抗原抗體及其結(jié)合反應(yīng)演示文稿

抗原抗體及其結(jié)合反應(yīng)演示文稿當(dāng)前第1頁\共有35頁\編于星期五\9點抗原抗體及其結(jié)合反應(yīng)當(dāng)前第2頁\共有35頁\編于星期五\9點第一節(jié)抗原一、抗原的特性免疫原性、免疫反應(yīng)性特異性二、用于免疫測定的抗原分類天然、合成多肽、基因重組當(dāng)前第3頁\共有35頁\編于星期五\9點第二節(jié)抗體一、抗體的特性特異性、多樣性、免疫原性二、用于免疫測定的抗體分類多克隆、單克隆、基因工程三、抗體產(chǎn)生的規(guī)律初次應(yīng)答、再次應(yīng)答當(dāng)前第4頁\共有35頁\編于星期五\9點第三節(jié)抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的原理抗原抗體反應(yīng):指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)?？乖砦慌c抗體高變區(qū)間的結(jié)構(gòu)互補抗原表位與抗體高變區(qū)的緊密接觸抗原抗體之間的結(jié)合力親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體物質(zhì)基礎(chǔ)當(dāng)前第5頁\共有35頁\編于星期五\9點一、抗原抗體結(jié)合力靜電引力范德華引力氫鍵疏水作用力抗原抗體結(jié)合力示意圖當(dāng)前第6頁\共有35頁\編于星期五\9點１.靜電引力（electrostaticforces）抗原和抗體分子帶有相反電荷的氨基和羧基基團之間相互吸引的力。又稱為庫倫引力當(dāng)前第7頁\共有35頁\編于星期五\9點2.范德華引力（VonderWaalsforces）

抗原和抗體相互接近時，由于分子的極化作用而出現(xiàn)的引力。

范德華引力<靜電引力當(dāng)前第8頁\共有35頁\編于星期五\9點3.氫鍵結(jié)合力供氫體上的氫原子與受氫體原子間的引力供氫體：羧基、氨基和羥基受氫體：羧基氧、羧基碳和肽鍵氫鍵具有高度的方向性當(dāng)前第9頁\共有35頁\編于星期五\9點4.疏水作用力（疏水鍵）

兩個疏水基團在水溶液中相接觸時，由于對水分子排斥而趨向聚集力。當(dāng)前第10頁\共有35頁\編于星期五\9點二、抗原抗體的親和力和親合力抗原抗體親和力示意圖當(dāng)前第11頁\共有35頁\編于星期五\9點抗原抗體親合力示意圖當(dāng)前第12頁\共有35頁\編于星期五\9點三、液相中抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)抗原抗體復(fù)合物

(疏水膠體)可見反應(yīng)電解質(zhì)

抗原

(親水膠體)抗體﹢當(dāng)前第13頁\共有35頁\編于星期五\9點四、固相表面抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)1.抗原抗體結(jié)合反應(yīng)時間2.反應(yīng)體積3.解離速度4.固相化抗原或抗體的構(gòu)象當(dāng)前第14頁\共有35頁\編于星期五\9點第四節(jié)抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點特異性可逆性比例性階段性當(dāng)前第15頁\共有35頁\編于星期五\9點

親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體示意圖親水膠體疏水膠體可見反應(yīng)當(dāng)前第16頁\共有35頁\編于星期五\9點一、特異性抗原抗體反應(yīng)特異性示意圖當(dāng)前第17頁\共有35頁\編于星期五\9點特異性示意圖當(dāng)前第18頁\共有35頁\編于星期五\9點交叉反應(yīng)（crossreactions）抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖當(dāng)前第19頁\共有35頁\編于星期五\9點二、可逆性可逆性：抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性影響因素：抗體對相應(yīng)抗原的親合力環(huán)境因素對復(fù)合物的影響當(dāng)前第20頁\共有35頁\編于星期五\9點

【Ag】+【Ab】【Ag-Ab】

解離后抗原抗體仍保持原有特性。一定條件：低pH、高濃度鹽等。Ab1當(dāng)前第21頁\共有35頁\編于星期五\9點比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系最適比：沉淀物最多時的抗原抗體的濃度比或量比等價帶:

抗原與抗體分子比例合適范圍前帶：

抗體過量后帶：

抗原過量三、比例性當(dāng)前第22頁\共有35頁\編于星期五\9點

抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖當(dāng)前第23頁\共有35頁\編于星期五\9點四、階段性第一階段：特異性結(jié)合階段第二階段：反應(yīng)可見階段當(dāng)前第24頁\共有35頁\編于星期五\9點第五節(jié)影響抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的因素抗原抗體本身因素反應(yīng)基質(zhì)因素實驗環(huán)境因素當(dāng)前第25頁\共有35頁\編于星期五\9點一、抗原抗體本身因素抗原:理化性狀、表位種類和數(shù)目抗體:來源、特異性、親和性、效價當(dāng)前第26頁\共有35頁\編于星期五\9點來源R型Ab：等價帶寬，易出現(xiàn)可見反應(yīng)。H型Ab：等價帶窄，易出現(xiàn)前帶或后帶McAb:不宜用于凝集和沉淀反應(yīng)。濃度：是相對Ag而言，比例要合適，故實驗前

需滴定，以求最適Ag與Ab比例。

特異性與親和力：關(guān)鍵因素，選擇特異性與親和力高的Ab。當(dāng)前第27頁\共有35頁\編于星期五\9點二、反應(yīng)基質(zhì)因素非特異性因素，如蛋白、鹽、藥物等當(dāng)前第28頁\共有35頁\編于星期五\9點三、實驗環(huán)境因素電解質(zhì):0.85%生理鹽水或緩沖液酸堿度:pH6~8溫度:37℃最適當(dāng)前第29頁\共有35頁\編于星期五\9點(一）電解質(zhì)作用：中和膠體表面電荷，破壞水化層，使Ag-Ab聚集。常用：0.85%NaCl溶液，緩沖液、Ca2+、Mg2+等。當(dāng)前第30頁\共有35頁\編于星期五\9點（二）酸堿度

抗原抗體反應(yīng)中一般以pH6-8為宜，有補體參與的反應(yīng)最適pH為7.2-7.4酸凝集：當(dāng)pH為3左右時，接近細菌Ag的等電點，可出現(xiàn)非特異性凝集。當(dāng)前第31頁\共有35頁\編于星期五\9點（三）溫度

最適溫度為37℃或室溫18-25℃為宜。若溫度高于56℃，可導(dǎo)致已結(jié)合了的抗原抗體復(fù)合物解離，甚至分子變性。當(dāng)前第32頁\共有35頁\編于星期五\9點抗原抗體反應(yīng)類型反應(yīng)類型實驗技術(shù)結(jié)果判斷凝集反應(yīng)直接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗同上抗球蛋白試驗同上沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗觀察沉淀，檢測濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補體參與的反應(yīng)補體溶血試驗觀察測定溶血現(xiàn)象補體結(jié)合試驗同上當(dāng)前第33頁\共有35頁\編于星期五\9點反應(yīng)類型實驗技術(shù)結(jié)果判斷中和反應(yīng)病毒中和試驗檢測病毒感染性毒素中和試驗檢測外毒素毒性標(biāo)記免疫反應(yīng)熒光免疫技術(shù)檢測熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測放射性強度酶免疫技術(shù)檢測酶底物顯色