牛腸激酶基因工程菌的構(gòu)建、高密度發(fā)酵、純化及活性鑒定_第1頁
牛腸激酶基因工程菌的構(gòu)建、高密度發(fā)酵、純化及活性鑒定_第2頁
牛腸激酶基因工程菌的構(gòu)建、高密度發(fā)酵、純化及活性鑒定_第3頁
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第頁共頁牛腸激酶基因工程菌的構(gòu)建、高密度發(fā)酵、純化及活性鑒定牛腸激酶基因工程菌的構(gòu)建、高密度發(fā)酵、純化及活性鑒定腸激酶(enterokinase,EK)是一種專一識(shí)別DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽鍵的絲氨酸蛋白水解酶.根據(jù)GenBank序列進(jìn)展人工合成牛腸激酶輕鏈基因cDNA,測(cè)序正確后將其插入甲醇酵母分泌型載體pPICZαA,得到重組質(zhì)粒pPICZαA/EKL,重組載體經(jīng)線性化后轉(zhuǎn)化PichiapastorisSMD1168H,挑選得到重組牛腸激酶輕鏈工程菌.分別對(duì)重組酵母工程菌進(jìn)展高密度發(fā)酵、rEKL(rebinantenterokinaselightchain,rEKL)純化、N端序列測(cè)定、生物學(xué)活性鑒定等研究工作.結(jié)果說明,發(fā)酵上清中rEKL含量高,純化的rEKL專一性強(qiáng)、無其他雜酶活性、N端15個(gè)氨基酸序列與文獻(xiàn)報(bào)道一致.圖5參17作者：李德華茍興華胡海洋徐琦劉忠榮吳洽慶余曉東LIDehuaGOUXinghuaHUHaiyangXUQiLIUZhongrongWUQiaqingYUXiaodong作者單位：李德華,LIDehua(重慶師范大學(xué)生命科學(xué)院,重慶,400047;成都地奧制藥集團(tuán),成都,610041)茍興華,胡海洋,劉忠榮,GOUXinghua,HUHaiyang,LIUZhongrong(成都地奧制藥集團(tuán),成都,610041)徐琦,XUQi(成都地奧制藥集團(tuán),成都,610041;四川大學(xué)化工學(xué)院,成都,610065)吳洽慶,WUQiaqing(成都地奧制藥集團(tuán),成都,610041;中國科學(xué)院成都生物研究所,成都,610041)余曉東,YUXiaodong(重慶師范大學(xué)生命科學(xué)院,重慶,400047)刊名：應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)ISTICPKU英文刊名：CHINESEJOURNALOFAPPLIED-ENVIRONMENTALBIOLOGY年，卷(期)：202312(6)分類號(hào)：Q78【關(guān)鍵詞】：^p：腸激酶(ent

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