檢驗(yàn)的確認(rèn)與驗(yàn)證

關(guān)于檢驗(yàn)的確認(rèn)與驗(yàn)證第1頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月為什么要檢驗(yàn)驗(yàn)證這里所說(shuō)的驗(yàn)證不光是指方法驗(yàn)證，還包括一個(gè)儀器設(shè)備確認(rèn)（有些單位也叫驗(yàn)證，不過(guò)國(guó)外一般稱之為Qualification，一般譯成確認(rèn)），甚至還有一個(gè)叫做系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。

看似簡(jiǎn)單的檢驗(yàn)，其實(shí)需要建立在相當(dāng)?shù)囊欢▽用嫔稀z驗(yàn)可以理解為一個(gè)金字塔，最底層也是最關(guān)鍵的是儀器設(shè)備確認(rèn)，試想你的儀器都不好使，你檢出的結(jié)果怎么能夠相信。舉例：尺子（刻度為英尺）天平（最小稱量50mg）第2頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月檢驗(yàn)驗(yàn)證還包括哪些儀器確認(rèn)再往上是方法驗(yàn)證。方法驗(yàn)證中也包括了確認(rèn)、交叉驗(yàn)證、轉(zhuǎn)移驗(yàn)證等內(nèi)容，不外乎是你需要做什么樣的試驗(yàn)，來(lái)確保你檢測(cè)結(jié)果是可信的，在你的實(shí)驗(yàn)室是可以實(shí)現(xiàn)和完成的。再往上是系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，這可能也是國(guó)內(nèi)大家做得比較少的，往往藥典對(duì)它也不是太關(guān)注，頂多是有點(diǎn)重復(fù)性的概念。其實(shí)以下幾個(gè)方面我個(gè)人認(rèn)為也可以是系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的一部分，它包括空白干擾、對(duì)照品檢查（即雙份對(duì)照品的平行性檢查）、括號(hào)對(duì)照品檢查（即檢查系統(tǒng)沒(méi)有發(fā)生漂移，以及溶液穩(wěn)定）、有關(guān)物質(zhì)的定量限、分離度（包括峰谷比）等。只有建立在這個(gè)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)通過(guò)的基礎(chǔ)上，本次試驗(yàn)的結(jié)果才是可信的。第3頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1、儀器設(shè)備確認(rèn)這是個(gè)在新版GMP中引進(jìn)的概念，以前只有工藝驗(yàn)證、生產(chǎn)設(shè)備和公用工程系統(tǒng)等概念。其實(shí)這個(gè)概念由來(lái)已久，簡(jiǎn)單的理解可以說(shuō)是3Q（對(duì)于分析儀器基本上不需要設(shè)計(jì)確認(rèn)，都是成型的東西，頂多需要個(gè)URS），再加上個(gè)校準(zhǔn)就差不多了?？赡車?guó)內(nèi)很多單位甚至一些所謂的“磚家”認(rèn)為檢定就是儀器設(shè)備的全部，其實(shí)我個(gè)人對(duì)檢定是最不感冒的：第一，儀表、標(biāo)準(zhǔn)器械類的一般沒(méi)有問(wèn)題；第二，儀器設(shè)備類的可能與我們行業(yè)的要求及用戶需要有很大不同；第三，很多檢測(cè)是沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)的，就給你一個(gè)校驗(yàn)結(jié)果，你自己看去；第四，有相當(dāng)一部分根本就不做，有些讓客戶自己做，讓他做還有什么意義，只是收錢而已。在我看來(lái)，儀器設(shè)備的檢定、檢測(cè)那是給一些官老爺們看的，確認(rèn)才是給自己用的（很多官老爺不懂也不看）。目的明確了，確認(rèn)也就好做了。

第4頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3QIQ：不外乎是要看一下水、電、氣、環(huán)境、東西是否正確齊全、安裝人員的資質(zhì)、軟件等等是否符合要求，與你的合同是否一致。OQ：主要是看你的儀器設(shè)備是否能夠正常運(yùn)行，包括功能鍵、密碼等是否能夠正確通過(guò)；儀器設(shè)備的主要指標(biāo)是否能夠滿足。PQ：主要是看儀器設(shè)備是否能夠滿足用戶的需求。

有很多儀器設(shè)備的OQ和PQ并不一定能夠界定得很清楚，沒(méi)有必要一定強(qiáng)行去劃分，最重要的是能夠滿足你的要求，而且沒(méi)必要做多次重復(fù)和工作。還有很多儀器設(shè)備并不需要進(jìn)行OQ和PQ，甚至同一儀器目的不同也會(huì)有所差別。例如一臺(tái)干燥箱，如果只是烘玻璃器皿，那就不需要進(jìn)行OQPQ確認(rèn)；還有一些儀器，由于每次使用都需要進(jìn)行校準(zhǔn)，那么這種儀器對(duì)于所謂的確認(rèn)要求也可以降低，例如pH計(jì)等；還有一些儀器設(shè)備，他的作用只是輔助的，準(zhǔn)確與否對(duì)你實(shí)驗(yàn)的結(jié)果影響不大，這時(shí)你也不需要進(jìn)行確認(rèn)，例如離心機(jī)、磁力攪拌器等。第5頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月天平的日常校驗(yàn)天平在所有儀器設(shè)備里是一種比較特殊的儀器，除了需要進(jìn)行正常的確認(rèn)外，還要每天進(jìn)行日校（更合適的應(yīng)該叫做日常檢查）。這是因?yàn)樘炱皆跈z驗(yàn)中非常關(guān)鍵，而且本身也容易受各種條件的影響而發(fā)生偏移。個(gè)人覺(jué)得在進(jìn)行日校時(shí)應(yīng)設(shè)立警戒限和行動(dòng)限，所謂警戒限就是指當(dāng)天平超出這個(gè)值時(shí)你要做重新校正（例如內(nèi)?；蛲庑＃?，以使之不會(huì)再發(fā)生更大的偏移；所謂行動(dòng)限就是指當(dāng)天平走出這個(gè)值時(shí)你需要對(duì)過(guò)去一天以來(lái)的所有數(shù)據(jù)進(jìn)行回顧和調(diào)查（可以通過(guò)偏差調(diào)查的方式），以確定哪些檢驗(yàn)結(jié)果是有效的，哪些數(shù)據(jù)是無(wú)效的。如果平時(shí)不進(jìn)行日校，那么你根本無(wú)法確定當(dāng)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題的這段時(shí)間哪些數(shù)據(jù)還可用。還有一種所謂的日校，就是日校時(shí)首先清零，再外校，再檢查。就相當(dāng)于你把罪證都已經(jīng)銷毀了，再自己查一次，說(shuō)，“沒(méi)問(wèn)題”，那不是自己騙自己?jiǎn)?！不過(guò)相信還是比從來(lái)都沒(méi)做過(guò)強(qiáng)。前幾天去做供應(yīng)商審計(jì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)人家根本連砝碼都沒(méi)有，還校啥呀，問(wèn)他們?cè)鯓诱J(rèn)為天平有問(wèn)題，答曰“天平?jīng)]回到零點(diǎn)”，然后找計(jì)量院來(lái)看看。第6頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月儀器設(shè)備的OQPQ舉例HPLC：泵流速（準(zhǔn)確性和波動(dòng)性）、進(jìn)樣器（重復(fù)性和殘留量）、紫外檢測(cè)器（波長(zhǎng)準(zhǔn)確性、燈能量、噪音和漂移）、多元混合器（梯度準(zhǔn)確性和波動(dòng)性）。

UV：波長(zhǎng)準(zhǔn)確性、吸收值準(zhǔn)確性和重復(fù)性、基線平直度、分辨率、噪音和漂移等。

恒溫（包括恒濕）箱：不同溫度（濕度）分布、準(zhǔn)確性和波動(dòng)性。

滅菌鍋：除溫度分布外，還有程序升溫曲線以及熱穿透性。

第7頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、分析方法驗(yàn)證這部分內(nèi)容在ICHQ2部分有明確的闡述，但只是在概念上比較清晰，在實(shí)踐應(yīng)用中卻不是特別明確，在這里只是對(duì)其需要特別注意的事項(xiàng)作一個(gè)補(bǔ)充。

有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)的方法驗(yàn)證具有一定的特殊性，也是最容易被質(zhì)疑的方法，這里暫不提到，更多的是其他方面的常見(jiàn)問(wèn)題。

驗(yàn)證的方法與檢驗(yàn)方法不一致是最常見(jiàn)的問(wèn)題！即使CDE和一些藥檢機(jī)構(gòu)可能也沒(méi)有注意到這一點(diǎn)，而且由于國(guó)內(nèi)注冊(cè)中大家都知道的原因造成沒(méi)有大量數(shù)據(jù)的積累，進(jìn)而不會(huì)在注冊(cè)中發(fā)現(xiàn)這個(gè)問(wèn)題所造成的巨大影響，舉個(gè)例子說(shuō)明。

第8頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月研磨制備供試品（1）很多國(guó)人在制定含量（固體制劑）測(cè)定時(shí)，都采用研磨后稱取的方法制備供試品溶液，甚至在一些口岸所都將進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)中的投片法給改為研磨法；而在方法驗(yàn)證中即沒(méi)有采用研磨法，所以看上去驗(yàn)證的結(jié)果很美，但你得到的結(jié)果卻可能是個(gè)偽結(jié)論。因?yàn)楹芏嘈∫?guī)格的產(chǎn)品在研磨過(guò)程中都會(huì)存在吸附現(xiàn)象，這種現(xiàn)象會(huì)因?yàn)椴煌娜?、不同的研磨工具、不同的力度和時(shí)間等因素而有所不同，最經(jīng)典的結(jié)果就是經(jīng)常會(huì)發(fā)現(xiàn)含量測(cè)定的結(jié)果要低于均勻度測(cè)定的平均值！那么請(qǐng)注意，如果你要采用研磨法制備樣品，請(qǐng)?jiān)隍?yàn)證時(shí)也要將對(duì)照品研于空白輔料或樣品（加樣回收）中，而不是直接投入容量瓶里！如果你要直接投入容量瓶中，只有你的方法是投片法，或者全轉(zhuǎn)移的方法！第9頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3、分析方法確認(rèn)這里單獨(dú)提出來(lái)是因?yàn)樵谛掳鍳MP中提出了這個(gè)概念，而國(guó)內(nèi)官方?jīng)]有給出明確的概念。GMP第223條：對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法，企業(yè)應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)，以確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠。分析方法確認(rèn)是指一個(gè)方法對(duì)于你的產(chǎn)品（或物料）、實(shí)驗(yàn)條件在你的實(shí)驗(yàn)室能否進(jìn)行的一種適用性檢測(cè)。即：確認(rèn)本實(shí)驗(yàn)室具備檢驗(yàn)條件和能力，能確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。第10頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月比如說(shuō)你的工藝與其他人家不同，你的雜質(zhì)分布也會(huì)有可能不同，因此藥典的方法不一定能夠適合你的產(chǎn)品，所以你要進(jìn)行確認(rèn)。至于你確認(rèn)哪些項(xiàng)目，在美國(guó)藥典附錄1226中有所描述，但由于各家對(duì)其理解有所不同，它被認(rèn)為是最低要求，你要根據(jù)自己的情況適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行增補(bǔ)。第11頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月如何進(jìn)行方法確認(rèn)當(dāng)然并不是所有的藥典方法都要做確認(rèn)，已使用多年的、通用的方法是不需要做確認(rèn)的，例如熾灼殘?jiān)?、干燥失重、pH等實(shí)驗(yàn)室日常測(cè)試。一般需要做確認(rèn)的方法通常是指色譜法，但并不局限于此。第12頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月如何進(jìn)行方法確認(rèn)方法確認(rèn)=簡(jiǎn)要的方法驗(yàn)證以含量為例，一般應(yīng)確認(rèn)：準(zhǔn)確度、精密度（系統(tǒng)重復(fù)性、分析重現(xiàn)性）、專屬性。操作及限度要求同方法驗(yàn)證。一是確認(rèn)產(chǎn)品是否適用這個(gè)檢驗(yàn)方法，尤其是制劑處方中的輔料是否有干擾。二是確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室的條件能否用這個(gè)方法獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，包括儀器設(shè)備、環(huán)境、人員等。第13頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月如何進(jìn)行方法確認(rèn)參見(jiàn)下表驗(yàn)證項(xiàng)目第1類方法第2類方法第3類方法第4類方法定量分析限度試驗(yàn)準(zhǔn)確度是是＊＊否精密度是是否是否專屬性是是是是是檢出限否否是＊否定量限否是否＊否線性＊＊否＊否范圍＊＊＊＊否第14頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月＊：表示根據(jù)特殊實(shí)驗(yàn)的性質(zhì)決定是否需要第1類方法：定量測(cè)定散裝藥品中主成分或成品藥中活性成分的分析方法。第2類方法：測(cè)量散裝藥品中雜質(zhì)或成品藥中降解化合物的分析方法。第3類方法：測(cè)量藥品性能特性（如溶出度、釋放度）的分析方法。第4類方法：鑒別試驗(yàn)第15頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法轉(zhuǎn)移還有一個(gè)概念與確認(rèn)比較相近，叫做方法轉(zhuǎn)移。在我看來(lái)，方法轉(zhuǎn)移可以認(rèn)為是方法確認(rèn)加上重現(xiàn)性，更重要的是指你實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果與原實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果是一致的。第16頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（SST）這一部分是國(guó)內(nèi)很多實(shí)驗(yàn)室都不太關(guān)注的地方，其實(shí)這一部分對(duì)于檢驗(yàn)是非常關(guān)鍵的。簡(jiǎn)單的說(shuō)，你的檢驗(yàn)結(jié)果是否可信、是否有效、是否有說(shuō)服力全在這里了。SST一般主要考察哪些方面（主要從色譜角度）：

（1）重復(fù)性：檢查通過(guò)則表明你的系統(tǒng)一直處于穩(wěn)定狀態(tài)，你的儀器沒(méi)有問(wèn)題。如果你的檢驗(yàn)結(jié)果有問(wèn)題，要么是你的制備有問(wèn)題，要么是你的樣品有問(wèn)題，儀器出現(xiàn)問(wèn)題的機(jī)會(huì)很小。第17頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月括號(hào)對(duì)照品檢查重復(fù)性國(guó)內(nèi)有相當(dāng)?shù)钠髽I(yè)都在做，但另外一個(gè)概念很多企業(yè)都不太關(guān)注：括號(hào)對(duì)照品檢查。意思是什么呢，你的樣品被對(duì)照品進(jìn)樣包著，形成一個(gè)括號(hào)，括號(hào)沒(méi)有問(wèn)題，才表明你的樣品檢測(cè)沒(méi)有問(wèn)題，否則你后面的對(duì)照品與前面的樣品不一致，你怎么保證你的樣品在檢測(cè)時(shí)沒(méi)有問(wèn)題。在一些要求嚴(yán)格的企業(yè)，如果供試品后面沒(méi)有括號(hào)檢查，那么可以認(rèn)為這期間你所有的樣品的檢測(cè)結(jié)果都是無(wú)效的。第18頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月分離度考查（2）分離度考查：這往往是有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)SST最常見(jiàn)的要求（但國(guó)內(nèi)很多標(biāo)準(zhǔn)，尤其是進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)，居然將它轉(zhuǎn)移至含量測(cè)定中去，估計(jì)連自己都不知道在干什么）。由于國(guó)外對(duì)于雜質(zhì)研究的比較透徹，所以它并不會(huì)像國(guó)內(nèi)那樣去比較供試品和未知雜質(zhì)的分離情況，更多的是以加標(biāo)的方法來(lái)考查。第19頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月定量限考查（3）定量限考查：在一些較先進(jìn)的方法中，往往規(guī)定了配制定量限溶液，以之進(jìn)樣，檢測(cè)信噪比，要求不得小于10，否則雜質(zhì)無(wú)法準(zhǔn)確定量，這往往要優(yōu)于你在方法驗(yàn)證中所做的用信噪比去篩濃度的作法，因?yàn)樾旁氡葧?huì)受儀器本身、流動(dòng)相、電信號(hào)、柱子、溫度等多方面的影響，甚至有不同數(shù)量級(jí)的差別，因此后者往往沒(méi)有任何實(shí)際意義。（4）理論板數(shù)、拖尾因子等。自己看藥典去，與前三個(gè)概念一比，沒(méi)有值得說(shuō)的地方。

除了這些，以下的內(nèi)容也可以被認(rèn)為是SST的一部分，超出規(guī)定的范圍也被認(rèn)為是無(wú)效數(shù)據(jù)：第20頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月平行對(duì)照品（5）平行對(duì)照品：如果兩份對(duì)照品不平行，那么說(shuō)明你配制過(guò)程中可能存在問(wèn)題，你無(wú)法確定哪一個(gè)是正確的，因此兩份都無(wú)效，你也不需要再往下進(jìn)樣，直接重新配制再進(jìn)樣就OK了，對(duì)照品無(wú)效，那么檢驗(yàn)的樣品數(shù)據(jù)也就無(wú)效了。第21頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月平行樣品（6）平行樣品：同平行對(duì)照品，兩份不平行則說(shuō)明至少你樣品制備有問(wèn)題，除非你能證明你的方法有問(wèn)題，既然制備有問(wèn)題，檢驗(yàn)結(jié)果當(dāng)然無(wú)效了。如果這時(shí)有一個(gè)數(shù)據(jù)為OOS結(jié)果，你也大也不必進(jìn)行調(diào)查，因?yàn)檫@是無(wú)效數(shù)據(jù)，OOS只有是在有效數(shù)據(jù)的情況下再進(jìn)行調(diào)查。例如含量要求98.0%-102.0%，平行要求不得過(guò)2.0%，結(jié)果是99.0%和102.5%，那么你不需要進(jìn)行OOS調(diào)查；而如果結(jié)果是101.0%和102.5%，你就需要進(jìn)行OOS調(diào)查。要記住，你的平行樣品的規(guī)定是你自己要求的。第22頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月為什么要平行測(cè)定含量測(cè)定時(shí)都采用雙對(duì)照品，請(qǐng)問(wèn)：計(jì)算時(shí)應(yīng)該采用A還是B，或者是A和B的平均值，抑或其他，為什么？采用兩份的平均值會(huì)不會(huì)增加準(zhǔn)確性？為什么要做兩份，做三份、五份行不行？

第23頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月平行測(cè)定的目的做兩份的目的是用以證明你的稱量和配制過(guò)程是沒(méi)有問(wèn)題的！任何操作本身就有誤差，就如我們前面所說(shuō)的那樣，你所用的儀器設(shè)備都要確認(rèn)過(guò)的，而且像天平每天都要做校驗(yàn)，但仍然不能避免誤差，更何況還有可能出現(xiàn)人為誤差，而這些誤差并不見(jiàn)得你在操作過(guò)程中就可以發(fā)現(xiàn)（發(fā)現(xiàn)了你就該重新配了）。在你的儀器例如HPLC已經(jīng)確認(rèn)完成的基礎(chǔ)上，進(jìn)樣平行樣品，如果有操作導(dǎo)致的誤差可能被發(fā)現(xiàn)（當(dāng)然三份時(shí)發(fā)現(xiàn)的機(jī)會(huì)就更大）。簡(jiǎn)單舉個(gè)例子，你在稱量時(shí)出現(xiàn)灑的機(jī)率是1%，那么稱兩份時(shí)出現(xiàn)灑的機(jī)率就是萬(wàn)分之一。第24頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月如何計(jì)算計(jì)算時(shí)應(yīng)該采用哪個(gè)呢，A、B還是平均值？答案其實(shí)是都可以，只要檢查通過(guò)！因?yàn)槎叨际钦_的，而且你也沒(méi)辦法證明哪個(gè)更準(zhǔn)確，也就不能說(shuō)明平均值會(huì)更好。第25頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月平行測(cè)定的意義在你的儀器確認(rèn)沒(méi)有問(wèn)題