人乳頭瘤病毒

關于人乳頭瘤病毒第1頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三人乳頭瘤病毒（HPV）HPV(人類乳頭瘤病毒)是以人類為唯一宿主的一種DNA病毒，現在已經明確，HPV與宮頸癌的發(fā)生高度相關。醫(yī)學數據表明，60％～70％的女性感染過HPV病毒，99.8％的宮頸癌患者中可以檢測到HPV，而HPV陰性者幾乎不會發(fā)生宮頸癌。除此之外，98％以上的宮頸疾病患者體內也存在HPV。第2頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三

目前有100余種型別HPV,約35種型別與生殖道感染有關，大約20種型別與癌癥相關。與宮頸癌相關的高危型HPV有13種：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68。與宮頸癌相關的低危型別有：6，11，40，42，43，44。第3頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三HPV基因分型檢測的意義?宮頸病變及宮頸癌的篩查，通過分型檢測對患者個體化評估，預測宮頸病變發(fā)生的風險度,決定篩查的間隔、治療方案的制定。?未明確診斷意義的非典型鱗狀細胞和腺細胞（AS-CUS/AGUS）和宮頸上皮內低度病變（LSIL）的分流，提高診斷的可信度，降低漏疹風險。?宮頸病變治療后的追綜和隨訪第4頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三HPV陽性還可提示生殖器贅生物為尖銳濕疣的可能性。HPV感染與宮頸炎的發(fā)生有密切關系。HPV病毒也可引起宮頸糜爛。第5頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三宮頸癌篩查方案1.基本篩查方案醋酸或碘染色后肉眼觀察陽性陰性陰道鏡活檢+病理檢查相應治療定期隨訪第6頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三2.一般篩查方案HPV檢測+傳統(tǒng)巴氏涂片HPV（-）Cyto≤ASC-USHPV（+）Cyto≤ASC-USHPV（-）Cyto≥ASC-HHPV（+）Cyto≥ASC-H隨訪（次/3-5年隨訪（次/年陰道鏡檢查/多點活檢+ECC相應治療（-）（+）第7頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三3.最佳篩查方案HPV檢測+液基細胞學檢查HPV（-）Cyto≤ASC-USHPV（+）Cyto≤ASC-USHPV（-）Cyto≥ASC-HHPV（+）Cyto≥ASC-H隨訪（次/3-5年隨訪（次/年陰道鏡檢查/多點活檢+ECC相應治療（+）（-）第8頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三HPV基因分型檢測的方法我科目前采用分子生物學前沿技術—多重PCR（聚合酶鏈式反應）先進技術，通過對HPV-DNA基因分型，可快速、準確地檢測常見的23種HPV亞型，包括5種低危型（HPV6，11，42，43，44）和18種高危型（HPV16，18，31，33，52等），覆蓋了現有已知的與人生殖道感染有關的絕大部分HPV亞型。第9頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三HPV基因分型芯片技術特點HPV基因芯片分型檢測，利用L區(qū)相對保守區(qū)的引物對待測樣品中可能HPV亞型進行廣譜擴增，再將產物與固定在膜芯片上的亞型特異性探針進行雜交，顯色并判讀結果。此技術靈敏、準確、高效、快速，并確定具體亞型。第10頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三GC-HPV檢測實驗流程第11頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三HPV檢測目標物：宮頸脫落細胞、疣體組織、組織切片、活體組織第12頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三陰道鏡下“活檢”組織的采集

通過陰道鏡觀察宮頸表面血管的病變，并用宮頸活檢鉗或宮頸管刮勺從宮頸上提取可疑組織，裝入有保存液的洗脫管中，旋緊管蓋，做好標識

第13頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三疣體樣本的采集用棉拭子在疣體表面剮蹭4-6遍，也可以把通過手術切除下來的疣體直接作為檢測樣本。第14頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三專用的宮頸脫落細胞采集器第15頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三步驟1.標本采集擴陰器暴露宮頸口，用棉拭子將分泌物擦去將宮頸刷伸入宮頸口，單向輕柔轉動4-5周將其放入有保存液的洗脫管中旋緊管蓋，做好標識將宮頸刷折斷，刷頭留在管中第16頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三步驟二：提取HPVDNA13000rpm10分鐘，棄上清

將標本轉移到1.5mL微量離心管中加50L裂解液充分懸浮沉淀100℃加熱10分鐘

13000rpm離心10分鐘，保留上清待用第17頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三步驟三：PCR擴增50℃ 15min95℃ 10min 94℃ 30s42℃ 90s40cycles72℃ 30s72℃ 5min

第18頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三

51℃洗脫15min步驟四：雜交與洗脫

設定雜交儀的溫度，無需看守，于51℃雜交1小時

PCR產物加入雜交緩沖液中,沸水浴變性10min第19頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三步驟五顯色與結果判讀POD孵育POD洗滌顯色前準備配制顯色液,顯色第20頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三檢測結果：膜條顯色直接提示感染的HPV亞型，包括高危及低危亞型。HPV6HPV11HPV16HPV18HPV31HPV33HPV35HPV39HPV42HPV43HPV45HPV51HPV52HPV53HPV56HPV58HPV44HPV59HPV66HPV68HPV73HPV83HPVMM4PC第21頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三適用人群：三年以上性行為或21歲以上有性行為的女性宮頸病變及宮頸癌患者治療后的隨訪尖銳濕疣患者咽喉部HPV感染導致的疣體增生的嬰幼兒第22頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三受檢前須知：月經來潮后10-18天為最佳檢查時間檢查前三天內不要用避孕藥膏等陰道內用藥物及陰道沖洗檢查前24小時最好不要有性生活第23頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三HPV檢驗報告單將分為高危及低危兩組報告結果，并注明兩組中具體的陽性亞型，未注明的表示為陰性。例：HPV-DNA分型報告單高危組陽性（+）16，33

低危組陰性（-）第24頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三結果分析HPV-DNA陽性：

20％－30％的HPV病毒感染會引起疾病，如果HPV-DNA陽性，并伴隨宮頸病變，應采取進一步醫(yī)學檢查，以明確病變性質。60％－70％的人僅是HPV陽性而未見宮頸病變，提示雖然發(fā)生HPV感染但并沒有導致宮頸病變或宮頸癌，只需每年進行一次HPV病毒篩查及相關其它檢查即可。HPV-DNA陰性：如果30歲以上的女性HPV檢測結果為陰性，同時細胞學檢查提示沒有發(fā)生任何病變，3－5年內都無需再做類似檢查。第25頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三HPV檢測后的處理HPV基因分型檢測陰性常規(guī)篩查陽性低危高危無癥狀一年后復查疣體組織相應治療（冷凍、激光）液基細胞學檢查（TCT）正常一年后復查HPV和TCT≤AS-CUS一年后復查HPV和TCT或陰道鏡檢查≥ASC-H陰道鏡活檢/多點活檢+ECC6個月后復查HPV和TCT（-）（+）相應治療第26頁，講稿共28頁，2023年5月2日，星期三HPV感染后的教育信息HPV檢測陽性只說明一種病毒感染，而不是疾病。感染是常見的，癌變是少見的。6