級(jí)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)固有細(xì)胞免疫

實(shí)驗(yàn)三非特異性反應(yīng)、細(xì)胞免疫測(cè)定1.吞噬作用 示教 2.溶菌酶實(shí)驗(yàn) 1個(gè)平板/組3.機(jī)體細(xì)胞免疫功能測(cè)定E玫瑰花環(huán)實(shí)驗(yàn) 示教淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) 示教4.免疫細(xì)胞的分離與純化——小鼠脾細(xì)胞或胸腺細(xì)胞的制備1份/組當(dāng)前第1頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)一、非特異性免疫功能的測(cè)定

（一）、天然免疫的組成屏障結(jié)構(gòu)

（1）體表屏障:

物理屏障化學(xué)屏障生物學(xué)屏障（2）體內(nèi)屏障結(jié)構(gòu)全身淋巴結(jié)屏障血-腦屏障

血-胎屏障當(dāng)前第2頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)參與天然免疫的效應(yīng)分子

防御素補(bǔ)體系統(tǒng)細(xì)胞因子溶菌酶其他效應(yīng)分子當(dāng)前第3頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)

參與天然免疫的效應(yīng)細(xì)胞吞噬細(xì)胞NK細(xì)胞T細(xì)胞肥大細(xì)胞NKT細(xì)胞上皮細(xì)胞及其附屬成分當(dāng)前第4頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)1、吞噬細(xì)胞及吞噬作用吞噬作用是指白細(xì)胞游出到炎癥灶，吞噬病原體以及組織碎片的過(guò)程。完成此功能的吞噬細(xì)胞主要有兩種，其吞噬異物的過(guò)程基本相同，但其結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分則有所不同。

中性粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞當(dāng)前第5頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)

中性粒細(xì)胞單核-吞噬細(xì)胞名稱(chēng)小吞噬細(xì)胞大吞噬細(xì)胞部位外周血中外周血:單核不同組織中:吞噬細(xì)胞大小直徑10～12μm直徑為14～17μm胞核呈桿狀或分葉狀,常為2-5葉腎形或彎曲折疊的不規(guī)則形核質(zhì)核染色質(zhì)呈塊狀,著色深顆粒纖細(xì)而疏松，故著色較淺胞漿富含中性顆粒胞漿較豐富的溶酶體壽命短,更新快長(zhǎng)特點(diǎn)應(yīng)答迅速,在早期起主要作用持續(xù)1-2天,是天然免疫晚期應(yīng)答的主要效應(yīng)細(xì)胞吞噬范圍主要是化膿性細(xì)菌細(xì)菌、病毒、原蟲(chóng)、其他異物當(dāng)前第6頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)吞噬發(fā)生的最初1-2小時(shí)，吞噬細(xì)胞趨化因子聚集于微生物附近粘附于微生物表面吞入胞漿，形成吞噬體一系列反應(yīng)，殺滅微生物吞噬過(guò)程當(dāng)前第7頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)實(shí)驗(yàn)方法：中性粒細(xì)胞的吞噬作用金黃色葡萄球菌1-2ml，注入小白鼠腹腔內(nèi)5小時(shí)后，解剖，腹腔液涂片、染色觀察小吞噬細(xì)胞吞噬金黃色葡萄球菌的現(xiàn)象當(dāng)前第8頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)中性粒細(xì)胞吞噬葡萄球菌當(dāng)前第9頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)實(shí)驗(yàn)方法：巨噬細(xì)胞的吞噬作用10%雞紅細(xì)胞懸液注入小白鼠腹腔內(nèi)分別于1,6,24小時(shí)抽取腹腔液涂片、染色觀察巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的現(xiàn)象當(dāng)前第10頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞當(dāng)前第11頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)3、溶菌酶試驗(yàn)溶菌酶是正常體液與分泌液中所含的一種低分子量的堿性蛋白質(zhì)，主要來(lái)源于巨噬細(xì)胞，是天然免疫中一種重要的體液殺菌成分。肽聚糖是細(xì)菌細(xì)胞壁中的重要成分，溶菌酶能夠水解肽聚糖從而使細(xì)菌溶解。細(xì)革蘭氏陽(yáng)性：溶解菌革蘭氏陰性：肽聚糖外面有一層脂多糖和脂蛋白，一般情況下不受溶菌酶的影響。當(dāng)前第12頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備：（1）帶菌平板的準(zhǔn)備：處理好溶壁微球菌加入瓊脂內(nèi),到平板,冷凝備用。（2）每平板打4個(gè)小孔，如圖。1234當(dāng)前第13頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)

同學(xué)們操作步驟：清水漱口將唾液涂于空平板中用吸管吸出，按下圖滴入孔內(nèi)37℃過(guò)夜明天上午測(cè)量溶菌環(huán)的直徑，記錄分析當(dāng)前第14頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)1234PBS

陰性對(duì)照雞蛋清陽(yáng)性對(duì)照1，4加入唾液標(biāo)本當(dāng)前第15頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)二、E玫瑰花環(huán)形成實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理T細(xì)胞表面標(biāo)志CD2，即綿羊紅細(xì)胞受體綿羊紅細(xì)胞表面CD58可與CD2結(jié)合可用于T細(xì)胞的計(jì)數(shù)與分離當(dāng)前第16頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第17頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第18頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)三、T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)T細(xì)胞受到特異性抗原或非特異性絲裂原刺激時(shí)，可發(fā)生轉(zhuǎn)化。特異性抗原非特異性絲裂原：PHA、ConA等。正常人淋巴細(xì)胞受到PHA刺激后，其轉(zhuǎn)化率為60-80%。當(dāng)前第19頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)轉(zhuǎn)化細(xì)胞形態(tài)特征細(xì)胞體積：增大細(xì)胞核大?。涸龃笕旧|(zhì)：疏松核仁：清晰有絲分裂：+/-細(xì)胞漿著色空泡或偽足當(dāng)前第20頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第21頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)當(dāng)前第22頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)四、小鼠脾細(xì)胞的制備目的要求掌握分離制備小鼠脾細(xì)胞懸液的操作方法。材料動(dòng)物：小鼠RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液Tris-NH4Cl紅細(xì)胞裂解液75%酒精當(dāng)前第23頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)1.固定小鼠[實(shí)驗(yàn)步驟]當(dāng)前第24頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)2.暴露眼球[實(shí)驗(yàn)步驟]當(dāng)前第25頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)3.小鑷子夾眼球放血，拉頸椎處死小鼠[實(shí)驗(yàn)步驟]當(dāng)前第26頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)4.剪開(kāi)皮膚，暴露腹腔，找到脾臟[實(shí)驗(yàn)步驟]當(dāng)前第27頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)5.分離，摘除脾臟[實(shí)驗(yàn)步驟]當(dāng)前第28頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)6-1.沖洗脾臟[實(shí)驗(yàn)步驟]當(dāng)前第29頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)6-2.沖洗脾臟[實(shí)驗(yàn)步驟]當(dāng)前第30頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)7-1.用注射器芯研磨脾臟，獲得細(xì)胞懸液[實(shí)驗(yàn)步驟]當(dāng)前第31頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)7-2.用注射器芯研磨脾臟，獲得細(xì)胞懸液[實(shí)驗(yàn)步驟]當(dāng)前第32頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)

8.

低速離心（2000轉(zhuǎn)/分鐘，10min）[實(shí)驗(yàn)步驟]當(dāng)前第33頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)9-1.離心后棄上清，留沉淀的細(xì)胞[實(shí)驗(yàn)步驟]當(dāng)前第34頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)9-2.離心后棄上清，留沉淀的細(xì)胞[實(shí)驗(yàn)步驟]當(dāng)前第35頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\11點(diǎn)9-3.離心后棄上清，留沉淀的細(xì)胞[實(shí)驗(yàn)步驟]當(dāng)前第36頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五