細胞因子與粘附因子檢測

細胞因子與粘附因子檢測第一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一復(fù)習(xí)1.T細胞增殖試驗的原理、刺激物？2.T細胞增殖試驗的主要方法？3.T細胞介導(dǎo)的細胞毒試驗主要方法？第二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一掌握：細胞因子、粘附分子概念；臨床常用的測定方法熟悉：細胞因子的特性與功能；了解：其他第三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一第一節(jié)概述第二節(jié)臨床常用的測定方法第三節(jié)細胞因子與黏附分子測定的臨床應(yīng)用第四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一第一節(jié)

概述細胞因子(cytokine)

是由免疫細胞及組織細胞表達并分泌，通過結(jié)合細胞表面的相應(yīng)受體，在細胞間發(fā)揮相互調(diào)控作用的一類小分子蛋白質(zhì)或多肽。掌握第五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一1.細胞因子的種類

白細胞介素（IL）干擾素（IFN）集落刺激因子（CSF）腫瘤壞死因子（TNF）生長因子（GF）趨化因子一、細胞因子及其受體的特性與功能熟悉第六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一自分泌內(nèi)分泌血液循環(huán)遠距離作用旁分泌作用于比鄰細胞細胞因子發(fā)揮作用的三種方式作用于分泌細胞自身2.細胞因子的共同特性與生物學(xué)功能熟悉第七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一高效性、多效性、重疊性、網(wǎng)絡(luò)性、協(xié)同性、拮抗性迅速高效性非特異性

2.細胞因子的共同特性熟悉第八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一肥大細胞胸腺細胞BIL-4活化、增殖、分化增殖

增殖

多效性第九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一IL-2、IL-4、IL-5IL-4+IL-5IL-4IFN-拮抗性重疊性協(xié)同性均有刺激B細胞增殖的功能更有效地誘導(dǎo)IgE類別轉(zhuǎn)換IL-4阻斷IFN-誘導(dǎo)類別轉(zhuǎn)化的作用BBB第十頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一2.細胞因子的生物學(xué)功能參與調(diào)控免疫細胞的發(fā)育、分化和功能參與調(diào)控免疫應(yīng)答抗感染抗腫瘤誘導(dǎo)細胞凋亡了解第十一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一3、細胞因子受體的共同特性細胞因子發(fā)揮作用：

細胞因子與靶細胞表面特異性受體結(jié)合細胞因子受體結(jié)構(gòu)：胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)組成細胞因子家族：Ⅰ型細胞因子受體家族、Ⅱ型細胞因子受體家族、腫瘤壞死因子受體超家族、免疫球蛋白受體超家族、趨化因子受體家族。了解第十二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一第十三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一二、

黏附分子的特性與功能黏附分子（AM）是介導(dǎo)細胞間或細胞與細胞外基質(zhì)間相互結(jié)合的分子。掌握第十四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一1.黏附分子的特性

黏附分子均為跨膜糖蛋白，由胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)三部分組成，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點可分為免疫球蛋白超家族、整合素家族、選擇素家族和鈣黏蛋白家族。了解第十五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一2.黏附分子的主要生物學(xué)功能參與細胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與活化、細胞分化及發(fā)育參與免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)、淋巴細胞歸巢、傷口愈合與血栓形成、調(diào)節(jié)細胞凋亡等功能了解第十六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一B細胞與Th細胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的細胞粘附分子第十七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)臨床常用的測定方法一、酶聯(lián)免疫吸附試驗方法二、化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗三、流式細胞分析法四、酶聯(lián)免疫斑點試驗五、免疫學(xué)測定方法學(xué)評價第十八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一

基因水平：PCR技術(shù)。檢測水平生物活性測定

蛋白水平

免疫學(xué)測定

第二節(jié)臨床常用的測定方法掌握第十九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一

生物活性測定：測活性。靈敏性高,特異性低蛋白水平ELISA

免疫學(xué)測定化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗

（含量）流式細胞術(shù)酶聯(lián)免疫斑點試驗

第二節(jié)臨床常用的測定方法掌握第二十頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一一、酶聯(lián)免疫吸附試驗（一）基本方法1.直接法---雙抗體夾心法

（測CK最常用方法）2.間接法3.抗原競爭法熟悉第二十一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一敏感性偏低不能區(qū)分細胞因子的生物學(xué)活性（二）方法學(xué)評價特異、簡便成本低、易于推廣和標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點可同時檢測大量標(biāo)本且試驗廢棄物便于處理細胞因子測定的首選方法缺點優(yōu)點了解第二十二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一二、化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗是以發(fā)光劑作為酶免疫測定的底物，通過發(fā)光反應(yīng)增強測定的靈敏度。（一）基本方法雙抗體夾心法（二）方法學(xué)評價特異性好、靈敏度高、線性范圍寬、試劑穩(wěn)定、可自動化檢測了解第二十三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一三、流式細胞術(shù)（flowcytometry,FCM)分離和培養(yǎng)待檢細胞細胞破膜與固定封閉非特異性結(jié)合位點染色與分析基本方法了解第二十四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一方法學(xué)評價優(yōu)點：特異、高效、靈敏.應(yīng)用:對單個細胞水平CK或AM檢測；檢測細胞內(nèi)CK；膜上AM、CK受體同一細胞內(nèi)兩種以上細胞因子表達

熟悉第二十五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一四、酶聯(lián)免疫斑點試驗(ELISPOT)

包被有待測細胞因子抗體的微孔板

分泌相應(yīng)細胞因子的待測細胞

有或無刺激物培養(yǎng)細胞因子被板上的特異性抗體捕獲后續(xù)的反應(yīng)如同ELISA一個斑點代表一個細胞因子分泌細胞，斑點的顏色深淺程度與細胞分泌的細胞因子量相關(guān)

基本原理+了解第二十六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一第二十七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一方法學(xué)評價比常規(guī)ELISA法的靈敏度提高200倍應(yīng)用：檢測分泌特定細胞因子的細胞熟悉第二十八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一五、免疫學(xué)測定方法學(xué)評價優(yōu)點：

特異性高操作簡便、快速，無需依賴細胞株影響因素較少且易控制，重復(fù)性好，方法容易標(biāo)準(zhǔn)化。缺點：

所測定含量，與其生物活性不一定呈正比結(jié)果與所用的抗體來源及親和力有很大的關(guān)系

敏感性相對較低標(biāo)本中可溶性受體，會影響特異性抗體對細胞因子結(jié)合熟悉第二十九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一第三節(jié)細胞因子與黏附分子測定的臨床應(yīng)用1.特定疾病的輔助診斷2.機體免疫狀態(tài)的評估3.臨床疾病治療效果的監(jiān)測和指導(dǎo)用藥4.疾病預(yù)防的應(yīng)用熟悉第三十頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一一、臨床應(yīng)用原則方法選擇和結(jié)果判斷作出綜合考慮:

異質(zhì)性

功能交叉性和多樣性

來源的復(fù)雜性

組織細胞的非特異性細胞因子和粘附分子第三十一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一

全身免疫或炎癥狀態(tài)——血漿、血清炎癥局部細胞因子的水平——局部分泌液細胞分泌細胞因子的特性——外周單個核細胞細胞表面細胞因子受體或黏附分子定位檢測疾病療效觀察和預(yù)后判斷1.標(biāo)本的適當(dāng)選取第三十二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一敏感性高-------特異性低，廢棄物難處理活性測定-------不能精確蛋白定量基因分析-------操作繁瑣，有助于疾病分析多種方法—綜合分析—正確評價

2.方法的聯(lián)合應(yīng)用第三十三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一意義：細胞因子具有網(wǎng)絡(luò)狀調(diào)節(jié)的特點級聯(lián)效應(yīng)或相互抑制作用的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)有助于提供有效的疾病診斷和機體免疫狀態(tài)信息舉例：免疫細胞分泌：IL-1、IL-2、IFN-γ和GM-CSFTh1/Th2細胞平衡狀態(tài)：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ3.細胞因子的聯(lián)合檢測第三十四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一二、特定疾病的輔助診斷（一）細胞因子與疾病1.細胞因子風(fēng)暴—IL-1、IL-2、IL-6、IFN-γ等

引發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征2.變態(tài)反應(yīng)性疾病—哮喘IL-4促進IgE合成3.自身免疫病—類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、MCP-1）第三十五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一（一）細胞因子與疾病4.免疫缺陷病—IL-2Rγ基因缺陷（重癥聯(lián)合免疫缺陷?。籌L-6（漿細胞瘤、膀胱癌）5.器官移植排斥反應(yīng)—TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6、IFN-γ水平升高6.惡性腫瘤—檢測IL-2、IL-6、IFN-γ水平用于療效的評估第三十六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一（二）黏附分子與疾病1.動脈粥樣硬化——ICAM、P-選擇素2.腎臟疾病——ICAM3.肝臟疾病---VCAM-1、ICAM-1、IL-14.自身免疫病----SLE（E-選擇素、ICAM-1）類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（E-選擇素）

第三十七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一三、評估機體的免疫狀態(tài)機體免疫應(yīng)答的強弱作為觀察治療效果和判斷預(yù)后的重要指標(biāo)對保證治療效果具有指導(dǎo)意義第三十八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一四、疾病療效檢測及指導(dǎo)用藥根據(jù)患者相關(guān)細胞因子水平或免疫狀態(tài)的檢測結(jié)果選擇細胞因子的種類和劑量。細胞因子水平過表達/可溶性黏附分子增高使用相應(yīng)的細胞因子拮抗劑或抗體第三十九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一1．細胞因子和細胞粘附分子的概念？細胞因子可分為幾類？2．臨床檢測中常用細胞因子與細胞黏附分子的免疫學(xué)檢測方法有哪些？3．細胞因子及黏附分子檢測的臨床意義是什么？思考題第四十頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一1.細胞外可溶性黏附分子主要測定法是()

A.ELISAB.酶免疫組化法

C.熒光免疫法D.流式細胞儀測定法

E.時間分辨熒光免疫法2.下列對FCM檢測細胞因子的描述中錯誤的是()A.靈敏度高B.可測細胞內(nèi)細胞因子

C.特異性高D.單細胞水平分析

E.mRNA表達水平3．用ELISA方法測定細胞因子，錯誤的是()

A.特異性高B.可測活性

C.操作簡便D.可定量分析E.時間短4.在檢測可溶性黏附分子中，ELISA常用()

A.直接法B.間接法C.夾心法D.競爭法E.組化法AEBC第四十一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一5.不屬于細胞因子特點的是()

A.分泌型蛋白質(zhì)B.自分泌C.低分子量D.不受MHC限制E.半衰期長6.黏附分子作用是()

A.細胞信號傳導(dǎo)與活化B.細胞的伸展與轉(zhuǎn)移

C.細胞的生長與分化D.創(chuàng)傷的愈合

E.以上都是7.慢性肝炎的急性期和活動期水平顯著升高,而穩(wěn)定期和恢復(fù)期有明顯下降的細胞因子()A.TNF和IL-6B.TNF和IL-10C.TNF和EPOD.GM-CSF和EPOE.GM-CSF和IL-6EEA第四十二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期一8.細胞因子生物學(xué)測定法最重要的優(yōu)點是()A.高特異性B.