梔子中京尼平苷提取方法考察

梔子中京尼平苷提取方法考察【摘要】目的建立梔子中京尼平苷的含量測定方法，在此基礎(chǔ)上考察梔子中京尼平苷的提取方案。方法高效液相色譜法測定含量，采用KromasilC18色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-水；流速為ml/min；檢測波長為nm。梔子粉末先醋酸乙酯回流提取，濾渣再用80%乙醇回流，考察提取效率及京尼平苷純度。結(jié)果京尼平苷在～200μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，r=8。用乙醇回流的提取方式可使京尼平苷提取較完全，醋酸乙酯提取所得京尼平苷純度較高。結(jié)論提取溶劑的種類對(duì)梔子中京尼平苷的提取效率及純度有較大影響，先醋酸乙酯再乙醇的提取方法，可以得到部分純度較高的京尼平苷，且不浪費(fèi)藥材，減少純化等后續(xù)處理的難度。高效液相色譜法檢測梔子中京尼平苷，方法快速、準(zhǔn)確、可行。

【關(guān)鍵詞】京尼平苷；提?。粶y定；純度；高效液相色譜

Abstract：ObjectiveTodevelopanHPLCmethodforthedeterminationofgeniposidefromgardenia.MethodsHighperformanceliquidchromatographywasusedonODSC18withacetonitrile-water(15∶85)asamobilephase.Theflowratewasml/detectionwavelengthwasFirstacircumfluencewasmadebyethyl,theresiduewasextracedby80%ethanol.ThentherateandpurityofGeniposideextractedviadifferentextractionsolventandextractionmethod.ResultsThelinearrangeofgeniposidewas～200μg/ml,r=8.TheextractionmethodofethanolcouldgetahigherextractionrateofGeniposide,andahighpuritywithethylacetateinstead.ConclusionThetypeofsolventintheextractionofGeniposidefromGardeniaaffectstheefficiencyofextractionsignificantly.Makeasequentialextractionbyusingethylfirstandthentheethanol,wecannotonlygettheGeniposideinahighpurity,butalsowastelittleherbs.DeterminationofGeniposideinGardeniacanbedonefastandexactlybyHPLC.

Keywords：Geniposide;Extraction;Determination;Purity;HPLC

梔子為茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果實(shí)。據(jù)2005版《中國藥典》Ⅰ部記載,其具有瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒的功效，主治熱病心煩，黃疸尿赤，血淋澀痛，目赤腫痛，火毒瘡瘍，扭挫傷痛，是一味臨床常用的中藥。近年研究表明，京尼平苷是主要有效成分之一［1］，其提取方法眾多［2］。本文運(yùn)用高效液相色譜法［3～5］建立京尼平苷含量測定方法，并在此基礎(chǔ)上考察特定需要條件下京尼平苷的提取方式［6］，以便摸索出可行的提取工藝。

1儀器與試藥1儀器

RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，DL-5型大容量離心機(jī)，TGL-16H高速離心機(jī)，contrifuge電熱恒溫水浴鍋，SB3200超聲提取器，ZK-82B型真空干燥箱，XW-80A旋渦混合器；高效液相色譜儀系統(tǒng)：Agilent1100型高效液相色譜儀。2試藥

梔子，京尼平苷對(duì)照品，甲醇(分析純)、乙腈，醋酸乙酯，雙蒸水。

2方法與結(jié)果

HPLC分析方法的建立

京尼平苷溶液制備

樣品溶液：取梔子藥材粗粉末約g，精密稱定，置25ml具塞容量瓶中，加入甲醇20ml，定容后密塞稱重，靜置10min后超聲處理20min，放冷稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，量取上清液待測。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液:精密稱取京尼平苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，加甲醇配成100μg/ml的溶液。

色譜條件

色譜柱為KromasilC18柱，流動(dòng)相為乙腈-水；流速ml/min；進(jìn)樣量10μl；檢測波長nm；柱溫25℃，按外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。

系統(tǒng)適用性

按照“”項(xiàng)下色譜條件分析京尼平苷對(duì)照品溶液及梔子藥材樣品溶液，色譜圖如圖1～2所示。理論塔板數(shù)以京尼平苷計(jì)為12000,拖尾因子在～范圍內(nèi),分離度大于，未見樣品中其他組分干擾京尼平苷的測定。

標(biāo)準(zhǔn)曲線

取京尼平苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液,進(jìn)行倍比稀釋，分別配制成濃度為200，100，80，50，25，μg/ml的京尼平苷對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣測定。以梔子苷進(jìn)樣濃度對(duì)峰面積進(jìn)行線性擬合。

所得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=+，R2=8，結(jié)果表明，京尼平苷在～200μg/ml濃度范圍內(nèi)呈較好的線性。

精密度實(shí)驗(yàn)

取京尼平苷對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下分別重復(fù)進(jìn)樣5次，進(jìn)行測定，計(jì)算結(jié)果京尼平苷峰面積的RSD為％。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一梔子藥材，按照梔子藥材樣品溶液的制備方法，平行制備5份，按前述色譜條件進(jìn)行分析，取樣為g，求得京尼平苷峰面積的RSD為％。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取“”項(xiàng)下的樣品溶液，分別在0,1,2,12,24,48h按前述色譜條件進(jìn)樣分析，求得京尼平苷峰面積RSD為%

回收率實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取梔子藥材粉末50mg共5份，分別加入對(duì)照品溶液適量，按上述方法處理，測定京尼平苷的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,可得京尼平苷平均回收率為％，RSD為％。

樣品含量測定

取g京尼平苷粉末，按照“”項(xiàng)下制備樣品待測溶液，進(jìn)樣，將結(jié)果代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，可得其濃度為mg/ml,計(jì)算京尼平苷含量為％。

經(jīng)過上述實(shí)驗(yàn)，已經(jīng)建立HPLC法檢測京尼平苷的可行條件，并制備出本實(shí)驗(yàn)條件下的標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可準(zhǔn)確測定京尼平苷含量。

提取方案

設(shè)計(jì)近年來關(guān)于京尼平苷的研究頗多，關(guān)于其提取方法的研究已比較全面，如李其蘭［7］、廖夫生等［8］均比較了多種提取方法，以及進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，確定最優(yōu)方案等，但其結(jié)論并非完全一致。筆者在這里主要考慮既要提取相對(duì)完全，又要得到純度較高的京尼平苷，以便簡化后續(xù)處理。從該要求出發(fā)，參閱文獻(xiàn)［9］，選擇先用醋酸乙酯提取，濾渣再用乙醇提取，并與直接用乙醇提取相比較。其中每種方案設(shè)平行3組。

先醋酸乙酯提取

再乙醇提取稱取梔子果實(shí)粉末g，加入80ml醋酸乙酯回流5h，抽濾，溶劑洗滌3次，合并濾液，減壓蒸餾，用蒸餾水溶解，抽濾，適量水洗滌后合并濾液，定容至100ml，待測，濾渣備用。

濾渣乙醇提取

取“”項(xiàng)下所得濾渣，加入80％乙醇160ml回流3h，抽濾，合并洗滌濾液，減壓蒸餾，用蒸餾水溶解，抽濾，合并洗滌濾液定容至100ml，待測。

直接乙醇提取

取梔子粉末g，加160ml80％乙醇回流3h，抽濾，減壓蒸餾，用蒸餾水溶解，抽濾，濾液定容至100ml，待測。

檢測與結(jié)果

將“”“”“”項(xiàng)下所得樣品溶液，進(jìn)行適當(dāng)稀釋后，用所建立的HPLC方法進(jìn)行分析，得出直接乙醇提取法得京尼平苷含量為%，醋酸乙酯提取法得京尼平苷含量為%，醋酸乙酯提取濾渣乙醇續(xù)提得京尼平苷含量為%。直接乙醇提取法所得HPLC結(jié)果見圖3。

《中國藥典》提示，“”項(xiàng)下的甲醇提取法能提取完全，相比較，“”項(xiàng)下方法京尼平苷提取率高，提取完全，但雜質(zhì)也較多；方法“”所得溶液HPLC圖譜雜質(zhì)峰少、但提取不完全；“”項(xiàng)方法與“”項(xiàng)方法相結(jié)合，既能得到較高純度的京尼平苷，又不造成其損失。

3討論

提取溶劑的種類對(duì)梔子中京尼平苷的提取效率及純度有較大影響。京尼平苷易溶于水，但水滲透力差，不易將其從梔子粉末中提出?！吨袊幍洹诽崾炯状继崛⌒矢?，但其毒性較大，且殘留會(huì)對(duì)后續(xù)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生不利影響。乙醇提取法帶出大量水溶性雜質(zhì)，不易分離。醋酸乙酯提取法，可以得到較高純度的京尼平苷，但提取不完全。

本文采用先醋酸乙酯提取，濾渣加用80%乙醇回流，提取方案既能得到部分純度較高的京尼平苷，又能盡量提取完全。濾渣乙醇續(xù)提部分，由于總量減少，處理起來也相對(duì)方便，減少了后續(xù)處理的難度。研究表明，該提取方案可行、可靠；文中建立的HPLC方法具有較高系統(tǒng)適用性，能滿足京尼平苷提取方法考察要求，可準(zhǔn)確測定京尼平苷含量，方法可行，結(jié)果可信。

【參考文獻(xiàn)】

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［7］李其蘭,陳紅專,張躍軍,等.中藥