內(nèi)抽出為保護環(huán)境，安全柜中的氣體在外排到大氣以前必須先經(jīng)過HEPA過濾器過濾Ⅱ級生物安全柜Ⅱ級生物安全柜是指用于保護操作人員、處理樣品安全與環(huán)境安全的通風安全柜通常適用于生物危險度等級為1、2、3的媒質(zhì)的操作。當有毒化學物質(zhì)或放射性核物質(zhì)被用于微生物研究或制藥的添加物時，應使用專為此目的設計制造的II級生物安全柜

Ⅱ級生物安全柜為臨床生物防護中應用最普遍的一類生物安全柜

臨床中處理高濃度或大容量感染性材料時，以Ⅱ級生物安全柜應用最多

CLASSIIA生物安全柜B1型生物安全柜維持穿過工作臺開口面的最小平均吸入口風速（計算或測量值）為0.5m/s（100ft/min）經(jīng)HEPA過濾器過濾后的垂直氣流中的絕大部分是由未污染的循環(huán)吸入氣流組成（即柜內(nèi)70%氣體通過排氣口HEPA過濾器排除，30%的氣體通過供氣口HEPA過濾器再循環(huán)至工作區(qū)）經(jīng)HEPA過濾器過濾后的大部分污染的垂直氣流，通過專用風道過濾后排入大氣所有被生物污染的風道和靜壓箱應保持負壓，或被負壓的風道和靜壓箱包圍CLASSIIB1生物安全柜

Ⅱ級B2型生物安全柜

維持穿過工作臺開口面的最小平均吸入口風速（計算或測量值）為0.5m/s（100ft/min）經(jīng)HEPA過濾器過濾后的垂直氣流是由實驗室或室外空氣送入的（即：安全柜中排出的氣體不進入垂直氣流的循環(huán)過程）所有的吸入氣流和垂直氣流經(jīng)HEPA過濾器過濾后排入大氣，不再進入安全柜循環(huán)或返回實驗室所有污染的風道和靜壓箱應保持負壓，或是被直接排風的風道和靜壓箱包圍

CLASSIIB2生物安全柜Ⅲ級生物安全柜Ⅲ級生物安全柜是完全密閉、不漏氣結(jié)構(gòu)的通風安全柜工作空間內(nèi)為經(jīng)HEPA過濾器凈化的無渦流的單向流空氣安全柜正面上部為觀察窗，下部為手套箱式操作口。在安全柜內(nèi)的操作是通過與安全柜相連接的橡皮手套進行的CLASSIIB3生物安全柜CLASSIII生物安全柜（手套柜）臨床實驗室的安全設備生物安全柜高壓滅菌器臨床實驗室的安全設備各種沖淋洗眼器安全防護用具（個體防護）

安全防護用具是避免操作人員暴露于氣溶膠、噴濺物以及意外接種等危險的一個屏障。可根據(jù)工作的性質(zhì)來選擇。（一）實驗服實驗服包括一般操作服即工作服、隔離衣、連體衣的防護效果較一般操作服好，因此更適用于在微生物學實驗室以及生物安全柜中的操作。需進一步防護時應在實驗服或隔離衣外面穿上圍裙。注意這些防護服、裙不能穿離實驗室區(qū)域。（二）護目鏡和面罩（三）手套1、一次性手術用手套（用于實驗室一般操作和處理感染性物質(zhì)、血液、體液時）。2、替代加粉乳膠手套（用于可發(fā)生皮炎及速發(fā)型超敏反應等變態(tài)反應者）。3、不銹鋼網(wǎng)孔手套（在進行尸體解剖等可能接觸尖銳器械情況時）。安全防護用具（個體防護）安全防護用具（個體防護）（四）鞋

應防滑，從事可能出現(xiàn)液體材料漏出的工作應穿防水鞋。進入特殊區(qū)域（需防靜電）或SBL3和SBL4實驗室要求使用專用鞋。（一次性或橡膠鞋）感染性微生物危險度等級分類（國家規(guī)定和法律法規(guī)）2004年11月5日，國務院69次常務會議通過中華人民共和國國務院424號令，《病原微生物實驗室生物安全管理條例》總理溫家寶2004年11月12日感染性微生物危險度等級分類《人間傳染的病原微生物名錄》

（中華人民共和國衛(wèi)生部制定）

2006年1月11日----是臨床實驗室進行生物危害評估和設立生物安全等級的重要指南感染性微生物危險度等級分類

危險度1級不太可能引起人或動物致病的微生物。危險度2級病原體能夠?qū)θ嘶騽游镏虏。珜嶒炇夜ぷ魅藛T不易導致嚴重危害。對感染有有效的預防和治療措施。（個體危險中等，群體危險低）

危險度3級病原體通常能引起人或動物的嚴重疾病，但一般不會發(fā)生感染個體向其他個體的傳播，并且對感染有有效的預防和治療措施。（個體危險高，群體危險低）危險度4級病原體通常能引起人或動物的嚴重疾病，并且很容易發(fā)生個體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒有有效的預防和治療措施。（個體和群體危險均高）（三）實驗室生物安全防護水平危險度安全水平實驗室類型實驗操作安全設施4級BSL4最高防護（P4）實驗室危險病原體研究BSL3+氣鎖入口、出口淋浴+污染品特殊處理III級或II級生物安全柜+正壓服，雙開門高壓滅菌鍋（穿過墻壁、墻體）、經(jīng)過濾空氣，人員安全監(jiān)控3級BSL3防護（P3）實驗室專門特殊的診斷研究BSL2+特殊防護服+準入制度+定向氣流生物安全柜：密閉消毒；通風系統(tǒng)；密閉消毒；通風系統(tǒng)；雙門入口；人員安全監(jiān)控。2級BSL2基礎（P2）實驗室初級衛(wèi)生服務，診斷研究微生物操作規(guī)范（GMT）、防護服、生物危險標志開放實驗臺；生物安全柜；（BSC）[防護可能產(chǎn)生的氣溶膠]；現(xiàn)場高壓滅菌鍋；建議向內(nèi)氣流通風系統(tǒng)（HEPA過濾排風）。1級BSL1基礎（P1）實驗室基礎教學、研究標準微生物學操作規(guī)程開放實驗臺；不需要安全設施。臨床實驗室的消毒與滅菌抑制和殺死病原微生物物理消毒滅菌方法

化學消毒滅菌法臨床實驗室的消毒與滅菌

物理消毒滅菌方法

熱力滅菌法干熱：高溫使菌體蛋白分子變性及細胞質(zhì)濃縮使新陳代謝受到障礙而死亡。（焚燒、干烤、紅外線）濕熱：最常用，使菌體蛋白變性、凝固；細菌核酸降解；損傷細胞膜。輻射殺菌法通過紫外線照射和射線，使菌體蛋白光解、變性、核酸酶被破壞。臨床實驗室的消毒與滅菌超聲波殺菌法利用超聲波通過水時產(chǎn)生的腔化作用，造成細菌的崩破與裂解。

濾過除菌法過濾除去細菌的方法。臨床實驗室的消毒與滅菌

化學消毒滅菌法浸泡法、擦拭法、薰蒸法、噴霧法、環(huán)氧乙烷氣體密閉消毒法臨床實驗室的消毒與滅菌消毒劑的種類高效：甲醛、戊二醛、過氧乙酸、環(huán)氧乙烷、有機汞化合物，可殺滅細菌、病毒、真菌、芽孢在內(nèi)的一切微生物。中效：乙醇、酚類碘、含氯消毒劑等，可殺滅芽孢以外的其他各種微生物。低效：苯扎溴銨（新潔爾滅）、氯己定（洗必泰）等，殺滅結(jié)核分枝桿菌以外的病原體。臨床實驗室感染性廢物的處理

廢物的隔離廢物的包裝廢物的存放廢物的轉(zhuǎn)運廢物的處理方法

焚燒壓力蒸汽滅菌

干熱處理

氣體滅菌

化學消