復(fù)試分子生物學(xué)1移動又叫轉(zhuǎn)位因子由于它可以在染色體基因組上甚

一．geneMuD108。斷裂（splitgene：真核細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，其核苷酸序列中含有與氨基酸編碼無關(guān)DNA間隔區(qū)段，從而被分割成不連續(xù)的若干區(qū)域。將這種編碼序列不連續(xù)，有間隔區(qū)段的DNA片斷稱為斷裂。非編碼間隔區(qū)段稱間隔子，有轉(zhuǎn)錄和編碼功能序列稱表達子。 genes：核苷酸彼 假：在珠蛋白簇（genecluster）各片斷核苷酸序列分析時發(fā)現(xiàn)，除了有正常的功BamHBglⅡ。和擴增，可包裝30-45kb外源，可由Ampr抗性篩選，常用于構(gòu)建文庫。COS細(xì)胞：用一個起始部位缺失的SV40突變種猴細(xì)胞，由于DNA不能自COS細(xì)胞。DNA載體相接，而后轉(zhuǎn)入大腸桿菌，建立克隆株，即cDNA文庫（genelibrary。轉(zhuǎn)化：以質(zhì)粒作為克隆載體將目的導(dǎo)入宿主細(xì)胞。轉(zhuǎn)化作用就是一種型細(xì)胞從周圍介質(zhì)中吸收來自另一種型細(xì)胞的DNA，進而使原來細(xì)胞的遺傳和遺傳性發(fā)生（體是細(xì)菌的，因此噬菌體DNA導(dǎo)入大腸桿菌的感受態(tài)細(xì)胞也稱轉(zhuǎn)染。（啟動子：是位于結(jié)構(gòu)上游，轉(zhuǎn)錄起始調(diào)控所必需的一段DNA序列，是RNA聚合酶列。當(dāng)啟動子與全酶結(jié)合后可在+1轉(zhuǎn)錄起始點開始轉(zhuǎn)錄。ATG，酸。在細(xì)菌中也有罕見的起始子GUG，編碼纈氨酸。其起始表達作用AUG＞GUG。mRNA合成的信號。一般為一段發(fā)卡結(jié)構(gòu)的反向重復(fù)序列。粘性末端DNA分子在限制酶切割后產(chǎn)生一條鏈多出幾個堿基的互補對稱的突出末端，若5’突出稱5’粘性末端，他們能夠通過堿基間的配對而重新環(huán)化起來，末端的DNAUAG，UGA，DNA鏈DNA噬菌體M13)、動物。PCR.：聚合酶鏈反應(yīng)，是依據(jù)細(xì)胞內(nèi)DNA半保留的機理，以及體外DNA分子于不同溫度下雙鏈和單鏈可以互相轉(zhuǎn)變的性質(zhì)，在試管中給DNA的體外合成提供一種合適條件：模板DNA，寡鏈核苷酸引物，DNA聚合酶，合適的緩沖液系統(tǒng)和DNA變性、復(fù)性及延伸的溫度與時間等，使加入的4dNTP5’→3’按堿基配對原則,形成與模板DNA互補的半保留鏈。23.GenomicDNA：即組DNA，指組成生物組的所有DNA，包含一個生物體的全部遺DNADNA總和即為一組24、Intron：即間隔子（內(nèi)含子），與原核的蛋白質(zhì)編碼相比真白質(zhì)編碼最主要的特點是其轉(zhuǎn)錄區(qū)的編碼序列是間斷的不連續(xù)的其中非編碼序列叫間隔子。它是轉(zhuǎn)錄物被剪除掉的相應(yīng)DNA分子。25、Exon：即表達子（編碼序列）,與原核的蛋白質(zhì)編碼相比真白質(zhì)編碼最主要的特點是其轉(zhuǎn)錄區(qū)的編碼序列是間斷的不聯(lián)系的其中編碼氨基酸的序列叫表達子。它是轉(zhuǎn)錄物經(jīng)加工后被保留的相應(yīng)的DNA分子。26transformation（trancriptio：過程稱為轉(zhuǎn)錄。包括轉(zhuǎn)錄起始、延伸、終止等過程。轉(zhuǎn)錄是不對稱的，體現(xiàn)為在DNA雙鏈（translatio：上游,含有特有的相似或一致序列,RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄效應(yīng)。按功DNA序列片段。反式作用因子DNA的順式作用元件特定序列結(jié)合，發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的核內(nèi)非組蛋白，激活或阻遏表達。transcriptionfactor：即轉(zhuǎn)錄因子，能夠結(jié)合在某上游特異核苷酸序列上的蛋白質(zhì)，活化后從胞質(zhì)轉(zhuǎn)位至胞核，通過識別和結(jié)合啟動子區(qū)的順式作用元件,啟動和調(diào)控瞬時表達：外源進入宿主細(xì)胞后，不整合到受體細(xì)胞而獨立于其外，穩(wěn)定表達：具有選擇性標(biāo)記，有完整的哺乳動物細(xì)胞轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)，但無真核子的表達載體，在轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞后，外源進入真核細(xì)胞后，可將整合到細(xì)胞上，可隨細(xì)胞轉(zhuǎn)錄表達和傳代。通過對轉(zhuǎn)染DNA的陽性細(xì)胞克隆篩選，則可獲得外源整合到細(xì)胞中穩(wěn)定表達的細(xì)胞亮氨酸拉鏈：存在于蛋白C末端，為兩組平行，帶亮氨酸的α—螺旋形成的對稱二30個氨基酸，每兩個亮氨酸之間隔有六個氨基酸，于是每兩圈螺旋就有一個亮2個α-螺旋的蛋白分子之間形成一條拉鏈。形成二聚體后可使肽DNA親和力較強而發(fā)生結(jié)合。突變：是組DNA分子在結(jié)構(gòu)上發(fā)生堿基對組成或排列順序的改變（通常它只涉及中部分序列的變化，并引起表型的改變,而使生物體發(fā)生遺傳性變異。無義突變：某個堿基的改變可使某種氨基酸的子突變?yōu)榻K止子。如賴氨酸的密碼子AAG突變?yōu)榻K止子TAG,使肽鏈合成過早終止,因而蛋白質(zhì)產(chǎn)物一般沒有活性。若是發(fā)生在DNA的3’末端處,它所表達產(chǎn)生的多肽常有一定活性或有部分活性,這種突死突變（leakymutation。同義突變是指堿基被替代后,沒有改變產(chǎn)物氨基酸序列,這是與子的簡并性相關(guān),如CTT、CTC、CTA、CTG的第3位堿基互相替代后其編碼表達的產(chǎn)物均為亮氨酸,因此這種突DNA1IFN-2IFN-1/2或IFN-2/1IFNs也可根據(jù)需要將具有協(xié)同效應(yīng)的不同進行接拼。缺失：將原中的非功能區(qū)域的編碼子人為地使之缺失的過程稱為缺失，所表達的產(chǎn)物相對分子質(zhì)量雖然小了，但有時可提高表達效率，如IL-6N17~25個核苷酸可使IL-6的表達效率提高。有時還可降低一些毒性作用。如TNF缺失某一區(qū)域可42、重組載體：將外源性的DNA直接插入缺陷型的組上，插入的外源片段的細(xì)胞中增殖，并包被成顆粒。但為了補充被取代組DNA功能，必須用一種與之互補的輔助。43.重組質(zhì)粒型載體：即重組-質(zhì)粒載體，這類載體只取組中維持在哺乳動物中進行的有關(guān)序列以及抗性標(biāo)記，使它與一個細(xì)菌質(zhì)粒融合，這樣的重組體也能夠在大腸桿菌中進行和增殖，不過這種重組體不能夠被包裝成病毒顆粒，不能出現(xiàn)裂解的情況。44.工程多肽：使微生物對具保護作用的抗原經(jīng)體外重組表達后所的生物活性多肽類稱工程多肽或亞單位其表達系統(tǒng)可以是酵母，也可以是哺乳動物細(xì)胞，若無需糖基化的多肽甚至可在大腸桿菌等原核細(xì)胞中表達。45.置換(generecement)：指將致病整個地被有功能的正常所置換，使致病永久地得到更正。但操作難度大，有學(xué)問題。46.修正(genecorrection)：指將致病的突變堿基序列得以糾正，而正常序列部分予47.修飾(geneaugmentation)：指將目的導(dǎo)入缺陷細(xì)胞或其它細(xì)胞目的的表48.失活(geneinactivation)：應(yīng)用反義技術(shù)特異封閉某些的表達，以達到抑制或阻止某些有害的表達。SiRNA的干擾可造成靶（異常）的失活（或沉默。轉(zhuǎn)動物：就是把外源性目的導(dǎo)入動物的卵或其囊胚細(xì)胞中，并在細(xì)，物的內(nèi),使之發(fā)育成具表達目的的胚胎動物,并能傳給下一代。這樣的動物為轉(zhuǎn)動物。這類動物由于外源性目的的穩(wěn)定存在而賦于子代動物。，與細(xì)胞核供體相同動物的技術(shù)，就叫做動物克隆。敲除：是向正常生物內(nèi)引入某個突變位點而選擇性地使某特定功能失組率原因，較大。：指編碼有功能蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA分子所必須的全部核酸序列。一個不僅5’3’端的終止子非編碼序列。前者為結(jié)構(gòu)后者為調(diào)控。什么叫？何謂的新概念？其主要功能是什么：答就是指編碼有功能蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA分子所必須的全部核酸序列。所謂的新概念是隨著近年分子生物實驗技術(shù)的發(fā)展從分子水平上研究的結(jié)構(gòu)和功能移動遺傳信息的基本遺位是構(gòu)成DNA的功能單位。：答：不能，真核細(xì)胞序列中的內(nèi)含子是插入在結(jié)構(gòu)中間使其不能連續(xù)的間隔序DNAmRNA，而后在轉(zhuǎn)錄后的加工修飾過程中通過兩次轉(zhuǎn)脂反應(yīng)而剪切，在原核細(xì)胞中，由于其組序列不包括這類內(nèi)含子，也缺乏相應(yīng)的內(nèi)含子的同時，真核生物在原核細(xì)胞中表達還必須有相應(yīng)的原核RNA聚合酶以及可識別的原核RNA試述DNA分子的結(jié)構(gòu)及其意義答：DNADNAA,T,C,G一些特定序列以其大量信息決定著DNA的空間結(jié)構(gòu)及間相互作用和調(diào)控功能。DNA二級結(jié)構(gòu)：為DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)，由兩條反向平行互補的脫氧核糖核苷酸鏈組成，兩條鏈之間靠堿基間的氫鍵結(jié)合，多為右手螺旋。意義：解釋了DNA時兩條鏈可分別作為模板生成新的子代互補鏈，從而形成遺傳信息穩(wěn)定傳遞的半保留機制。序列的分子剪刀；2、作為表達抑制物，選擇阻斷靶，抑制轉(zhuǎn)錄；3、序列專性蛋白質(zhì)結(jié)合，影響DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合及DNA轉(zhuǎn)錄等試述cDNA文庫的構(gòu)建過程及其意義答：過程：1、cDNA克?。哼x用目的含量豐富的組織細(xì)胞，提取總RNA，根據(jù)3’末端polyA尾長度不一親和層析法獲取較純的mRNA2第一股cDNA合成分離純化的mRNAmRNA的不同結(jié)合點合成全長cDNA第一鏈（RNA-DNA）3、第二股cDNA的合成：⑴自身引導(dǎo)4、cDNAcDNADNA。意義：1mRNAcDNA2、真核生物細(xì)胞表達mRNA的量比人類組少很多，因此減少了篩選目的的工作量。3、列中直接找到編碼區(qū)，推測氨基酸順序，分析性質(zhì)和功能。5、克隆后可在原核細(xì)胞中試述組文庫的構(gòu)建過程及其意義：（1）DNA（2）的DNA片斷：包括完全酶解，部分酶解和機械切割（3）構(gòu)建組文庫載體，常用載體：粘性質(zhì)粒，λ噬菌體酵母人工系統(tǒng)（4）DNA片段與載體的連接包裝直接與經(jīng)BamHⅠ消化酶切的λT4DNA，然后進行體外包裝產(chǎn)生完整的具有強力的噬菌體顆粒，繼而形成噬菌斑（5）導(dǎo)入細(xì)胞，一DNADNA→②組DNA+λ噬菌體→重組DNA→包裝成噬菌體→細(xì)菌→噬菌（1）化，又催化非甲基化的DNA的水解；而Ⅱ型只催化非甲基化的DNA的水解；III型同時具有試述雙脫氧末端終止DNA法的原理及過程2’，3’–雙脫氧核苷酸（ddNTP）DNAddATP,ddCTP,ddGTP,ddTTP),然后進行聚合反應(yīng).在第一個反應(yīng)物中,ddATP會隨機地代替dATP加反應(yīng)一旦ddATP入了新合成的DNA鏈,由于其3的羥基DNA鏈都是到AGTPCRPCRPCR23DNA2PCRPCR1一起再對靶作第二輪PCR擴增其產(chǎn)物即DNA。道球菌轉(zhuǎn)化實驗，不僅證明了生物的遺傳物質(zhì)是DNA，而且還證明了DNA可以轉(zhuǎn)移，并1961年Monod和Jacob提出子學(xué)說，1968年Crick和Nireberg完全破譯64個遺傳密碼子，確定遺傳信息是以子方式傳遞的；4、轉(zhuǎn)移載體的發(fā)現(xiàn)：20世紀(jì)60年代，發(fā)現(xiàn)了細(xì)菌的質(zhì)粒，它是指生物體以外的環(huán)狀DNA，具有獨立自我的能力，可在；序儀；PCR（PCR。M13答：作為理想的質(zhì)粒載體應(yīng)具備以下幾個條件（1）能自主，即本身是子（2）具功能（3）在組中有1-2個篩選標(biāo)記為寄主細(xì)胞提供易于檢測的表型特征（4）分子量插入失活效應(yīng)也為克隆的選擇提供了表型常用的有免疫功能失活和大腸桿菌-半乳例一：免疫功能失活。Imm434是噬菌體434的免疫區(qū)段，通過噬菌體雜交的辦法導(dǎo)入噬菌體組，構(gòu)成插入型的派生載體。在CⅠ內(nèi)部有EcoRⅠ和HindⅢ的單一切割位點，若在這兩個位點中任意一個插入外源DNA片段，都會導(dǎo)致CⅠ的失活，阻遏蛋白合成受例二：-半乳糖甘酶組中含有一個大腸桿菌的LacZ區(qū)段，在誘導(dǎo)物IPTG存在下，可指導(dǎo)合成-半乳糖甘酶與X-gal結(jié)合形成藍色化合物因此由這樣的載體的大腸桿菌Lac-指示菌，涂布在含有IPTGX-gal的培養(yǎng)基上，會形成藍色噬菌斑。但若在LacZ區(qū)段插圖DNA如何利用抗體標(biāo)記答：1、抗生素抗性標(biāo)記篩選：大多數(shù)質(zhì)粒載體均帶有抗生素抗性，如抗氨芐西林2、抗性的插入失活：在含有兩個抗性的載體中，如果目的DNA片段插入其中對照篩選，可篩選出陽性重組子克隆菌株。如pBR322質(zhì)粒編碼有Tet抗性和Amp抗性，若通過外源DNA片段使Tet或Amp抗性失活，則重組體克隆能在只含有一種抗生如何從所克隆到重組體中鑒定目的的存在和正確性（1）記篩選：當(dāng)帶有完整抗性的載體轉(zhuǎn)化抗性細(xì)胞后，所有轉(zhuǎn)入載體的細(xì)菌都獲得了抗性，能生長。b、抗性的插入失活篩選：在含有兩個抗性的載體中，如果目的DNA片段插入其中一個抗性，就會導(dǎo)致抗性功能失活，用兩個含不同抗生素的平板進行對照篩選。c、-半乳糖甘酶LacZ失活：通過內(nèi)互補作用，使缺失LacZ的突LacI-半乳糖甘酶活性的的突變體結(jié)合，形成有功能活性的-半乳糖如果外源中能夠表達Leu，則可使細(xì)菌生長。（1）利用能與插入片段兩端互補的特異引物，以少量抽提的重組子DNA為模板擴增出特異性和用特異探針進行雜交（5）斑點雜交：將重組體DNA或RNA提取出來，將樣品點在硝酸纖維膜上進行雜交。純化的重組體去除了雜質(zhì)干擾（6）Southernblot：將同源片段定位答：一般用細(xì)菌的或小牛腸的堿性磷酸酶（BAPCAP，預(yù)先處理線性的載體DNA分子，以連接起來了這樣形成的雜種DNA分子的每接位點中，載體DNA都只有一條鏈?zhǔn)峭庠碊NA連接上的，而另外一條鏈由于失去了5’-P基團，不能作此連接，故留下一個具有3’-OH和5’-OH的缺口，盡管如此，這樣的DNA分子仍然可以導(dǎo)入細(xì)菌細(xì)胞，并在寄主細(xì)胞內(nèi)切酶切割目的和載體，產(chǎn)生兩個不同的粘性末端，避免該現(xiàn)象。作用特點：1、多數(shù)位于真核生物結(jié)構(gòu)上游，只有終止子位于下游，而增強子可以在上游也可以在下游。2、能夠與DNA結(jié)合蛋白質(zhì)結(jié)合的特定序列的DNA片段。3、決定轉(zhuǎn)錄起始RNA作用特點：1DNA2DNARNARNA、應(yīng)用：1、遺傳性疾病的治療2、腫瘤的治療（1）抑癌轉(zhuǎn)移的治療（2）策略（2）使HIV細(xì)胞的方法（3）降解策略、20有哪幾種反義核苷酸失活療法？簡述其原理答：原理：反義RNA是一mRNA互補的RNA它是雙鏈DNA中無意義鏈轉(zhuǎn)RNA，因此腫瘤癌活化表達的mRNA的起始翻譯部位就會被相應(yīng)的反義RNA互補結(jié)合形成RNA/RNA雙鏈體進而就了核糖體與啟動子結(jié)合或核糖體mRNA上移以抑制mRNA反義核酸包括三類：1mRNA和DNA結(jié)合，形成RNA/DNA雜鏈或DNA核苷酸三聚體，影響的翻譯或轉(zhuǎn)錄。3、特常表達的mRNA而影響的翻譯?；虺赡陝游锏捏w細(xì)胞使之與去掉細(xì)胞核的細(xì)胞融合，經(jīng)短期培養(yǎng)后形成胚胎細(xì)胞并移植到生殖周期相近的之中，可以發(fā)育成為正常動物。經(jīng)過核移植而產(chǎn)生的動物，其與細(xì)胞核供體相同動物的技術(shù)，就叫做動物克隆。應(yīng)用價值：1、培育優(yōu)良畜種和生產(chǎn)實驗動物。2、生產(chǎn)轉(zhuǎn)動物。3、生產(chǎn)人胚胎干細(xì)胞用于細(xì)胞和組織替代療法。4、瀕危動物物種，保存動物物種資源。試述PCR的原理及過程答：原理：是依據(jù)細(xì)胞內(nèi)DNA半保留的機理，以及體外DNA分子于不同溫度下雙鏈和單鏈可以互相轉(zhuǎn)變的性質(zhì)，在試管中給DNA的體外合成提供一種合適條件：模板DNA，寡鏈核苷酸引物，DNA聚合酶，合適的緩沖液系統(tǒng)和DNA變性、復(fù)性及延伸的溫度與時間等，使目DNAPCR1NA9CDNA2PCRDNA的通過控制退火條件就能使其與擴增34種dNP及g聚合酶在最適作用溫度下可將3’30RT-PCR。錄酶的作用下以mRNA為模板合成速、簡便且敏感性極高的檢測RNA的方法，可用于分析的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、克隆cDNA及合成cDNAcDNART-PCR1mRNA，引物和逆轉(zhuǎn)錄酶以及適當(dāng)?shù)木彌_體系在70C5min，生成相應(yīng)的cDNA。2、dNTP，DNA聚合酶，引物，適當(dāng)?shù)木彌_體系，37C1h，而后95C5min滅活反應(yīng)體系中的其他雜質(zhì)，4C24試述腫瘤的發(fā)生機理抑制作用。3細(xì)胞在增殖過程由于某些因素使DNA在