組織制片技術概述

組織制片技術

組織制片技術的概述組織制片技術的方法組織制片技術的基本程序蘇木精—伊紅染色

組織制片技術的發(fā)展史

從16世紀60年代Hook發(fā)明顯微鏡，開始觀察和描述軟木塞中的細胞至今，組織制片技術隨著生命科學的發(fā)展而不斷進步。

組織制片技術的發(fā)展史

在19世紀中期，隨著生物、物理和化學等學科的飛速發(fā)展，以及顯微鏡和切片機的逐步完善，組織學也建立起一整套完整科學的組織制片技術。

組織制片技術的發(fā)展史

特別是20世紀50年代以來，由于組織化學、免疫組織化學等新技術和新儀器的出現(xiàn)，使組織制片技術的應用領域進入了一個嶄新的時期。

利用組織制片技術的方法所制出的標本，顯示了組織細胞的結構和形態(tài)、組織細胞之間的相互連接及組織細胞中的某些化學成分的種類和含量。提供最直觀的依據(jù)。組織制片是研究醫(yī)學和生物學的一個最基本的手段。組織制片的意義和目的組織制片技術的方法

非組織切片法組織切片法非組織切片法組織不經(jīng)過切片制成觀察標本的方法。非組織切片法的種類涂片、壓片、鋪片、磨片、消化分離標本、活體標本、整裝標本、血管注射標本。涂片敲將所配采的巾血液宴、骨要髓或狐者脫棋落細兄胞涂阿抹于底載玻錦片上偷經(jīng)瑞淹氏、親姬姆驢薩染輝色、蕩常規(guī)HE染色秒。壓片先將俯組織焦處理撐成小模塊物有質，炊然后筍用化鉛學藥挖品進爹行軟匆化和李染色神，再蹈用蓋牌玻片比壓封猾于載胃玻片縮慧上。馬例如汁運動旅終板抄和寄揀生蟲增標本訪等。鋪片死：將濕需要旅觀察崇的薄看片組屠織用卸手工附的方蟲法直視接鋪及于載湊玻片鉤上，胃然后閱經(jīng)過囑固定鞭、染蹤蝶色等阻程序穿制成尾。例鴨如蛙盜的腸腳系膜尚鋪片逝，大唇白鼠犬的皮懸下組甘織鋪壁片等粥。磨片定：對命于骨良，牙賴齒等矛組織窄，不閣經(jīng)脫屯鈣和閉切片資，直探接在標磨石紙上用并手工沿磨成名大約50微米藏左右儲的薄璃片，健然后地再進糖行染疤色封煩固在如載玻復片上紫。消化雹分離責標本厲：先庸將組罪織分修離成見小塊幻玉，然酸后利爸用相布應的師化學輸物質驅將細蜓胞間草質消姥化溶柜解，現(xiàn)再用砍機械鳳分離種的方攻法，都如水吐的震冠蕩沖垃擊力層，使劑小塊分組織朽分離陷成單霸個而蕉又完顆整的已細胞書，經(jīng)囑染色跑后涂股于載雜玻片碗上進寒行封連固。辰例如盛平滑法肌分這離標施本，畝脊髓金的運巴動神害經(jīng)細盜胞等種?；铙w慨標本碌將禽所采嚴的觀右察標銀本加攤生理辯鹽水授后直蹦接滴俗于載辭玻片海上在回顯微化鏡下材觀察嗓。整裝協(xié)標本①將胚鎖胎或胸小動念物經(jīng)勢前期鍛固定盡后整分體封紀藏于狼盛滿樂固定多劑的殺透明擁容器印中。②將發(fā)扁育至愉某一就階段侮的雞園胚整沸體取通出，為經(jīng)固生定、叛染色痛、脫糖水、倆透明水后封檢固于格載玻鍛片上幻玉的標斧本。血管漠注射榨標本①將有叉色物棍質注布射進屆血管污，用賞酸或袋鹼將島血管露周圍娃的組庫織腐解蝕后勺做成潤的整椒體封仍藏的痛血管拒標本刷。②將有粱色物舉質注攝射進杯血管痕后，柏經(jīng)一嫌系列埋制片攻技術鍵處理溜后封涼固于喝載玻如片上功供顯尾微鏡協(xié)下觀漏察的笑標本茶。組織未切片察法利用蕩化學化試劑杰將組掌織經(jīng)蛙過一庭系列度的固道定、期脫水肥、透樓明后賤，再牧利用馬石蠟架、火投棉膠康或者由明膠口等支秀持物臭滲透壟進組楊織內乘部，榴使組礎織保評持一紗定的之硬度鐮，并手包埋賺成塊貼，然田后依敵靠切濫片機桑將包殖埋好瞇的組拉織塊窗切成批以微悉米計戰(zhàn)的薄朽片，誕再根萄據(jù)需豎要進仰行各組種染粥色得薪到的趣供顯擇微鏡惹下觀禮察的鍋標本彩的方跪法。組織繡切片益法的譯種類冰凍埋切片石蠟鏟切片推、火達棉膠腎切片鋒、明府膠切凳片冰凍厲切片將所撫取材浴的新琴鮮組兩織，知經(jīng)快正速冷回凍后倍再切墻片，開以保邀持組糕織內命所含島的脂貫類或話某些季酶類也的活賭性。為觀苗察急傭待結膨果的巾組織粗，如卻臨床產(chǎn)手術失所取摟組織右，也腥可用封這種秧方法中。組織偵切片滔標本棍制作把的基猾本程符序:1.取材→2.固定缸和固尼定后作處理→3.脫水→4.透明→5.浸蠟管與包埋→6.切片→7.染色→8.封固取屑材一、日動物稅的處嬸死手法創(chuàng)迅速乓、快因捷。常用以方法攻：1.麻醉滲法：光吸入射麻醉垃（乙栽醚）淡和注虜射麻折醉（怎烏拉騎坦或漸者戊狂巴比夠妥）蜜。2.空氣豎栓塞埋法：耳尼靜脈司，20－30臣ml空氣3.擊頭城法：學重物逃猛擊句，迅搶速致芽死。4.頸椎摟脫臼殼法：小白厚鼠5.破壞示腦和刷脊髓蜂：金舒屬探譽針，刺蛙6.股動盤脈放寇血：融麻醉鼓后放趙血使什大動跌物迅揭速死劈燕亡。二、和取材然的步樓驟選擇喘動物選擇組取材翠部位選擇纏切面板方向應根晉據(jù)實局驗工坐作的星目的輩和經(jīng)澤濟能觀力選揀擇實衰驗動也物肝臟—豬肝卵巢—貓胃—狗運動顆終板—爬蟲戴類動處物肥大遣細胞—大、滿小白稀鼠的垮皮下暗組織間皮剃和內木皮—蛙的齒腸系惱膜根據(jù)扣器官陶組織禍的結漆構特得點選哀擇取觸材部瞧位胰腺—胰尾元部脊髓晉的運常動神肆經(jīng)元—頸膨拐大和柳腰膨你大處肺—肺門胃—胃底蜘部根據(jù)顫器官連組織助的結需構特司點選掌擇取或材時脊切面裳的方刻向腎臟—腎門奴處作壩縱切頭皮—順毛妄根的捆方向霜縱切大小揚腸的膀環(huán)行吼皺襞—縱切氣管劈燕和食偷管—橫切三、衡取材哥時應釋注意旱的問蜂題：組織雀新鮮聞：取俯材動窗作快南捷，棕迅速伏投入寧固定爽液注意賞環(huán)境諷溫度墻的影漏響：徑冰上歇取材蜂或者貢冷固均定材料淘應小休而薄固：箏不照超過1.魯5×珠1.鼓5先×馬0.罰5c唉m3固定犁液會延造成斷組織短收縮尖，注輸意保常持組匙織原果有形左態(tài)取材錢手術誘器械椒鋒利喪規(guī)范務操作拿，防削止組跨織損插害注意殊取材盲環(huán)境斤和器表械干心凈，很防止肉組織淡污染固定確和固兆定后盆處理一、茂固定獨的目蹦的更：固定畜劑使永細胞述的成叫分凝采固，兩防止諸組織帥細胞伐自溶某和腐晌敗，憂保持休細胞捕生活畏時的心狀態(tài)公。固定奮劑的咳酶染英作用貪使細房誠胞各及成分鉤易于本被染份料著煎色。使組零織適狀度硬斤化，仔利于隔制作鬼薄片倒。二、語固定利的方胡法：1.直接偶固定獲：最圍常用揭。2.蒸汽質固定蛛：1－2％鋨奇酸或摔者甲傾醛揮劣發(fā)的貧蒸汽臉，多畢用于晨涂片搏固定忌。3.灌注泰固定觸：（托必須踢進行榜后固卸定）局部瞧灌注膝固定懸：肺腸、腎罩臟、粉眼球底、肝含臟全身愉灌注學固定宣：神酒經(jīng)系窄統(tǒng)三、臭固定宿的注溫意事暗項：固定值劑的少用量一般扒為組劈燕織塊與體積惱的15倍左名右固定趨劑的督配制現(xiàn)配不現(xiàn)用固定爺?shù)臅r痛間受較胃多因壯素的名影響掙。一滿般過矩夜或串者24小時攔可達暫到固生定要淘求。四、何常用檔固定坦劑單純俯固定燦劑甲醛、乙醇、冰乙芒酸、農(nóng)升汞純、苦縱味酸陰、養(yǎng)重鉻膝酸鉀語、丙物酮、錫鉻酸吃、四交氧化憶鋨固定成組織誰時，揚只單巾用某碎一種愁試劑星尚難礙對各憑種組稀織成到分有佳較理己想的嘩固定云作用刺。因爪此，篩常加珠入其饞它試牢劑，熟根據(jù)弓對組肅織的逐作用鐘與反妻應，村配成蚊混合列固定喪劑，膨以求弱得補摟償某賊試劑婦對組俘織所北致的勉缺陷攤?；旌蠋凸潭ㄉ駝┲行苑兹┞?lián)液、乙醇—甲醛響液、Bo旋ui型n氏液、苦味努酸—硫酸碗液抱、Ca捐rn恥oy氏液順、He墊ll理y氏液甲醛(F混or炸me候ld尚ed意hy努de念)固定缸濃度褲：4%甲醛提溶液固定辦時間富：12小時—2量4小時固定濤后處派理：成流水貿(mào)沖洗12小時—2匠4小時配制律方法棒：規(guī)甲醛10隆ml滿+生理駛鹽水/蒸溜凱水90紹ml特性孟：適甲醛今放置食時間苦過長虜易產(chǎn)獨生白堂色沉對淀“鄙三聚吳甲醛唐”，頓氧化抵后變房誠為甲膽酸，廟使溶緒液變嫂為酸較性，蝕嚴重膊時可彈影響載到細蹤蝶胞核樣著色句（＜）。乙醇(E往th楊yl構a帖lc驅oh脈ol鋤)固定薯濃度情：80場%-應-9處0%乙醇壓液固定快時間攝：森一般4小時—1嶄2小時固定什后處忘理：演直竭接入遷脫水碎劑配制斤方法與：袍無水裕乙醇+蒸餾褲水特性嚼：清乙潑醇具輝有固扔定、躁脫水畝等多島種功斥能。付組織科在高煉濃度蜘乙醇歉中放章置時丘間過駁長時攪，易圓發(fā)脆潤。50厲%以上主濃度難的乙糊醇可伙溶解桌組織查內脂搭肪、鳥類脂仇體、討色素丟等，燥注意訪制片掌的目餡的（＜）。中性步甲醛外液配制蠶方法至：40掃%甲醛12第0m拴l蒸餾假水88返0m岡l磷酸燭二氫抗鈉4g磷酸默氫二害鈉13乘g固定參時間史：24小時固定怒后處牧理：揭流俯水沖壩洗24小時適用河組織障：圍常用多固定博劑，替適用委廣泛（＜）乙醇—甲醛漠液（A—汁F液）配制步方法診：95繳%乙醇90融ml40嶄%甲醛10鴨ml固定蝦時間雹：組纖織塊姐固定4—仆12小時嫩，鋪片述固定5—伏10分鐘菠。固定先后處責理：京直接掉入脫費水劑鋒。適用務組織樹：肥臥大細曾胞，怨糖原灘的固數(shù)定（＜）。Bo惠ui案n氏液配制志方法蠶：飽呀和苦扔味酸殊溶液75五ml40框%甲醛25本ml冰乙艷酸5m唐l固定吼時間徒：12塔—2劇4h固定溫后處找理：70駝%乙醇產(chǎn)脫去醋苦味老酸產(chǎn)竭生的啦黃色適用長組織忌：常瞎備固村定液紀，特星別適濁用于損固定步皮膚扣和胚甜胎組漲織。五、經(jīng)固定挨后處蓮理除去聰組織罩中滲移入的據(jù)固定尸液和妻一些箏由固術定液緞產(chǎn)生生的沉部淀、芹結晶短和色棟素的柔步驟恨稱為讓固定溪后處柏理。主要砍有以外下六厚種方偷法：流水害沖洗：重搬鉻酸念鉀、賺甲醛列固定伴的組訂織，喘要經(jīng)丈過流睜水沖盤洗24尿h。酒精崖脫黃:含有跟苦味岡酸的包固定猛液固方定的沖組織篇，必燦須經(jīng)行過70％乙呀醇洗遮滌脫核去黃萄色。碘酒喝脫汞：氯貪化汞室固定續(xù)的組銅織有壇汞結筑晶，長碘酒村浸泡洲除去只。脫甲略醛色亦素：甲火醛長畫期固觀定的席組織鑒易產(chǎn)剖生黑檢色結樂晶，70％乙蒸醇－糊濃氨雕水溶旱液除列去。組織仍漂白礙：稍鋨酸彼固定水的組召織為課黑色捕。漂憲白液蛾漂白花才上貫色。脫鈣康：含像鈣組拿織骨勻、牙栗齒和譜內耳朽。脫妖水一、亂定義用某洪種能噸與透酒明劑澤互溶身的化轟學試提劑將粥組織罪內的瞧水分勸逐漸摘置換拆出來除的過牌程。要點廚：緩腦慢、舟徹底拘、勿煉過度那。二、繁常用脫水默劑乙醇、丙酮贊、正子丁醇乙醇固定劑+脫水瞞劑上行樣酒精鑼脫水70翼%（30造%）→10泉0%，以10％遞頃增。丙酮脫水死強，鉤但對聯(lián)組織悼的收佳縮脆燈化作淘用也夏強；主要灑用于宰組織捉的固丑定兼瞇脫水潮或切娛片的集快速曾脫水追，以勤保護棵某些希特殊東染色級的標俯本不青被褪類色。透歇明一、允定義對組嚴織的麗最后排脫水按處理朝。在經(jīng)喇過前竿一階口段的怖“脫威水”斜后，桃還要諒借某欺種有斬機溶乓媒將書酒精儀完全押置換枯，使村組織著與所芬用的糊包埋堪介質火相溶事而浸趣滲。二、查常用誦透明情劑二甲起苯、苯甲法酸甲歡脂、三坡氯甲器烷芬、冬小青油二甲出苯為無華色透圖明的只液體煮，易湯揮發(fā)斯，長掘期接晝觸對妖呼吸困道粘箭膜有私較強充的刺諒激作她用20分鐘—1個小況時，摔大塊該組織湯可適床當延鋼長時悲間。作用存迅速她，浸犧泡時掙間過谷長易光發(fā)生樣過度嘩收縮凝和脆磁化苯甲申酸甲貪脂為無恩色透違明的輛液體修，易博揮發(fā)透明添作用賺較二滿甲苯濃緩慢嗎，透高明時煙間12米--捕24小時貧。對組蒸織塊扣的收像縮和病脆化樓的影萬響較納小。苯甲偏酸甲俘脂與急火棉過膠互衰溶，蘋用于窄火棉婚膠切蠟片的掘透明用石燃蠟做殺為支劃撐劑腎將組跨織包陵埋成箭塊使訊其硬椒化的虎過程包括知浸蠟番和包擇埋兩研步一、陪浸蠟組織偶透明挨后，耕用石托蠟置重換組獨織內視部的總透明估劑的皮過程登稱為浸蠟。組織桿塊浸連蠟一勻般先腔經(jīng)過岡低熔甜點蠟凍，再晝經(jīng)過微高熔奧點蠟度。包扭埋高溶煉點蠟竟也稱硬蠟溶點北在60圓℃-輪-6鳴2℃硬蠟廁箱的惕溫度源控制冰在62寨℃-射-6筒4℃之間組織守浸蠟揪時間流一般技不超碧過1小時低溶峰點蠟覺也稱軟蠟溶點腸在48遞℃-蜓-5隙0℃軟蠟霸箱的奇溫度儀控制括在52頸℃—塵54霉℃之間組織濟浸蠟泳時間哈一般繞可達2—掃4小時二、甚包埋組織度浸蠟運完成熱后，舟接著奔進行獅組織鈴塊包冷埋。傳用于宗包埋懂的是尸硬蠟懸。包醬埋在芹包埋何器中原完成挖。修整征蠟塊山時，徒組織扯塊應獅距蠟隆塊邊批緣2—3毫米噸，以園利于炭連續(xù)箱切片謠。切勝片石蠟葉切片組織扛切片轉中應魚用最如為廣踩泛的怨一種須切片事就是贊用石鄉(xiāng)豐蠟作腿為包廢埋劑墾制作瘦的切誕片。站易于墳制作跌大量途菲薄稍的組慘織標掃本，距而且蚊包埋族塊可凡長期銷保存步。一、聞儀器潑及器里材二、佳切片接過程乒：調節(jié)朗恒溫乓水箱廢水溫營至47版℃左右吵；固定安蠟塊散于固摸定器懼；快修路裝置刃修整皮包埋話面；調節(jié)糊切片手厚度爛至4—勤6微米旅；連續(xù)財切片選；攤片新于水湖箱內掌；將蠟道片貼始于涂蹄好粘基片劑篩的載真玻片膝上；置于左溫箱巷內烤旁片。三、刪切片隙的注膜意事睜項①雜切片需前要緒將切鮮片機堂各部虎位的下螺絲籮旋緊唉，否會則會張引起攏切片很機各羊部件暑震動吼，造棵成切灣片厚暮薄不樓勻。②咸包埋撓塊的乎切面女和切升片刀政的傾語斜度攝之間柳的夾叼角應丑按切印片機擱刀臺驚上的錫刻度司作適脅當調殊整。③有恒溫艱水箱薄的溫剃度應規(guī)比包壞埋蠟撓的溶搞點低5℃眾--覺6℃。染秋色一、染料指分蜓子中蜘含有發(fā)色顧團和助色腥團的有親機化旁合物是，有南鮮艷還的色關彩，刮對于敞組織魄有極夏強的參親和泄力。根據(jù)來源可分項為兩閣類：天然靈染料鮮（卡裂紅、雷蘇木燈精）人工很合成光染料殿（苦衛(wèi)味酸靈、桔皺黃G）根據(jù)延其化學秒性質分為睜：堿性悠染料(b蜜as腦ic飽d狼ye圖)酸性訂染料(a饑ci樹d上dy鉛e)中性(n耀eu杰tr次op烤hi飲li攀a)染料二、煎染色獲的原礎理染色就是地染料捕和組絞織細籍胞的奔分子惠相互冊結合尤，使懶組織襪和細羽胞著宮色?；瘜W服反應在組技織細灰胞內巨含有日酸性銀物質葉和堿總性物扣質。習染色適時酸橫性物絞質與幅堿性團染料翁結合王；堿慨性物雀質與持酸性碑染料朋結合談。細快胞核趴中主昌要由奏酸性踐物質截組成絲式（如來核酸蝦等）還，所娃以與平蘇木夕精等在堿性平染料夢有很吊強的罵親和撞力。序細胞沿質主吵要由怒堿性深物質僵組成桌，所婚以與羨伊紅側等酸創(chuàng)性染柏料有誦很強存的親覺和力屬。能被宰堿性技染料姑著色樸的物基質：屠嗜堿核性(b迫as摔op訪hi哈li籌a)；能被瓣酸性姻染料婦著色捎的物喪質：捐嗜酸玩性(a坐ci磁do序ph雜il達ia悲)。物理起反應細胞擇中有膀許多盤微小移的毛貪細小末孔，葛染料閘的色盜素離物子通剪過這時些小孕孔滲證入細伍胞內需，染時料與扶細胞織沒有早牢固編的結視合，女但分貼散的綢色素慕離子友和組志織細缺胞分貿(mào)子之歷間通透過分貴子間細相互口作用棕使細腔胞著揪色。三、拍染色共的注披意事多項：1.溶媒獸：水犁和乙殖醇。2.濃度蔥：低匆濃度間，長睬時間姿。3.溫度寸：高室，染閣色效統(tǒng)果明石顯。4.適當倘使用猾媒染芒劑、吊促染單劑和垂分化窮劑。媒染皆劑：能增郵強染懲料對軍組織光的著毒色能懇力，陪其本命身與姻染料乏或組姥織發(fā)發(fā)生結除合的壺試劑下。如葛配制屠各種傾蘇木亞精染滴色液錘時添瓶加的悔鉀明漿礬、牲銨明赴礬等話。促染汁劑：能增逆強染鄉(xiāng)豐料對連組織桑的著萍色能去力，老本身企并不部參與森染色簡反應燃。如私伊紅悅染色辦液中肥添加錢的冰始乙酸酒等。分化危劑：能薄除去辮組織貸上和訴切片搬上過攏染的叛染色剪液，找使染述色部悲位與爭周圍矩組織芬對比芒鮮明思，著耐色深象淺適豎當；船例如噴低濃胖度的制鹽酸約、醋虜酸、袖高錳批酸鉀侍、重音鉻酸愈鉀等識。封游固一、拌定義最后道一道恒程序吩是滴企加封京固劑敞，用貴蓋玻高片覆遞蓋，趨以利耍于鏡藏下觀琴察。阻斷完組織厲片與來外界育的接盜觸，媽防止尾組織些片脫盆片、幕受潮傳、干養(yǎng)裂、城機械及磨損送等，指延長嗽切片童的使冰用時