高考一輪微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用

高考一輪微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用第一頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用第四十四課時(shí)課題1～3微生物的實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)、分解纖維素的微生物的分離第二頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二1．微生物的分離和培養(yǎng)2.培養(yǎng)基對微生物的選擇作用3.利用微生物進(jìn)行發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物第三頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二營養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要來源碳源凡能提供所需碳元素的物質(zhì)構(gòu)成生物體的細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)無機(jī)化合物(CO2、NaHCO3)，有機(jī)化合物(糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等)氮源凡能提供所需氮元素的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物無機(jī)化合物(N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽)，有機(jī)化合物(尿素、牛肉膏、蛋白胨等)生長因子生長必不可少的微量有機(jī)物酶和核酸的組成成分維生素、氨基酸、堿基等1．微生物的營養(yǎng)物質(zhì)及功能

微生物的營養(yǎng)物質(zhì)主要有碳源、氮源、生長因子、無機(jī)鹽和水這五大類?？键c(diǎn)一培養(yǎng)基第四頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二(1)在微生物所需要的化合物中需要量最大的是碳源。自養(yǎng)微生物利用CO2或碳酸鹽作為碳源（以無機(jī)碳源作為主要碳源）。而異養(yǎng)微生物的碳源是有機(jī)物，最常利用的是糖類(特別是葡萄糖)；(2)微生物最常利用的氮源是氨鹽、硝酸鹽。能把氮?dú)庾鳛榈吹闹幌抻诠痰?、某些放線菌和藻類等。霉菌僅以無機(jī)氮素化合物為氮源；部分細(xì)菌不用有機(jī)氮化合物作為氮源就不能生長。(3)微生物之所以需要補(bǔ)充生長因子，是由于缺乏合成這些物質(zhì)所需要的酶或合成能力有限。

拓展提升各類微生物的營養(yǎng)物質(zhì)的主要來源第五頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二幾種常見微生物的營養(yǎng)能量來源微生物類型碳源氮源能源大腸桿菌硝化細(xì)菌根瘤菌固氮藍(lán)藻拓展提升糖類、蛋白質(zhì)等有機(jī)物蛋白質(zhì)等有機(jī)物CO2NH3NH3糖類等有機(jī)物N2有機(jī)物CO2N2光能第六頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)乳酸菌——添加維生素培養(yǎng)霉菌——PH調(diào)至酸性培養(yǎng)細(xì)菌——PH調(diào)至中性或微堿性培養(yǎng)厭氧微生物——無氧環(huán)境【特殊要求】第七頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)化學(xué)成分天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明 確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基

培養(yǎng)基成分明確(用化學(xué)成分己知的化學(xué)物質(zhì)配成)分類、鑒定2．培養(yǎng)基的種類液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)、增菌觀察微生物的運(yùn)動、 分類、鑒定微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種第八頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途用途培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物，如可用伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤)選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基第九頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基應(yīng)用加入青霉素加入高濃度食鹽不加氮源不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基拓展提升幾種常見的選擇培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌分離金黃色葡萄球菌分離固氮菌分離自養(yǎng)型微生物第十頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二【回扣教材】考點(diǎn)一培養(yǎng)基1．培養(yǎng)基的定義：人們按照微生物對

的不同需求，配制出供其

的營養(yǎng)物質(zhì)。營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖2．類型：培養(yǎng)基按照

可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑

后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基，是實(shí)驗(yàn)室最常用的培養(yǎng)基之一。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成

的_。物理性質(zhì)瓊脂肉眼可見菌落第十一頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二3．營養(yǎng)物質(zhì)：各種培養(yǎng)基一般都含有水、____源、____源和無機(jī)鹽四種營養(yǎng)物質(zhì)。滿足微生物生長還需要適宜的____(培養(yǎng)霉菌時(shí)需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需將pH調(diào)至

或

性)、氧氣的要求(根據(jù)微生物的需求提供有氧或無氧環(huán)境)、

物質(zhì)(如培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加

等)。碳氮中性微堿特殊營養(yǎng)維生素pH第十二頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二【典例精析】【例1】大腸桿菌能夠在哪種培養(yǎng)基上生長繁殖()A．無氮培養(yǎng)基B．分解尿素的細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基C．纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基D．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基【解析】大腸桿菌為異養(yǎng)微生物，以糖類、蛋白質(zhì)等有機(jī)物作為碳源，以蛋白質(zhì)等作為氮源。D第十三頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二1、無菌技術(shù)的概念

無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法?？键c(diǎn)二無菌技術(shù)2、無菌技術(shù)的主要內(nèi)容實(shí)驗(yàn)操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過程(酒精燈旁操作)第十四頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二項(xiàng)目消毒滅菌條件使用較為溫和的理化方法使用強(qiáng)烈的理化因素結(jié)果殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子適用范圍實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手微生物的培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等常用方法煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌2．消毒與滅菌的比較第十五頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用70%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒消毒的方法拓展提升第十六頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.滅菌的方法拓展提升第十七頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二(1)高溫加熱滅菌原理：使細(xì)菌體內(nèi)蛋白質(zhì)變性，從而達(dá)到殺滅細(xì)菌的目的。

(2)化學(xué)藥劑消毒原理：使細(xì)菌體內(nèi)蛋白質(zhì)變性，但是化學(xué)物質(zhì)很難透過孢子或芽孢的堅(jiān)硬外層進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此化學(xué)方法難以消滅孢子和芽孢。

(3)體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇?xì)⒕Ч詈玫脑颍簼舛冗^低，殺菌力弱；濃度過高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固形成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能滲入其內(nèi)，影響殺菌效果。對剛洗刷后未干的器皿，可選擇75%的酒精進(jìn)行消毒。拓展提升第十八頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基培養(yǎng)皿空氣接種環(huán)雙手牛奶②巴氏消毒③化學(xué)消毒⑤紫外線消毒⑥高壓蒸氣滅菌①灼燒滅菌④干熱滅菌常用的消毒方法和滅菌方法對點(diǎn)訓(xùn)練第十九頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二考點(diǎn)二無菌技術(shù)【回扣教材】獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來________的入侵，要注意以下幾個(gè)方面：(1)對實(shí)驗(yàn)操作的_______、操作者的______和______進(jìn)行_______和________。(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行________。(3)為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，____________應(yīng)在酒精燈____________進(jìn)行。(4)實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免___________處理的材料用具與_________的物品相接觸。雜菌空間衣著手清潔消毒滅菌實(shí)驗(yàn)操作火焰附近已經(jīng)滅菌周圍第二十頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二【典例精析】【例2】關(guān)于滅菌和消毒的下列說法不正確的是()A．滅菌是指殺死環(huán)境中的所有微生物，包括芽孢和孢子B．滅菌和消毒實(shí)質(zhì)上是相同的C．接種環(huán)用灼燒法滅菌D．常用的滅菌方法有加熱法、過濾法、紫外線法、化學(xué)藥品法B第二十一頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序1、器具的滅菌2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存考點(diǎn)三純化大腸桿菌和菌種的保藏第二十二頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二1、培養(yǎng)基的配制流程(以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基為例)①計(jì)算：根據(jù)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方的比例，計(jì)算配制100mL的培養(yǎng)基時(shí)，各種成分的用量。②稱量：準(zhǔn)確地稱取各種成分。一、大腸桿菌的純化培養(yǎng)包括培養(yǎng)基的配制和純化大腸桿菌兩個(gè)階段。第二十三頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二③溶化：先將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯，加入少量的水加熱。當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。然后往燒杯中加入蛋白胨和氯化鈉，最后加入瓊脂，加熱使其熔化。在此過程中不斷用玻璃棒攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。當(dāng)瓊脂完全熔化后，補(bǔ)加蒸餾水至100mL。第二十四頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二④滅菌：將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中加棉塞包好，放入高壓滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃條件下，滅菌15～30min將培養(yǎng)皿包好后放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃下滅菌2h。⑤倒平板：等培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板。第二十五頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二倒平板技術(shù)第二十六頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二問題1：培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。問題2：為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。問題探討第二十七頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二問題3：平板冷凝后，為什么要將平板倒置？問題4：在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。問題探討第二十八頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二2、純化大腸桿菌（1）接種：①平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落。（包括大腸桿菌的接種和培養(yǎng)過程）第二十九頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二第三十頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二第三十一頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二第三十二頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二第三十三頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二第三十四頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二第三十五頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二第三十六頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二第三十七頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二問題1：為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。問題探討第三十八頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二問題2：在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。問題3：在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。問題探討第三十九頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。第四十頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二第四十一頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二第四十二頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二問題：涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？答：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。問題探討第四十三頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二(2)培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基(對照組)都放入37℃恒溫箱中，培養(yǎng)12h和24h后，分別觀察并記錄結(jié)果。第四十四頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二大腸桿菌純化培養(yǎng)的課題成果評價(jià)

（一）培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（二）接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。（三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。第四十五頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二二、菌種的保存1、臨時(shí)保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。2、長期保存：甘油冷凍管藏法第四十六頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二考點(diǎn)三純化大腸桿菌以及菌種的保藏【回扣教材】1．制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基(1)方法步驟：_______、稱量、溶化、__________、_________。(2)倒平板操作的步驟：計(jì)算滅菌倒平板第四十七頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在_________的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶，將_______迅速通過火焰。③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10～20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等待平板___________，大約需5～10min。然后，將平板倒過來放置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上?；鹧媾云靠诶鋮s凝固第四十八頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二2．純化大腸桿菌(1)微生物接種的方法最常用的是___________法和_______________法。(2)平板劃線法是通過________在瓊脂固體培養(yǎng)基表面__________的操作。(3)稀釋涂布平板法是將_______進(jìn)行一系列的______稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到_______培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為_______________和______________兩步。(4)用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物_______成單個(gè)_______，從而能在培養(yǎng)基_______形成單個(gè)的________。平板劃線稀釋涂布平板接種環(huán)連續(xù)劃線菌液梯度瓊脂固體系列稀釋操作涂布平板操作分散細(xì)胞表面菌落第四十九頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二

(5)平板劃線法操作步驟：①將接種環(huán)放在火焰上_______，直到接種環(huán)_______。②在火焰旁________接種環(huán)，并打開盛有菌液的試管的棉塞。③將_________通過火焰。④將_________的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。⑤將_________通過火焰，并塞上棉塞。灼燒燒紅冷卻試管口已冷卻試管口第五十頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二⑥左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條__________，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠芲_________。⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的________開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意________將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。⑧將平板________放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。平行線培養(yǎng)基末端不要倒置第五十一頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二

(6)涂布平板操作的步驟：①將_______浸在盛有酒精的燒杯中。②取_______菌液(不超過0.1mL)，滴加到培養(yǎng)基表面。③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上________，待酒精_______后，________8～10s。④用涂布器將菌液________地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布器少量引燃燃盡冷卻均勻第五十二頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二3．菌種的保存(1)對于頻繁使用的菌種，可以采用______保藏的方法。①臨時(shí)保藏方法將菌種接種到試管的固體___________上，在_______的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長成后，將試管放入______的冰箱中保藏。以后每________個(gè)月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上________到新鮮的培養(yǎng)基上。②缺點(diǎn)：這種方法保存的時(shí)間不長，菌種容易_______或產(chǎn)生________。

臨時(shí)斜面培養(yǎng)基合適4℃3～6轉(zhuǎn)移被污染變異第五十三頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二(2)對于需要_______保存的菌種，可以采用________管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后_______。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在_________的冷凍箱中保存。長期甘油滅菌－20℃第五十四頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二第五十五頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二

(1)實(shí)驗(yàn)過程中對培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手所采用的滅菌、消毒方法依次是__________________、________________、______________。(2)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是______________________________________________________________________________________________。(3)圖示是利用________法進(jìn)行微生物接種，把聚集的菌種逐步_________分散到培養(yǎng)基的表面。在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線的原因是____________________________。高壓蒸汽滅菌干熱滅菌化學(xué)消毒將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生平板劃線稀釋以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種第五十六頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二

(4)關(guān)于圖示的操作方法和結(jié)果，敘述正確的是____。A．操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌B．劃線操作須在火焰上進(jìn)行C．在5區(qū)域中才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌(5)若要培養(yǎng)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌，制備選擇培養(yǎng)基時(shí)在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，注意__________________________和_________，其目的是__________________________?！窘馕觥勘绢}考查了微生物培養(yǎng)等知識，滅菌、接種等操作方法。D添加高濃度蔗糖(葡萄糖)調(diào)低pH提供高糖和酸性的篩選環(huán)境第五十七頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二【例4】關(guān)于大腸桿菌的敘述，正確的是()A．四環(huán)素能抑制細(xì)胞中蛋白質(zhì)的合成B．經(jīng)誘變育種可獲得人胰島素高產(chǎn)菌株C．細(xì)胞中只含有A、T、C、G四種堿基D．T2噬菌體感染菌體，不會導(dǎo)致菌體裂解【解析】四環(huán)素通過抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成從而抑制細(xì)菌繁殖，A正確；要想獲得能產(chǎn)生人胰島素的高產(chǎn)菌株，只有通過基因工程來實(shí)現(xiàn)，B不正確；大腸桿菌細(xì)胞中含有DNA和RNA兩種核酸，含有A、G、C、T、U五種堿基，C不正確；T2噬菌體感染菌體后，在菌體內(nèi)大量增殖，則會使菌體裂解，子代噬菌體釋放出來，D不正確。A第五十八頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二

1、自然界篩選：PCR技術(shù)啟示：尋找目的菌種時(shí)要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。原因：因?yàn)闊崛獪囟?0～800C，淘汰了絕大多數(shù)微生物只有Taq細(xì)菌被篩選出來。DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種在體外將少量DNA大量復(fù)制(PCR)的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。一、篩選菌株考點(diǎn)四篩選菌株、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目、設(shè)置對照第五十九頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二要分離一種微生物，必須根據(jù)該微生物的特點(diǎn)，制作選擇培養(yǎng)基；2、實(shí)驗(yàn)室中篩選：人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長。實(shí)例：此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。第六十頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二1、顯微鏡直接計(jì)數(shù)：利用血球計(jì)數(shù)板(血細(xì)胞計(jì)數(shù)板），在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。二、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運(yùn)動細(xì)菌的計(jì)數(shù)；需要相對高的細(xì)菌濃度；個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；缺點(diǎn)：第六十一頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二2.間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）⑴原理：在稀釋度足夠高時(shí)，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個(gè)菌落是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成的，即一個(gè)菌落代表原先的一個(gè)單細(xì)胞。⑵常用方法：稀釋涂布平板法。每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。第六十二頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106

的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每克樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1ml）()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B對點(diǎn)訓(xùn)練第六十三頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30——300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。②為使結(jié)果接近真實(shí)值可將同一稀釋度加到三個(gè)或三個(gè)以上的平板中，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù)。③統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。(3)注意事項(xiàng)第六十四頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二說明設(shè)置重復(fù)組的重要性。在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否一致，結(jié)果不一致，意味著操作有誤，需要重新實(shí)驗(yàn)。三、設(shè)置對照第六十五頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用：完全培養(yǎng)基（營養(yǎng)成分齊全）接種后培養(yǎng)觀察菌落數(shù)目。主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。設(shè)置對照的作用：第六十六頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二實(shí)例：在做分解尿素的細(xì)菌的篩選與統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對應(yīng)的106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個(gè)菌落，但是其他同學(xué)在同樣的稀釋度下只選擇出大約50個(gè)菌落。分析其原因。原因：⑴土樣不同⑵培養(yǎng)基污染或操作失誤(或者是混入了其他的含氮物質(zhì))如何設(shè)置對照：第六十七頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二小結(jié)：通過這個(gè)事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少的。方案一：由其他同學(xué)用與A同學(xué)相同土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)方案二：將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結(jié)果預(yù)測：如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A無誤；如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。第六十八頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二考點(diǎn)四篩選菌株、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目、設(shè)置對照【回扣教材】1．篩選菌株(1)自然界篩選：實(shí)例：DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)要求使用____________________________酶?？茖W(xué)家從水生耐熱細(xì)菌Taq中分離到耐高溫的TaqDNA聚合酶。耐高溫的DNA聚合第六十九頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二方法：根據(jù)目的菌對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。(2)實(shí)驗(yàn)室中篩選：人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括_______、_______、______等)，同時(shí)_______或_______其他微生物生長。(3)選擇培養(yǎng)基在微生物學(xué)中，將允許_______種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止_________微生物生長的培養(yǎng)基，稱作_________培養(yǎng)基。營養(yǎng)溫度pH抑制阻止特定其他種類選擇第七十頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目測定微生物數(shù)量的常用方法有________________法和____________________法。3．設(shè)置對照(1)設(shè)置對照的主要目的是排除__________中_______________對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。(2)判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：___________________________________________。(3)判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用：____________________________________________。稀釋涂布平板顯微鏡直接計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)組非測試因素將未接種的培養(yǎng)基在相同的條件下進(jìn)行培養(yǎng)對照培養(yǎng)基(營養(yǎng)物質(zhì)齊全)接種后培養(yǎng)觀察菌落數(shù)目第七十一頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二【典例精析】【例5】自然界中的微生物往往是混雜生長的。人們在研究微生物時(shí)一般要將它們分離提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測定。下面是對大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測定的實(shí)驗(yàn)，請回答有關(guān)問題。實(shí)驗(yàn)步驟：(1)制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液。(2)為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，你選用______________法接種樣品。(3)適宜溫度下培養(yǎng)。稀釋涂布平板第七十二頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二結(jié)果分析：(1)測定大腸桿菌數(shù)時(shí)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是______，其理由是______________________________________________________________________________________________________________________________________________。A．一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B．兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是220和260，取平均值240C．三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、50和520，取平均值260D．四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、300、240和250，取平均值250D在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少三個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性；在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否合理第七十三頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二

(2)一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為105的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為234，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是___________(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL)。(3)用這種方法測定的大腸桿菌密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測得的數(shù)量______，因?yàn)開_____________________________________________________________________________________________?！窘馕觥?2)每毫升樣品中的菌落數(shù)＝234×105÷0.1＝2.34×108。2.34×108多當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落第七十四頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二1、尿素的利用尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細(xì)菌能利用尿素的原因土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕窩O(NH2)2脲酶+H2O+CO22NH3考點(diǎn)五土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)一、課題基礎(chǔ)第七十五頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二3、常見的分解尿素的微生物芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌，某些真菌和放線菌也能分解尿素。4、課題目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌②統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌第七十六頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO45、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)所需培養(yǎng)基：①從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？固體培養(yǎng)基②在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖氮源：尿素第七十七頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

是分離尿素細(xì)菌判斷該培養(yǎng)基有無選擇性實(shí)驗(yàn)組對照組培養(yǎng)基類型是否接種

目的

結(jié)果只生長尿素細(xì)菌生長多種微生物是第七十八頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二從肥沃、酸堿度接近中性的濕潤土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中?！拔⑸锏奶烊慌囵B(yǎng)基”[一]土壤取樣數(shù)量最大、種類最多大約70%—90%是細(xì)菌◆取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)第七十九頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二[二]制備培養(yǎng)基

由于初次實(shí)驗(yàn)，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個(gè)較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為103～107。

準(zhǔn)備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基。每個(gè)稀釋度下需要3個(gè)選擇培養(yǎng)基，1個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。還需要8個(gè)滅菌試管和1個(gè)滅菌移液管。

將稀釋相同倍數(shù)的菌液，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。第八十頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二◆應(yīng)在火焰旁稱取土壤10g?！粼谙♂屚寥廊芤旱倪^程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行◆分離不同的微生物采用不同的稀釋度原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計(jì)數(shù)的平板（三） 樣品的稀釋第八十一頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二問題：為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？原因：土壤中各類微生物的數(shù)量（單位：株/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細(xì)菌數(shù)約為2185萬，放線菌數(shù)約為477萬，霉菌數(shù)約為23.1萬。結(jié)論：為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。第八十二頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二㈣.取樣涂布◆實(shí)驗(yàn)時(shí)要對培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物等?！羧绻玫搅?個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗(yàn)不精確，需要重新實(shí)驗(yàn)。第八十三頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二㈤.微生物的培養(yǎng)與觀察在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細(xì)菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d霉菌：25～28℃的溫度下培養(yǎng)3～4d。第八十四頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二微生物的培養(yǎng)與觀察第八十五頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二[一]無菌操作1、取土用的小鐵鏟的盛土樣的信封在使用前都需要滅菌。2、應(yīng)在火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。3、在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作。[二]做好標(biāo)記注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板培養(yǎng)樣品的稀釋度等。[三]規(guī)劃時(shí)間二、操作提示第八十六頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二四.結(jié)果分析與評價(jià)1.通過對照實(shí)驗(yàn)，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數(shù)偏高；若培養(yǎng)物混入其他氮源，則菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高，難以選擇出分解尿素的微生物。2.提示：選擇每個(gè)平板上長有30—300個(gè)菌落的稀釋倍計(jì)算每克樣品的菌數(shù)最合適。同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)不能相差懸殊，如相差較大，表示實(shí)驗(yàn)不精確。第八十七頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二1.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說明該細(xì)菌能夠分解尿素。2.測定飲水中大腸桿菌數(shù)量的方法是將一定體積的水用細(xì)菌過濾器過濾后，將濾膜放到伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色，通過記算得出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。五.課外延伸第八十八頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二第八十九頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二大腸桿菌呈深紫色,中心有或無金屬光澤大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)上典型特征

第九十頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二考點(diǎn)五土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)【回扣教材】1．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包括________，所需_______、_______、_____________，具體的實(shí)施步驟以及時(shí)間安排等的綜合考慮和安排。實(shí)驗(yàn)方案儀器材料用具和藥品第九十一頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二2．操作提示(1)無菌操作①取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在________都需要滅菌。②應(yīng)在________稱取土壤。在_______附近將稱好的土樣______錐形瓶中，塞好棉塞。③在______土壤溶液的過程中，每一步都要在________操作。(2)做好標(biāo)記本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管比較多。為避免混淆，最好在________就做好________。例如，在標(biāo)記培養(yǎng)皿時(shí)應(yīng)注明____________、_________以及平板上培養(yǎng)樣品的________等。使用前火焰旁火焰倒入稀釋火焰旁使用前標(biāo)記培養(yǎng)基種類培養(yǎng)日期稀釋度第九十二頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二3．課題延伸本課題對能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行了初步的篩選。對分離純化的菌種作進(jìn)一步的鑒定，還需要借助_________的方法。在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的_______將尿素分解成了______，pH______，以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基加入____________，如果pH升高，____________，可以初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。生物化學(xué)脲酶氨升高酚紅指示劑指示劑變紅第九十三頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二【典例精析】

【例6】尿素是一種高濃度氮肥且長期施用沒有不良影響，但尿素只有通過土壤中某些細(xì)菌分解為氨后，才能被植物吸收利用。分解尿素的細(xì)菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解。某同學(xué)要分離土壤中能分解尿素的細(xì)菌，并統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中活菌數(shù)目，培養(yǎng)基配方如下：第九十四頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二第九十五頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二(1)根據(jù)培養(yǎng)基的成分判斷，該同學(xué)能否分離出土壤中分解尿素的細(xì)菌？______(能/不能)，原因是_______________________________________________________________。(2)要統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中活菌數(shù)目，宜采用______________法接種，根據(jù)土壤樣品的稀釋倍數(shù)和接種稀釋液的體積，統(tǒng)計(jì)平板上的_________就能大約推測出樣品中活菌數(shù)?！窘馕觥勘绢}考查微生物的選擇性培養(yǎng)，以及微生物計(jì)數(shù)。不能培養(yǎng)基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能選擇出只以尿素為氮源的微生物稀釋涂布平板菌落數(shù)目第九十六頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二1.纖維素

纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類物質(zhì)?？键c(diǎn)六分解纖維素的微生物的分離一、基礎(chǔ)知識第九十七頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二

土壤中某些微生物能夠產(chǎn)生纖維素酶,把纖維素分解為葡萄糖，后再利用。第九十八頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二2.纖維素酶

纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶(外切酶)、CX酶(內(nèi)切酶)和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纖維素第九十九頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二

在2支20mL的試管中，分別放入1×6cm的濾紙條，再分別加入pH為4.8、物質(zhì)的量濃度為0.1mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液10mL、11mL。在加入10mL緩沖液的試管中加入1mL纖維素酶（70~80U/mL）。將二支試管固定在50mL的錐形瓶中，在搖床上以140r/min的轉(zhuǎn)速振蕩反應(yīng)1h，觀察結(jié)果。1U表示1個(gè)酶活力單位，是指在溫度為25℃，其他反應(yīng)條件，如pH等，均為最適的情況下，在1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1mmol的底物所需的酶量。小實(shí)驗(yàn)：體驗(yàn)纖維素酶的作用第一百頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二在一支試管中添加纖維素酶，另一支試管不添加纖維素酶；實(shí)驗(yàn)分析：P27的小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對照的？濾紙崩潰法第一百零一頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二3.纖維素分解菌的篩選①篩選纖維素分解菌的方法______________。該方法可以通過________反應(yīng)直接篩選。剛果紅染色法顏色其原理是：剛果紅可以與纖維素形成____________，當(dāng)纖維素被_________分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以_____________為中心的________，可以通過___________________________來篩選纖維素分解菌。紅色復(fù)合物纖維素酶纖維素分解菌透明圈是否產(chǎn)生透明圈第一百零二頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二可根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌第一百零三頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別培養(yǎng)基挑選菌落什么樣的環(huán)境取樣?①培養(yǎng)的目的?②選擇培養(yǎng)基的特點(diǎn)?挑選什么樣的菌落?①鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)?②如何鑒別?根據(jù)：微生物對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)環(huán)境中去找；目的：增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物；剛果紅染色法第一百零四頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二1、纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于______（固體、液體）培養(yǎng)基，原因是_____

【資料二】選擇培養(yǎng)閱讀資料二“選擇培養(yǎng)基”，回答以下幾問題：液體沒有添加瓊脂2、該培養(yǎng)基對微生物_____（具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機(jī)制是____________________________________________________________________________

具有以纖維素粉為唯一碳源，能分解纖維素的微生物可以大量繁殖；第一百零五頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二若設(shè)置一個(gè)對照實(shí)驗(yàn)說明選擇培養(yǎng)的作用，應(yīng)控制的變量是將__________改為_________。3、你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基的作用？葡萄糖纖維素粉第一百零六頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二【資料三】剛果紅染色法方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)方法二：在倒平板時(shí)就加入剛果紅第一百零七頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基組成提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)CMC-Na5~10g碳源酵母膏1g碳源、氮源、生長因子KH2PO40.25g無機(jī)鹽土豆汁100mL碳源、生長因子瓊脂15g凝固劑上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水定容至1000mL氫元素、氧元素鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基(水溶性羧甲基纖維素鈉)第一百零八頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二染色法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)方法一

方法二

顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用操作繁瑣，剛果紅會使菌落之間發(fā)生混雜操作簡便，不存在菌落混雜問題

產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈。思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足第一百零九頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二挑選產(chǎn)生透明圈的菌落

挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在300C－370C培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)。第一百一十頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二

培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落？

對照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長則說明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。

三、結(jié)果分析與評價(jià)第一百一十一頁，共一百二十頁，編輯于2023年，星期二

為了確定分離得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行_____________實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有______發(fā)酵和______發(fā)酵