土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究

土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究指導老師：劉波博士、研究員匯報人：曾慶才

福州大學、福建省農(nóng)業(yè)科學院

2013年01月07日土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究報告內(nèi)容一、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀與趨勢二、研究意義三、研究目標與內(nèi)容四、研究方法與技術路線五、研究進度安排六、研究基礎七、已具備的研究條件土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究一、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀與趨勢作物枯萎病是由尖孢鐮刀菌引起的一類土傳性真菌病害。病原菌從根部侵入植物，引起維管束病變，引起萎蔫死亡。目前，枯萎病的防治主要是化學藥劑防治法，抗病育種法以及輪作法?；瘜W藥劑對環(huán)境的危害嚴重，抗病品種培育費時費力，輪作又限制，生物防治就成為最受青睞的辦法。土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究生防微生物主要有木霉菌、叢枝菌根真菌、非致病性尖孢鐮刀菌。其中，木霉菌對多種植物病害具有很好的生防作用，被認為具有重要生防價值。木霉菌已廣泛用于各種作物枯萎病的防治中，如Thangavelu,2003;楊春林,2008;LingN,2009。國內(nèi)外已有商品化木霉制劑，較多為液體發(fā)酵液及其孢子菌劑。采用固體發(fā)酵方式的較少。一、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀與趨勢土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究本實驗室已篩選出一株哈茨木霉菌FJAT-9040，研究表明，其對多種作物枯萎病有良好的防治作用。二、研究意義為了該菌更好的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，利用微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬產(chǎn)生的副產(chǎn)物—墊料作為主要原料進行固體發(fā)酵，形成哈茨木霉菌肥菌劑。一方面實現(xiàn)了資源的再利用，另一方面哈茨木霉菌肥菌劑在應用中可起到增強植物抗性及防病效果。土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究（一）研究目標三、研究目標與內(nèi)容1、探究不同營養(yǎng)物質(zhì)、培養(yǎng)條件對生防菌哈茨木霉產(chǎn)孢的影響。2、摸索生防菌哈茨木霉固體發(fā)酵的方式，為其擴大生產(chǎn)提供可靠依據(jù)。3、摸索生防菌哈茨木霉固體發(fā)酵過程中營養(yǎng)成分的變化，為其發(fā)酵過程中補料提供技術參數(shù)。4、探究生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝流程，為生防菌哈茨木霉菌劑工業(yè)化和商品化奠定基礎。土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究三、研究目標與內(nèi)容（二）研究內(nèi)容1、哈茨木霉固體發(fā)酵條件的研究2、哈茨木霉固體發(fā)酵方式的研究3、哈茨木霉固體發(fā)酵過程中營養(yǎng)成分的檢測4、哈茨木霉固體發(fā)酵產(chǎn)物的保存期及菌體穩(wěn)定性檢測5、哈茨木霉菌劑的田間應用土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究四、研究方法與技術路線（一）研究方法——生防菌哈茨木霉固體發(fā)酵條件的研究培養(yǎng)基配方的篩選墊料麩皮比例麥粒含量碳源及其濃度氮源及其濃度響應面法篩選最佳配方培養(yǎng)條件的篩選含水量接種量培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間響應面法篩選最佳培養(yǎng)條件土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究四、研究方法與技術路線（一）研究方法——生防菌哈茨木霉固體發(fā)酵方式的研究非滅菌條件下對菌株生長的影響滅菌條件下對菌株生長的影響固體發(fā)酵方式不同滅菌溫度不同滅菌時間土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究四、研究方法與技術路線（一）研究方法——生防菌哈茨木霉固體發(fā)酵方式的研究淺盤培養(yǎng)法蘑菇菌棒培養(yǎng)法固體發(fā)酵方式土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究四、研究方法與技術路線（一）研究方法——生防菌哈茨木霉固體發(fā)酵過程中營養(yǎng)成分的檢測近紅外光分析儀碳源的變化氮源的變化水分的變化營養(yǎng)成分的檢測土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究不同濕度不同溫度不同時間保存期及穩(wěn)定性檢測四、研究方法與技術路線（一）研究方法——哈茨木霉固體發(fā)酵產(chǎn)物保存期及菌體穩(wěn)定性檢測孢子萌發(fā)情況土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究四、研究方法與技術路線（一）研究方法——生防菌哈茨木霉FJAT-9040菌劑

的田間應用菌劑的田間應用種子出苗植株生長情況枯萎病防效茄科：番茄、茄子瓜類：黃瓜、甜瓜番茄、茄子番茄、茄子土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究四、研究方法與技術路線（二）技術路線生防菌哈茨木霉FJAT-9040菌劑生產(chǎn)工藝的研究發(fā)酵條件的研究發(fā)酵方式的研究營養(yǎng)成分的檢測產(chǎn)物的保存期和穩(wěn)定性的檢測菌劑的田間應用土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究五、研究進度安排2012年10-2013.32013年4-52013年6-72013年8-102013年11-2014.2菌株FJAT-9040固體發(fā)酵條件的研究固體發(fā)酵方式的研究固體發(fā)酵過程營養(yǎng)成分的檢測固體發(fā)酵產(chǎn)物保存期及穩(wěn)定性的檢測菌劑的應用土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究六、研究基礎張衡宇等對該菌株的研究主要包括生物學、液體發(fā)酵條件、對不同枯萎病病原菌的抑制作用。肖榮鳳等對該菌株的GFP標記進行了研究，獲得了1株熒光性狀穩(wěn)定的菌株FJAT-9295；同時對該菌株土壤定殖示蹤進行了研究，研究表明菌株在育苗土中定殖最好，泥土中定殖最差；種植茄子的定殖效果比未種植的好。（一）實驗室研究基礎土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究六、研究基礎通過單因素方法篩選出了墊料與麩皮的最佳產(chǎn)孢比例墊料：麩皮＝9：1，產(chǎn)孢量為4.6×107個/ml。培養(yǎng)基配方的篩選——墊料與麩皮的比例（二）本實驗研究基礎土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究六、研究基礎通過單因素方法篩選出了外加麥粒的含量，40%（體積比）產(chǎn)孢量為2.3×108個/ml。培養(yǎng)基配方的篩選——麥粒含量的篩選土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究六、研究基礎通過單因素方法篩選出了外加碳源為蔗糖，添加量為0.1g/50ml。培養(yǎng)基配方的篩選—碳源及其濃度的篩選土傳病害生防菌哈茨木霉菌劑生產(chǎn)工藝的研究七、已具備的研究條件

該菌株的生物學特性、液體發(fā)酵條件、對不同枯萎病病原菌的抑制作用已進行較為系統(tǒng)地研究。

本實驗室已成功對該菌株進行GFP標記，并