第二章天然產(chǎn)物的提取分離與結(jié)構(gòu)鑒定演示文稿

第二章天然產(chǎn)物的提取分離與結(jié)構(gòu)鑒定演示文稿目前一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)優(yōu)選第二章天然產(chǎn)物的提取分離與結(jié)構(gòu)鑒定目前二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)研究天然產(chǎn)物化學(xué)成分的基本步驟原材料單體化合物總提取物不同部位目的化合物結(jié)構(gòu)修飾人工合成提取初步分離精細(xì)分離純化目前三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)水親水性有機(jī)溶劑親脂性有機(jī)溶劑二、提取方法超臨界流體萃取法（SFE）水蒸氣蒸餾法溶劑提取法升華法壓榨法溶劑目前四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)（一）溶劑提取法

溶劑提取法原理——“相似相溶”

溶劑的選擇取決于被提取成分化學(xué)結(jié)構(gòu)、

溶解性及溶劑的性質(zhì)。注意：

乙醇、甲醇雖然屬于親水性溶劑，可與水混溶，但很多親脂性成分可溶于乙醇、甲醇，所以乙醇或甲醇提取液中既有水溶性成分，也有很多脂溶性成分。

目前五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)溶劑提取法根據(jù)天然成分的溶解性不同，選用對(duì)所需成分溶解度大而對(duì)其他成分溶解度小的溶劑，將所需成分從生物材料中溶解出來(lái)的一種提取方法。

目前六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

溶劑提取是指溶劑進(jìn)入生物體細(xì)胞，溶解或分散其有用物質(zhì)而變成浸出物的全過(guò)程。包括浸潤(rùn)、解吸和擴(kuò)散三個(gè)階段。1、溶劑提取法的原理選擇溶劑依據(jù)相似相溶原理。目前七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

浸潤(rùn)：滲透階段溶劑通過(guò)細(xì)胞壁滲透到細(xì)胞中。解吸：溶解階段細(xì)胞內(nèi)容物與細(xì)胞組織之間有親和力，溶劑破除這種親和力。擴(kuò)散：置換階段利用細(xì)胞內(nèi)的滲透力產(chǎn)生的壓差而抽提出來(lái)，用溶劑占領(lǐng)內(nèi)容物的位置而將內(nèi)容物置換出來(lái)。目前八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)2、選擇溶劑的要點(diǎn)

*對(duì)所要成分溶解度大*沸點(diǎn)適中容易回收*低毒安全*廉價(jià)天然產(chǎn)物成分中，萜、甾等大環(huán)、稠環(huán)化合物極性小，易溶于氯仿、乙醚等；糖、苷等易溶于水、乙醇等極性溶劑中；酸堿性成分因存在狀態(tài)不同溶解性不同。最常用的溶劑為乙醇。目前九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)3、常用溶劑的分類(lèi)

水及酸水或堿水等，適合提取無(wú)機(jī)鹽、可溶性糖、多酚類(lèi)、氨基酸、水溶性蛋白質(zhì)、有機(jī)酸鹽、生物堿鹽、苷類(lèi)等。1.強(qiáng)極性溶劑目前十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)2.弱極性溶劑3.非極性溶劑

親脂性有機(jī)溶劑，如乙醚、氯仿、乙酸乙酯、苯、石油醚、環(huán)己烷等。適合提取：除蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、果膠、淀粉與部分多糖外，大多可溶；部分脂溶成分亦可溶。通過(guò)調(diào)節(jié)乙醇濃度、加酸、加堿可改變分離效果。

親水性有機(jī)溶劑，如甲醇、乙醇、丙酮。適合提取極性小的成分，但滲透性差，易燃、易揮發(fā)，常有毒性；樣品中水分多則提取效果差目前十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)水>甲醇>乙醇>丙酮>乙酸乙酯>乙醚>氯仿>苯>石油醚常見(jiàn)溶劑極性的強(qiáng)弱順序：目前十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)4、溶劑的選擇

(1)水：為價(jià)廉、易得、使用安全的強(qiáng)極性溶劑。適于提取無(wú)機(jī)鹽、糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸鹽、生物堿鹽、苷類(lèi)等。(2)親水性有機(jī)溶劑：以乙醇最常用。高濃度提取親脂性成分，低濃度提取親水性成分。(3)

親脂性有機(jī)溶劑：具有較強(qiáng)的選擇性，對(duì)揮發(fā)油、油脂、葉綠素、樹(shù)脂、內(nèi)酯、某些生物堿及一些苷元均可提取出來(lái)。優(yōu)缺點(diǎn)：沸點(diǎn)低，濃縮回收方便，但易燃、有毒、價(jià)貴，穿透力差。目前十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)5、溶劑提取的方法溶劑提取的方法連續(xù)回流提取法回流提取法煎煮法（煎中藥）滲漉法浸漬法（泡藥酒）目前十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)（1）浸漬特點(diǎn)

適用于較易提取的有效成分遇熱易破壞以及含多量淀粉、樹(shù)膠、果膠、粘液質(zhì)的天然物的提取。適用范圍特點(diǎn)：浸出率較差，特別是用水為溶劑，其提取液易于發(fā)霉變質(zhì)，須注意加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎?。目前十五?yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)粉碎好的藥材放入提取用的容中，加入溶劑使沒(méi)過(guò)藥面，浸泡12小時(shí)。濾出溶劑，加入新的溶劑繼續(xù)提取加入溶劑浸泡12小時(shí)后浸漬法目前十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)（2）滲漉法向原料粗粉中不斷添加溶劑，使其滲過(guò)原料，從滲漉筒下端出口流出浸出液的一種浸出方法。目前十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)（2）滲漉特點(diǎn)

當(dāng)溶劑滲進(jìn)原料溶出成分比重加大而向下移動(dòng)時(shí)，上層的溶液或稀浸出液便置換其位置，造成良好的濃度差，使擴(kuò)散能較好地進(jìn)行。原理特點(diǎn)：浸出效率較高，浸出液較澄清。溶劑消耗量大、費(fèi)時(shí)長(zhǎng)。

目前十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

（3）煎煮法以水為溶劑，對(duì)遇熱易破壞和揮發(fā)性成分有影響，對(duì)含多量淀粉、黏液質(zhì)的原料也不適用。傳統(tǒng)的中藥煎制。目前十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

（4）回流提取法使用有機(jī)溶劑。對(duì)遇熱易破壞的成分有影響。目前二十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)目前二十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

（5）連續(xù)回流提取法索式提取器的組成

循環(huán)使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑，在脂肪提取器中連續(xù)提取的方法。提取效率高，節(jié)省溶劑。但不適于熱不穩(wěn)定成分的提取。

也可采用混合溶劑，常用的有水和乙醇。不同比例的溶劑可提出不同成分，如CHCl3-C2H5OH(95:5) 可提取出強(qiáng)心甙、有機(jī)酸、葉綠素等。目前二十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

連續(xù)回流

(索氏提取)

目前二十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)目前二十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

①.把濾紙做成與提取器大小相應(yīng)的濾紙筒，然后把需要提取的樣品放入濾紙筒內(nèi)，裝入提取器。注意:a.濾紙筒既要緊貼器壁，又要方便取放。（濾紙筒上可以套一圈棉線(xiàn)，方便提取完成后取出濾紙筒。）b.被提取物高度不能超過(guò)虹吸管，否則被提取物不能被溶劑充分浸泡，影響提取效果。被提取物亦不能漏出濾紙筒，以免堵塞虹吸管。如果試樣較輕，可以用脫脂棉壓住試樣。

操作步驟：

目前二十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

②.在提取用的燒瓶中加入提取溶劑和沸石（沒(méi)有沸石可以用玻璃珠或碎瓷片，目的就是防止暴沸）。③.連接好燒瓶、提取器、回流冷凝管，接通冷凝水,加熱。沸騰后，溶劑的蒸氣從燒瓶進(jìn)到冷凝管中，冷凝后的溶劑回流到濾紙筒中，浸取樣品。溶劑在提取器內(nèi)到達(dá)一定的高度時(shí)，就攜帶所提取的物質(zhì)一同從側(cè)面的虹吸管流入燒瓶中。溶劑就這樣在儀器內(nèi)循環(huán)流動(dòng)，把所要提取的物質(zhì)集中到下面的燒瓶?jī)?nèi)。目前二十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

具體的回流時(shí)間是不一樣的，有的是按文獻(xiàn)要求提取一定時(shí)間，有的是提取至提取液無(wú)色，又比如用乙醚提取樣品中的脂肪時(shí)是以抽提管中流出的乙醚揮發(fā)后不留下油跡為抽提終點(diǎn)?？傊褪且崛⊥耆珵橹埂Ｄ壳岸唔?yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)目前二十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)目前二十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)薄膜蒸發(fā)目前三十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

6、影響溶劑提取法的因素（1）生物材料的粉碎度材料細(xì)，面積大，擴(kuò)散快，效果好。但是太細(xì)，吸附作用大，易糊化，擴(kuò)散慢，同時(shí)植物細(xì)胞也會(huì)遭受破壞，大量蛋白質(zhì)、淀粉被提出，產(chǎn)生沉淀或膠束狀，影響提取?；ā⑷~可適當(dāng)粗些，皮、莖、根宜細(xì)些。目前三十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

（2）提取溫度一般使用常溫，在不破壞有效成分的條件下加熱不要超過(guò)80?C。

溫度低提取時(shí)的雜質(zhì)少，溫度高時(shí)提取效率高；但含淀粉、粘液質(zhì)較多的材料，水提時(shí)避免熱提。目前三十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

（3）提取時(shí)間以提完為準(zhǔn)，是否完全可以提取也做定性實(shí)驗(yàn)，或薄層層析檢測(cè)，或以液體顏色判斷。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果確定是否需要延長(zhǎng)提取時(shí)間。目前三十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

（4）濃度差根據(jù)擴(kuò)散原理，造成提取液的濃度差可以提高提取的效率?？刹扇〉拇胧┯校簲嚢?、更換溶劑。目前三十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

（5）新技術(shù)的使用超聲波、微波促提技術(shù)的應(yīng)用，可以加快提取速度，提高提取效率。目前實(shí)驗(yàn)室廣泛使用的超聲波萃取儀是將超聲波換能器產(chǎn)生的超聲波通過(guò)介質(zhì)（通常是水）傳遞并作用于樣品，這是一種間接的作用方式，聲振強(qiáng)度較低，必須通過(guò)增加超聲波發(fā)生器功率（3300W）來(lái)提高萃取效率。但較大的超聲波功率，又會(huì)發(fā)出令人感覺(jué)不適的噪音。

超聲波促提原理：目前三十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

為物理過(guò)程，無(wú)化學(xué)反應(yīng)，不改變生物活性，高能量的超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)大壓力，可造成植物細(xì)胞壁及生物體破裂，導(dǎo)致胞內(nèi)物質(zhì)釋放、擴(kuò)散、溶解。實(shí)驗(yàn)室用小型超聲儀工業(yè)生產(chǎn)用超聲儀目前三十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

微波輔助技術(shù)是利用樣品中目標(biāo)物分子在微波電磁場(chǎng)的作用下，從原來(lái)的熱運(yùn)動(dòng)狀態(tài)轉(zhuǎn)為跟隨微波交變電磁場(chǎng)而快速排列取向，將微波能量轉(zhuǎn)化為樣品內(nèi)的能量，從而加速目標(biāo)物從固相進(jìn)入溶劑相的過(guò)程。微波促提原理：目前三十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

微波加熱機(jī)制：

極性分子作用機(jī)制:極性分子存在一定的偶極矩，當(dāng)它處于一定的靜電場(chǎng)中時(shí)，偶極分子就有呈方向性的趨勢(shì)，即帶正電的一端朝向負(fù)極，帶負(fù)電的一端朝向正極。當(dāng)電磁場(chǎng)方向變化時(shí)，偶極子的取向也隨之改變，分子發(fā)生擺動(dòng)。當(dāng)微波的頻率較高時(shí)，如2450MHz

，即1秒鐘內(nèi)電場(chǎng)變化2.45×109

次，極性分子也隨之發(fā)生

2.45×109次的擺動(dòng)。由于分子的熱運(yùn)動(dòng)和相鄰分子間的相互作用，阻礙和干擾分子隨電場(chǎng)的擺動(dòng)，產(chǎn)生類(lèi)似摩擦的作用，使分子獲得能量并以熱的形式表現(xiàn)出來(lái)。加熱機(jī)制目前三十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

微波具有穿透力強(qiáng)，加熱效率高，操作簡(jiǎn)便、快速、節(jié)能、高效等特點(diǎn)。缺點(diǎn)：化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)易發(fā)生變化，繼而導(dǎo)致生物活性的改變。

微波提取尤其要注意能量的控制，被提取物質(zhì)的穩(wěn)定性。

工業(yè)生產(chǎn)用微波提取罐目前三十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

（二）水蒸氣蒸餾法

適于具有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞的有效成分結(jié)構(gòu)的提取。如揮發(fā)油、小分子生物堿、酚類(lèi)、游離醌類(lèi)等。

水蒸氣蒸餾法是將水蒸氣通入不溶或難溶于水但有一定揮發(fā)性的有機(jī)物質(zhì)中，使該有機(jī)物在低于100℃的溫度下，隨著水蒸氣一起蒸餾出來(lái)。原理：道爾頓分壓定律目前四十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

水蒸氣蒸餾裝置常用的水蒸氣蒸餾裝置，包括水蒸氣發(fā)生器、蒸餾、冷凝和接受器四個(gè)部分。目前四十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)（三）升華法裝置圖適用范圍某些固體物質(zhì)（如水楊酸、苯甲酸、樟腦等）受熱后，在低于其熔點(diǎn)的溫度下，不經(jīng)過(guò)熔化就可以直接轉(zhuǎn)化為蒸汽，蒸汽遇冷又凝結(jié)為固體稱(chēng)為升華目前四十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

1、將茶葉與95%乙醇回流2h；2、濾出茶葉，濃縮提取液至適當(dāng)體積；3、濃縮液與生石灰粉混合，攪成漿狀，用蒸發(fā)皿在蒸汽浴上蒸干，除去水份；4、在蒸發(fā)皿上蓋一張刺孔向上的濾紙，再在濾紙上罩一個(gè)大小適合且頸部塞有棉花的漏斗；5、用酒精燈隔石棉網(wǎng)加熱，適當(dāng)控制溫度，白色咖啡因在濾紙上結(jié)晶。實(shí)驗(yàn)室提取咖啡因步驟：目前四十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)升華目前四十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)（四）超臨界流體萃取在臨界區(qū)附近，壓力和溫度的微小變化，會(huì)引起流體密度的大幅度變化，從而影響其溶解能力。

物質(zhì)在不同溫度和壓力的條件下，可以以不同的形態(tài)存在，如固體，液體，氣體，超臨界流體等。在超臨界流體中，不同的物質(zhì)有不同的溶解度，溶解度大的物質(zhì)溶解在超臨界流體中，與不溶解或者溶解度小的物質(zhì)分開(kāi)。然后，通過(guò)升高溫度，降低壓力或者吸附的方法，使萃取物與超臨界流體分離，而得到所需的物質(zhì)。原理目前四十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)超臨界狀態(tài)P-T相圖氣態(tài)=液態(tài)臨界點(diǎn):氣、液界面剛剛消失的狀態(tài)點(diǎn)(Pc、Tc)目前四十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)為什么超臨界流體是良好的萃取劑液體超臨界流體氣體超臨界流體的物理性質(zhì)和傳質(zhì)特性介于液體和氣體之間超臨界流體的溶解能力與液體的溶解能力接近；擴(kuò)散系數(shù)接近于氣體

液體氣體超臨界流體溶解能力擴(kuò)散系數(shù)優(yōu)良性能的萃取劑目前四十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)溶劑萃取超臨界萃取溶劑殘留不可避免完全無(wú)溶劑殘留，純凈存在重金屬無(wú)重金屬溶劑的溶解能力為定值溶解能力隨溫度和壓力變化可能使用高溫，熱敏物質(zhì)分解通常在較低溫度下，不分解存在無(wú)機(jī)鹽被萃取的問(wèn)題無(wú)無(wú)機(jī)鹽殘留溶劑選擇性差選擇性好需額外的操作單元來(lái)脫除溶解在線(xiàn)分離，有效物質(zhì)收率高溶劑萃取和超臨界萃取的對(duì)比目前四十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)最常用的是二氧化碳超臨界萃取法，環(huán)保、成本低、提取分離一步完成。分子的極性、沸點(diǎn)和分子量的大小與其在二氧化碳超臨界流體中的溶解性密切相關(guān)。（三）超臨界流體萃取法超臨界二氧化碳流體(SFE-CO2)臨界點(diǎn)(31.1℃)相當(dāng)接近室溫目前四十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)超臨界二氧化碳萃取二氧化碳在溫度高于臨界溫度Tc=31.26℃，壓力高于臨界壓力Pc=7.4MPa的狀態(tài)下，性質(zhì)會(huì)發(fā)生變化，其密度近于液體，粘度近于氣體，擴(kuò)散系數(shù)為液體的100倍，因而具有驚人的溶解能力。用它可溶解多種物質(zhì)，然后提取其中的有效成分，具有廣泛的應(yīng)用前景。超臨界二氧化碳是目前研究最廣泛的流體之一，因?yàn)樗哂幸韵聨讉€(gè)特點(diǎn)：(1)CO2臨界溫度為31.26℃，臨界壓力為7.4MPa，臨界條件容易達(dá)到.(2)CO2化學(xué)性質(zhì)不活潑，無(wú)色無(wú)味無(wú)毒，安全性好.(3)價(jià)格便宜，純度高，容易獲得.目前五十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

利用超臨界條件下流體的特殊性能對(duì)樣品進(jìn)行提取，是20世紀(jì)80年代迅速發(fā)展起來(lái)的一種提取方法。超臨界流體不但具有與液體接近的密度，有很強(qiáng)的穿透性，接近或超過(guò)溶劑的提取效率；而且具有與氣體相近的擴(kuò)散的性能，提取效率越高。常用的超臨界流體有CO2、乙烷、丙烷等。目前五十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

與普通有機(jī)溶劑提取法相比，超臨界CO2萃取技術(shù)具有無(wú)毒、常溫、不易燃、無(wú)污染等特點(diǎn)，可確保原有的色、香、味不因受熱破壞；更為可貴的是在萃取過(guò)程中可同時(shí)對(duì)萃取物進(jìn)行分離純化。該技術(shù)適宜于萃取高價(jià)值的油脂（包括天然功能性油脂）、精油、內(nèi)酯等極性較低的天然產(chǎn)物有效成分。

超臨界CO2提取的特點(diǎn)。目前五十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

CO2

鋼瓶

冷溫槽

高壓泵恒溫箱

控溫面板

接受瓶

流量計(jì)

CO2

原料

玻璃珠

脫脂棉

萃取柱

超臨界CO2

萃取實(shí)驗(yàn)裝置示意圖目前五十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

液體CO2由高壓泵加壓到萃取工藝要求的壓力并傳送到換熱器，將CO2流體加溫到萃取工藝所需溫度后進(jìn)入萃取器，在此完成萃取過(guò)程。負(fù)載溶質(zhì)的CO2流體在分離器中改變溫度壓力，溶解度降低使萃取物得以分離。分離萃取物后的CO2流體再經(jīng)換熱器液化后回到儲(chǔ)罐中循環(huán)使用。超臨界CO2提取操作流程目前五十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

20世紀(jì)50年代初進(jìn)入試驗(yàn)階段，如從石油中脫瀝青。

70、80年代SFE用于食品香料的提取。

90年代從植物藥中提取目標(biāo)成分，如從蛇床子、桑白皮、茵陳蒿中提取活性成分。目前五十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)大型超臨界流體萃取裝置

超臨界流體萃取技術(shù)的應(yīng)用目前五十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)第二節(jié)天然產(chǎn)物的分離一、經(jīng)典分離方法1.溶劑法6.分餾法5.升華法4.膜分離法3.沉淀法2.結(jié)晶法目前五十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)1.溶劑法包括（1）系統(tǒng)溶劑分離法（2）兩項(xiàng)溶劑萃取法目前五十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)（1）系統(tǒng)溶劑法原理依據(jù)“相似相溶”的原理，按極性由小到大的順序依次提取分離總提液中各種溶解度有差異的成分。

石油醚、己烷→揮發(fā)油、脂溶性色素、蠟

乙醚、氯仿→生物堿、苷元

乙酸乙酯→黃酮苷

正丁醇→皂苷、蒽醌苷

甲醇、乙醇→苷、糖類(lèi)、生物堿鹽目前五十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)適用范圍優(yōu)缺點(diǎn)此法是早年研究天然藥物有效成分的一種最重要的方法，主要用于分離提純含有極性不同的各種化學(xué)成分的中藥提取液。目前仍是最常用的方法，此法操作繁瑣，對(duì)化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，容易引起分解、異構(gòu)化的天然產(chǎn)物應(yīng)特別注意。在微量成分、結(jié)構(gòu)性質(zhì)相似成分的分離純化上受到很大限制。目前六十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)（2）兩項(xiàng)溶劑萃取法原理

利用混合物中各單體組分在兩相溶劑中的分配系數(shù)（K）不同而達(dá)到分離的方法。溶劑分配法的兩相往往是互相飽和的水相與有機(jī)相。混合物中各成分在兩相中分配系數(shù)相差越大，則分離效果越高。目前六十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)萃取的方法1）簡(jiǎn)單萃取法：實(shí)驗(yàn)室用分液漏斗，一般在水和親脂性有機(jī)溶劑中進(jìn)行，根據(jù)情況，可用酸水或堿水。中藥中成分比較復(fù)雜，2）pH度萃取法：以pH成梯度的酸（堿）水溶液依次萃取以親脂性有機(jī)溶劑溶解的堿（酸）性成梯度的混合生物堿(混合酚、酸類(lèi))，

使后者分離的方法。萃取分離不出來(lái)純品。一次3）連續(xù)萃取法：采用連續(xù)萃取器萃取。利用兩溶液比重不同自然分層和分散相液滴穿過(guò)連續(xù)相溶劑時(shí)發(fā)生傳質(zhì)。此法可克服分液漏斗多次萃取的麻煩。4）液滴逆流分配法（DCCC法）：是利用流動(dòng)相形成液滴，通過(guò)作為固定相的液柱而達(dá)到分離純化的目的。目前六十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

雙水相萃取法（一）、概述

早在1896年,學(xué)者發(fā)現(xiàn),當(dāng)明膠與瓊脂或明膠與可溶性淀粉溶液相混時(shí),得到一個(gè)混濁不透明的溶液，隨之分為兩相,上相富含明膠,下相富含瓊脂(或淀粉),這種現(xiàn)象被稱(chēng)為聚合物的不相溶性，從而產(chǎn)生了雙水相體系。雙水相體系的形成主要是由于高聚物之間的不相溶性，即高聚物分子的空間阻礙作用，相互無(wú)法滲透，不能形成均一相，從而具有分離傾向，在一定條件下即可分為二相。

目前六十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)利用親水性高分子聚合物的水溶液可形成雙水相的性質(zhì)，瑞典的Albertsson于20世紀(jì)50年代后期開(kāi)發(fā)了雙水相萃取法（aqueoustwo-phaseextraction），又稱(chēng)雙水相分配法。20世紀(jì)70年代,科學(xué)家又發(fā)展了雙水相萃取在生物分離過(guò)程中的應(yīng)用，為蛋白質(zhì)特別是胞內(nèi)蛋白質(zhì)的分離和純化開(kāi)辟了新的途徑。

雙水相萃取法概述目前六十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)（二）雙水相系統(tǒng)及特點(diǎn)1、什么是雙水相系統(tǒng)？聚合物的不相容（溶）性：把兩種或兩種以上具有一定濃度的親水性聚合物溶液混合后靜置，這些親水性的高分子聚合物并不混為一相，而是分成兩個(gè)液相，這種含有聚合物分子的溶液發(fā)生分相的現(xiàn)象稱(chēng)為聚合物的不相溶性。聚乙二醇(PEG)溶液葡聚糖(Dx)溶液目前六十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)利用雙水相的成相現(xiàn)象及待分離組分在兩相間分配系數(shù)差異，進(jìn)行組分分離或多水相提純技術(shù)。雙水相體系：分相的聚合物都是以水作為溶劑，稱(chēng)雙水相體系雙水相萃取技術(shù)：聚合物不相容性的原因：聚合物分子的空間阻礙作用，相互之間無(wú)法滲透而分離成多相目前六十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)聚乙二醇(PEG)/葡聚糖(Dx)；聚丙二醇/聚乙二醇；甲基纖維素(methylcellulose)/葡聚糖。雙水相萃取中常采用的雙聚合物系統(tǒng)為PEG/Dx，該雙水相的上相富含PEG，下相富含Dx。除雙聚合物系統(tǒng)外，聚合物與無(wú)機(jī)鹽的混合溶液也可形成雙水相，例如，PEG/磷酸鉀、PEG/磷酸銨、PEG/硫酸鈉等常用于生物產(chǎn)物的雙水相萃取。PEG/無(wú)機(jī)鹽系統(tǒng)的上相富含PEG，下相富含無(wú)機(jī)鹽。常見(jiàn)雙水相系統(tǒng)？目前六十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)2、雙水相萃取法的特點(diǎn)◆能夠保留產(chǎn)物的活性◆整個(gè)操作可以連續(xù)化◆與傳統(tǒng)的沉淀法相比，要優(yōu)越得多?！粢驯粡V泛地應(yīng)用在蛋白質(zhì)、核酸和病毒等產(chǎn)品的分離純化β-半乳糖苷酶的提取也到了中試規(guī)模等。目前六十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

影響待分離物質(zhì)在雙水相體系中分配行為的主要參數(shù)有成相聚合物的種類(lèi)、成相聚合物的分子質(zhì)量和總濃度、無(wú)機(jī)鹽的種類(lèi)和濃度、pH值、溫度等。

萃取原理目前六十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)雙水相萃取技術(shù)的應(yīng)用

雙水相萃取技術(shù)已廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化工和食品化工等領(lǐng)域，并取得了許多成功的范例，主要是分離蛋白質(zhì)，酶，病毒，脊髓病毒和線(xiàn)病毒的純化，核酸，DNA的分離，干擾素，細(xì)胞組織，抗生素，多糖，色素，抗體等。

此外雙水相還可用于稀有金屬／貴金屬分離，傳統(tǒng)的稀有金屬／貴金屬溶劑萃取方法存在著溶劑污染環(huán)境，對(duì)人體有害，運(yùn)行成本高，工藝復(fù)雜等缺點(diǎn)。雙水相技術(shù)萃取技術(shù)引入到該領(lǐng)域，無(wú)疑是金屬分離的一種新技術(shù)。

目前七十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)雙水相萃取技術(shù)的工藝流程主要由三部分構(gòu)成:目的產(chǎn)物的萃取;PEG的循環(huán);無(wú)機(jī)鹽的循環(huán)。雙水相萃取的工藝流程目前七十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)分離和提純各種蛋白質(zhì)(酶）

用聚乙二醇(PEG)/-(NH4)2SO4

雙水相體系,經(jīng)一次萃取從α-淀粉酶發(fā)酵液中分離提取α-淀粉酶和蛋白酶；萃取最適宜條件為PEG1000(15%)–(NH4)2SO4(20%),pH=8，α-淀粉酶收率為90%，分配系數(shù)為19.6，蛋白酶的分離系數(shù)高達(dá)15.1。比活率為原發(fā)酵液的1.5倍，蛋白酶在水相中的收率高于60%。雙水相的應(yīng)用舉例目前七十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)提取抗生素和分離生物粒子

采用PEG/Na2HPO4

體系提取丙酰螺旋霉素，最佳萃取條件是pH=8.0～8.5，PEG2000(14%)/Na2HPO4(18%),小試收率達(dá)69.2%,對(duì)照的乙酸丁酯萃取工藝的收率為53.4%雙水相的應(yīng)用舉例目前七十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)目前存在的問(wèn)題：雖然該技術(shù)在應(yīng)用方面已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展，但幾乎都是建立在實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，到目前為止還沒(méi)能完全清楚地從理論上解釋雙水相系統(tǒng)的形成機(jī)理以及生物分子在系統(tǒng)中的分配機(jī)理。

存在的問(wèn)題目前七十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)1、定義

反膠束或稱(chēng)逆膠束(Reversedmicelle)是指當(dāng)有機(jī)溶劑中加入表面活性劑并令其濃度超過(guò)某臨界值時(shí)，表面活性劑便會(huì)自發(fā)地在有機(jī)溶劑中形成一種穩(wěn)定的大小為納米級(jí)的聚集體。在反膠束中，表面活性劑的非極性基團(tuán)在外與非極性的有機(jī)溶劑接觸，而極性基團(tuán)則排列在內(nèi)形成一個(gè)極性核。此極性核具有溶解極性物質(zhì)的能力，極性核溶解水后，就形成了“水池”。反膠團(tuán)（膠束）萃取目前七十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)反膠團(tuán)（膠束）萃取目前七十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)反膠團(tuán)（膠束）萃取目前七十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)靜電引力：主要是蛋白質(zhì)的表面電荷與反膠束內(nèi)表面電荷（離子型表面活性劑）之間的靜電引力作用?？臻g位阻作用：增大反膠束極性核的尺寸，以減小大分子蛋白進(jìn)入膠核的傳質(zhì)阻力。凡是能夠引起靜電引力，能夠促使反膠束尺寸增大的因素均有利于提高分配系數(shù)。這些因素主要是pH、離子強(qiáng)度、表面活性劑種類(lèi)和濃度等，通過(guò)因素優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)選擇性地萃取和反萃取。2.反膠束萃取的原理：目前七十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)3.反膠束的溶解作用微水池溶解和分離作用： 反膠團(tuán)的微水池的水可溶解氨基酸、肽和蛋白質(zhì)等生物分子，為生物分子提供易于生存的親水微環(huán)境。因此，反膠團(tuán)萃取可用于氨基酸、肽和蛋白質(zhì)等生物分子的分離純化，特別是蛋白質(zhì)類(lèi)生物大分子。目前七十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)在反膠束內(nèi)部包含了水溶液，蛋白質(zhì)等生物分子萃取后進(jìn)入反膠團(tuán)內(nèi)部的“水池”中，避免了與有機(jī)溶劑直接接觸，反膠束內(nèi)的微環(huán)境與生物膜內(nèi)相似，故能很好保持其生物活性，解決了蛋白質(zhì)在有機(jī)溶劑中容易變性失活和難溶于有機(jī)溶劑的問(wèn)題，為蛋白質(zhì)的提取和分離開(kāi)辟了一條新的途徑。成本低，有機(jī)溶劑可反復(fù)使用；容易放大和實(shí)現(xiàn)連續(xù)操作反膠束萃取是一條具有工業(yè)發(fā)展前景的蛋白質(zhì)分離技術(shù)。反膠束法的優(yōu)點(diǎn)目前八十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)（1）溶液的pH

pH影響蛋白質(zhì)的電荷數(shù)量和電荷性質(zhì)（2）溶液的離子強(qiáng)度影響微膠團(tuán)的靜電狀態(tài).凡是對(duì)蛋白質(zhì)所含電荷有影響的因素，如pH，以及對(duì)反膠束的靜電狀態(tài)有影響的因素，均能改變蛋白質(zhì)的增溶作用。（3）表面活性劑的濃度和種類(lèi)（4）其他（有機(jī)溶劑、助表面活性劑、溫度）3、影響反膠團(tuán)萃取的因素目前八十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)4.膠束萃取的操作A 萃取的基本方法B 反萃取.

C分級(jí)萃取AOT=二-(2-已基)琥珀酸酯磺酸鈉。目前八十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)5、應(yīng)用舉例純化和分離蛋白質(zhì)如對(duì)于溶菌酶和肌紅蛋白的混合溶液(兩種蛋白質(zhì)相對(duì)分子量相近,等電點(diǎn)分別為11.1和6.8），用二烷基磷酸鹽/異辛烷反膠束溶液萃取，并用緩沖液將混合液的pH值調(diào)至9.0，則溶菌酶完全進(jìn)入有機(jī)相中,而肌紅蛋白則留在水相.目前八十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)提取或分離物

溶液

結(jié)晶

2.結(jié)晶法粗結(jié)晶溶于選擇的溶劑，加熱成飽和溶液，過(guò)濾放置（冷藏）析晶，過(guò)濾重復(fù)上述操作（重結(jié)晶）目前八十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)3.沉淀法

酸性或堿性化合物通過(guò)加入某種沉淀試劑使之生成水不溶性的鹽類(lèi)等沉淀析出而實(shí)現(xiàn)分離。如生物堿加入有機(jī)酸可生成不溶于水的有機(jī)酸鹽沉淀，酸性化合物可加入鈣鹽、鉛鹽、鋇鹽等生成不溶性的沉淀。

目前八十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

水醇沉淀法鉛鹽沉淀法1）水提取醇沉淀法，于水提濃縮液中加入乙醇使含醇量達(dá)60%以上，可使多糖、蛋白質(zhì)沉淀。2）醇提取水沉淀法，于醇提取濃縮液中加入10倍量以上水，可沉淀親脂性成分。

利用中性醋酸鉛或堿式醋酸鉛在水或稀醇溶液中能與許多物質(zhì)生成難溶的鉛鹽或絡(luò)鹽沉淀而分離的方法。目前八十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)酸堿沉淀法專(zhuān)屬試劑沉淀法1）酸提取堿沉淀：用于生物堿的提取分離。2）堿提取酸沉淀：用于酚、酸類(lèi)成分和內(nèi)酯類(lèi)成分的提取、分離。某些試劑能選擇性地沉淀某類(lèi)成分，稱(chēng)為專(zhuān)屬試劑沉淀法。目前八十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

（四）透析法利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過(guò)半透膜，大分子則不能通過(guò)半透膜的性質(zhì)進(jìn)行分離的方法。如分離純化皂甙、蛋白質(zhì)、多肽、多糖等大分子時(shí)，用此法可除無(wú)機(jī)鹽、單、雙糖等小分子雜質(zhì)。透析膜的膜孔有大有小，視具體情況而選擇，常用透析膜：動(dòng)物性膜、火棉膠膜、硫酸紙膜、玻璃紙膜等。目前八十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

借助機(jī)械外力的作用，將油脂從榨料中擠壓出來(lái)的過(guò)程。在壓榨過(guò)程中，主要發(fā)生的是物理變化，如物料變形、油脂分離、摩擦發(fā)熱、水分蒸發(fā)等。但由于溫度、水分、微生物等的影響，同時(shí)也會(huì)產(chǎn)生某些生物化學(xué)方面的變化，如蛋白質(zhì)變性、酶的鈍化和破壞、某些物質(zhì)的結(jié)合等。壓榨時(shí)，榨料粒子在壓力作用下內(nèi)外表面相互擠緊，致使其液體部分和凝膠部分分別產(chǎn)生兩個(gè)不同過(guò)程，即油脂從榨料空隙中被擠壓出來(lái)及榨料粒子變形形成堅(jiān)硬的油餅。（五）壓榨法目前八十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)石油醚(流動(dòng)相)碳酸鈣(固定相)色譜帶最早的色譜實(shí)驗(yàn)二、色譜分離法目前九十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)柱色譜薄層色譜目前九十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)原理：利用混合物中各成分在固定相和移動(dòng)相中吸附、分配及其親和力的差異而達(dá)到分離。色譜定義：是一種物理化學(xué)分離分析技術(shù)，它利用混合物中各組分在固定相和流動(dòng)相間的分配系數(shù)的差異，讓各組分在兩相間進(jìn)行多次分配產(chǎn)生明顯遷移速差而得以分離。又稱(chēng)之為色譜分離法、層析法目前九十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)按移動(dòng)相分氣相色譜液相色譜按色譜原理分吸附色譜分配色譜離子交換色譜凝膠色譜按操作方法分柱色譜紙色譜薄層色譜色譜的分類(lèi)目前九十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)薄層色譜法——定義分類(lèi)吸附薄層色譜分配薄層色譜在平面載板上均勻涂布適宜的固定相形成一薄層，將欲分離的試樣于薄層板上點(diǎn)樣，隨著移動(dòng)相溶劑的移動(dòng)展開(kāi)，混合物中各成分獲得分離的方法。

目前九十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)常用的吸附劑——硅膠應(yīng)用最為廣泛!粒徑：200-300目種類(lèi)：硅膠G——硅膠+粘合劑煅石膏硅膠GF254——含有熒光物質(zhì)硅膠H——不含粘合劑煅石膏硅膠HF254——含有熒光物質(zhì)目前九十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)常用的吸附劑——其它氧化鋁：堿性、中性、酸性三種規(guī)格。聚酰胺：“氫鍵吸附”，對(duì)羥基類(lèi)成分有很好的分離效果。附子中烏頭堿的限量檢查，就是采用堿性氧化鋁制備的薄層板目前九十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)薄層色譜法——展開(kāi)劑的選擇待測(cè)組分的Rf值宜控制在之間各組分斑點(diǎn)圓且集中混合溶劑臨用前新鮮配制要根據(jù)被分離物質(zhì)的溶解性、酸堿性、極性等性質(zhì)，結(jié)合吸附劑的吸附性能，綜合考慮，可選擇單一溶劑或混合溶劑系統(tǒng)。若分離某些酸性或堿性成分，可在所選溶劑中加入少量的酸或堿或?qū)⒁恍”瓝]發(fā)性酸或堿放置色譜缸內(nèi)。目前九十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)操作技術(shù)——手工鋪板

取一份吸附劑和三份水（或另加黏合劑），在研缽中向一個(gè)方向研磨混合成均勻糊狀（無(wú)氣泡和結(jié)塊），均勻涂布在薄層板上。玻璃板層析專(zhuān)用玻璃板，清洗干凈用量10×20CM，3g硅膠黏合劑0.2～0.5%CMC-NA溶液，0.3%干燥水平臺(tái)面，室溫下自然完全晾干檢查表面光滑平整，均勻，無(wú)雜質(zhì)操作要點(diǎn)目前九十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)CMC-Na溶液的配制濃度0.2～0.5%，一般用的濃度是0.3%。濃度過(guò)稀，使用的時(shí)候薄層易掉粉濃度過(guò)大，用硫酸顯色加熱易變黑使用上清液取蒸餾水1000ml，在加熱并不斷攪拌的條件下，緩慢加入羧甲基纖維素鈉0.3g，至完全溶解。靜置冷卻，臨用前取上清液備用。目前九十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)裂開(kāi)的薄層板不能使用!

操作技術(shù)—活化涂布后的薄層先在室溫下陰干，至完全干透后，在使用前置適當(dāng)溫度烘烤一定時(shí)間進(jìn)行活化，然后置干燥器中備用。不同薄層活化條件略有不同。硅膠105℃-110℃30～60min氧化鋁105℃-110℃30min目前一百頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)操作技術(shù)——點(diǎn)樣定量微升毛細(xì)管薄層點(diǎn)樣毛細(xì)管溶液沸點(diǎn)適中，對(duì)成分溶解度好（甲醇、乙醇、氯仿、醋酸乙酯等）。斑點(diǎn)不宜過(guò)大,以小于3mm為宜，采用多次點(diǎn)加法。點(diǎn)樣量應(yīng)適中。毛細(xì)點(diǎn)樣管或定量毛細(xì)點(diǎn)樣管盡可能往薄層板中間點(diǎn)。目前一百零一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)操作技術(shù)——展開(kāi)預(yù)先用展開(kāi)劑將密閉的色譜缸飽和片刻，然后將點(diǎn)樣后的薄層板置缸內(nèi)支架上，勿與展開(kāi)劑接觸，預(yù)飽和一定時(shí)間，使缸內(nèi)飽和的展開(kāi)劑氣體達(dá)到平衡。飽和后，將薄層板點(diǎn)有試樣一端浸入展開(kāi)劑約0.5cm深處（不能浸泡點(diǎn)樣斑點(diǎn)），開(kāi)始展開(kāi)，隨著展開(kāi)劑的上升，試樣中不同成分因遷移速度不同而得到分離。待展開(kāi)劑上行遷移到規(guī)定高度即取出烘干目前一百零二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)操作技術(shù)——顯色觀察方法：日光、熒光、顯色通?？上仍谌展庀掠^察，標(biāo)出色斑并確定其位置，然后在紫外光下觀察和標(biāo)記，必要時(shí)再選擇顯色劑顯色觀察若薄層板為硬板，采用噴霧法將顯色劑直接噴灑；軟板可選用碘蒸氣法、壓板法顯色噴霧瓶三用紫外燈目前一百零三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)操作技術(shù)——計(jì)算比移值Rf值越大，化合物的極性？目前一百零四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)紙色譜法——定義與原理分配色譜定義：以濾紙為支持劑，濾紙上吸著的水（或根據(jù)實(shí)際分離的需要，經(jīng)適當(dāng)處理后濾紙上吸附的溶液）為固定相，用一定的溶劑系統(tǒng)為移動(dòng)相進(jìn)行展開(kāi)，利用混合物中各成分分配系數(shù)的差異而達(dá)到分離的一種分配色譜法。目前一百零五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)紙色譜法——實(shí)驗(yàn)所需器材薄層點(diǎn)樣毛細(xì)管主要用于親水性化合物的分離如氨基酸、苷類(lèi)、糖類(lèi)、有機(jī)酸目前一百零六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)分類(lèi)吸附柱色譜凝膠過(guò)濾色譜分配柱色譜離子交換柱色譜

上樣量大，常用于制備分離，是分離天然化學(xué)成分最常用的方法。柱色譜是一種將分離材料裝入柱狀容器中,以適當(dāng)?shù)南疵搫┻M(jìn)行洗脫而使不同成分得到分離的色譜方法。柱色譜-定義目前一百零七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)目前一百零八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)目前一百零九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)目前一百一十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)目前一百一十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)吸附柱色譜法—基本原理吸附作用化學(xué)吸附:堿性氧化鋁與黃酮發(fā)生的吸附半化學(xué)吸附:氫鍵吸附，過(guò)程可逆物理吸附：相似者易于吸附

吸附色譜最主要的吸附力

利用作為固定相的吸附劑對(duì)混合物中各種成分吸附能力的大小不同，使各種成分得到相互分離的方法。目前一百一十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)物理吸附化學(xué)吸附半化學(xué)吸附溶液分子與吸附劑表面分子的分子間作用力。硅膠、氧化鋁及活性炭為吸附劑的吸附色譜如聚酰胺與黃酮類(lèi)、蒽醌類(lèi)等化合物之間的氫鍵吸附。介于物理吸附與化學(xué)吸附之間

如黃酮等酚酸性物質(zhì)被堿性氧化鋁吸附，生物堿被酸性硅膠吸附等。目前一百一十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)物理吸附基本規(guī)律→相似者易吸附

固液吸附三要素：吸附劑、溶質(zhì)、溶劑

極性吸附劑非極性吸附劑對(duì)非極性物質(zhì)親和能力強(qiáng)，溶劑極性降低，則活性炭對(duì)溶質(zhì)的吸附能力也隨之降低；反之，則提高。a.對(duì)極性強(qiáng)的物質(zhì)吸附能力強(qiáng)b.溶劑極性減弱，則吸附劑對(duì)溶質(zhì)的吸附能力增強(qiáng)；反之，則減弱。c.溶質(zhì)即使被硅膠、氧化鋁吸附，一旦加入極性較強(qiáng)的溶劑時(shí)，又可被置換洗脫下來(lái)。

常用于分離水溶性成分如氨基酸、糖類(lèi)及某些苷類(lèi)！目前一百一十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)聚酰胺柱色譜洗脫劑聚酰胺操作步驟：裝柱上樣洗脫目前一百一十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)常用的吸附劑——聚酰胺聚酰胺是通過(guò)酰胺基聚合而成的一類(lèi)高分子化合物，分子中含有豐富酰胺基，可與酚類(lèi)、酸類(lèi)、醌類(lèi)、硝基化合物等形成氫鍵結(jié)合而被吸附，根據(jù)吸附力的大小不同，使能形成氫鍵與不能形成氫鍵的化合物達(dá)到分離。氫鍵吸附目前一百一十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)聚酰胺吸附能力強(qiáng)弱的判斷溶劑的種類(lèi)水、有機(jī)溶劑、堿溶液化合物分子結(jié)構(gòu)分子中能形成氫鍵的基團(tuán)越多，吸附越強(qiáng)成鍵基團(tuán)位置不同，被吸附的強(qiáng)弱也不同共軛雙鍵越多，吸附越強(qiáng)能形成分子內(nèi)氫鍵者被吸附強(qiáng)度減弱目前一百一十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)化合物結(jié)構(gòu)對(duì)聚酰胺吸附作用的影響形成氫鍵的數(shù)目成鍵基團(tuán)位置雙鍵的數(shù)目分子內(nèi)氫鍵目前一百一十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)吸附柱色譜——流動(dòng)相極性吸附劑溶劑極性越大，洗脫能力越強(qiáng)

非極性吸附劑水、l0%乙醇、20%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇

聚酰胺水、乙醇（30%、50%、75%、95%）、丙酮、稀氨水液或稀氫氧化鈉水液、甲酰胺或二甲基甲酰胺、尿素水溶液目前一百一十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)吸附柱色譜——被分離物質(zhì)在吸附劑與洗脫劑固定的情況下，各組分分離的情況直接與化合物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)。硅膠和氧化鋁（極性吸附劑），極性越大，被吸附就越強(qiáng)！目前一百二十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

柱層析吸附劑一般是100-200目試樣與吸附劑用量比約為1:60

可分為濕法裝柱和干法裝柱吸附柱色譜——裝柱要求柱中吸附劑充填均勻，柱體內(nèi)不得出現(xiàn)氣泡、疏密不勻或者裂縫！目前一百二十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)濕法上樣：洗脫劑溶解試樣制成高濃度溶液干法上樣：試樣層盡量窄且平整吸附柱色譜——上樣吸附柱色譜——洗脫

參照薄層色譜確定色譜條件：Rf約為0.2

梯度洗脫注意保持液面高度，勿使柱面洗脫液流干化合物無(wú)色，等份收集+薄層鑒別目前一百二十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)分配色譜法分配色譜法基本原理(分配系數(shù)不同)正相分配色譜反相分配色譜正相色譜極性物質(zhì)吸附強(qiáng)非極性物質(zhì)吸附弱后出先出反相色譜極性物質(zhì)吸附弱非極性物質(zhì)吸附強(qiáng)先出后出目前一百二十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)分配柱色譜法—基本原理

反向分配色譜正向分配色譜

支持劑：硅膠，溶劑系統(tǒng)：水飽和的正丁醇，水為固定相，正丁醇為移動(dòng)相。反相硅膠：在硅膠表面鍵合長(zhǎng)度不同的烷基R，形成親油表面而成。烷基長(zhǎng)度為乙基、辛基、十八烷基。溶劑：H2O-MeOH、H2O-CH3CN目前一百二十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)離子交換色譜法—定義、分類(lèi)

是一種利用離子交換樹(shù)脂上的功能基能在水溶液中與溶液的其他離子進(jìn)行可逆交換的性質(zhì)，以離子交換樹(shù)脂作為固定相，使混合成分中離子型與非離子型物質(zhì)、或具有不同解離度的離子化合物得到分離的方法。

陽(yáng)離子交換樹(shù)脂：被分離物質(zhì)帶正電荷陰離子交換樹(shù)脂：被分離物質(zhì)帶負(fù)電荷分類(lèi)目前一百二十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)目前一百二十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)目前一百二十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)氨基酸的離子交換分離原理目前一百二十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)離子交換柱色譜——操作技術(shù)樹(shù)脂的預(yù)處理裝柱上樣洗脫再生目前一百二十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)定義

以凝膠作為固定相，選擇適當(dāng)?shù)娜軇┻M(jìn)行洗脫，使混合物分子中分子量大小不同的化合物得到分離的方法分離原理

葡聚糖凝膠是由葡聚糖和甘油基通過(guò)醚橋相交鏈而成的多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。凝膠吸水后形成凝膠粒子，凝膠粒子構(gòu)成網(wǎng)眼，小分子進(jìn)入，大分子流下。如同按照分子大小過(guò)篩一樣，故稱(chēng)為“篩層析”。

凝膠層析目前一百三十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

凝膠是一種不帶電的具有三維空間的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，每個(gè)顆粒的細(xì)微結(jié)構(gòu)及篩孔的直徑均勻一致，小分子可以進(jìn)入凝膠網(wǎng)孔，而大分子則排阻于顆粒之外。目前一百三十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

凝膠層析又稱(chēng)分子篩過(guò)濾、排阻層析等，依據(jù)是多孔的載體對(duì)不同體積和不同形狀分子的排阻能力的不同，從而對(duì)混合物進(jìn)行分離。目前一百三十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)凝膠層析目前一百三十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)目前一百三十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

表面有孔隙，其大小決定于聚糖與交聯(lián)劑的配比及反應(yīng)條件。商品型號(hào)即按凝膠的交聯(lián)度大小分類(lèi)，并以吸水量來(lái)表示，英文字母G代表葡聚糖凝膠，后面的數(shù)字表示每克凝膠吸水量，再乘以10的值，G-25的吸水量為每克2.5ml。交聯(lián)度大→網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越緊密→孔隙越小→吸水膨脹越少。目前一百三十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)大分子化合物阻力較小，流速較快小分子化合物阻力較大，流速較慢凝膠色譜原理示意圖目前一百三十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

此法常用的凝膠有葡聚糖凝膠（SephadexG-25）和羥丙基葡聚糖凝膠(SephadexLH-20)。前者只適用于在水中應(yīng)用，而后者不但可在水中用，也可在有機(jī)溶劑中用或在水與有機(jī)溶劑的混合溶劑中使用。

G型凝膠：水或含水醇上樣、洗脫——分離水溶性大分子化合物。

SephadexLH-20凝膠（引入羥丙基）：可用有機(jī)溶劑——極性大、極性小化合物均可分離。凝膠層析目前一百三十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)凝膠柱層析的動(dòng)態(tài)過(guò)程目前一百三十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)大孔吸附樹(shù)脂層析法大孔樹(shù)脂的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，巨大的比表面積使其具有良好的吸附性能的白色的顆粒狀物質(zhì)。吸附原理大孔吸附樹(shù)脂通過(guò)物理吸附（范德華引力或氫鍵）和分子篩作用（多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)）而實(shí)現(xiàn)分離；

極性較大的化合物一般適用于中極性的樹(shù)脂上分離。極性較小的化合物一般適用于非極性的樹(shù)脂上分離。目前一百三十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)洗脫液的選擇

洗脫劑選擇基本要求依據(jù)“相似相溶”原理?？蛇x用水、不同濃度的MeOH、EtOH、Me2CO。非極性大孔樹(shù)脂——洗脫劑極性越小，洗脫能力越強(qiáng)。

中極性大孔樹(shù)脂——用極性較大有機(jī)溶劑洗脫。目前一百四十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)大孔樹(shù)脂預(yù)處理與再生預(yù)處理：MeOH或Me2CO浸泡過(guò)夜，裝柱后連續(xù)洗滌至流出液加等量水無(wú)渾濁。再生：乙醇浸泡24小時(shí)，用乙醇洗滌，至醇液中加水不呈白色混濁止。用2%NaOH浸泡、洗滌，水洗至中性，再用5%HCl浸泡、洗滌，然后水洗至中性。另外，其存放時(shí)，應(yīng)保持顆粒濕潤(rùn)，否則一旦顆粒干了則顆粒易碎，此時(shí)則大孔樹(shù)脂不能使用了。目前一百四十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)大孔吸附樹(shù)脂柱的洗脫洗脫柱得3瓶洗脫液20％30％95％硅膠柱目前一百四十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)氣相色譜法

氣相色譜與液相色譜相似，只是以氣體作流動(dòng)相，它的分離機(jī)理是基于物質(zhì)在流動(dòng)氣相和固定相（可為固體和液體）兩相間分配的不同而達(dá)到分離的方法。農(nóng)藥殘留等的檢測(cè)目前一百四十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)載氣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)色譜柱檢測(cè)系統(tǒng)溫控系統(tǒng)目前一百四十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)高效液相色譜法

高效液相色譜的原理與一般液相色譜十分相似，樣品的分離取決于其在流動(dòng)相和固定相中的分配。

特點(diǎn)是使用高壓輸液泵進(jìn)行洗脫，并配備有紫外等檢測(cè)系統(tǒng)，使分離達(dá)到高速化和高效化。目前一百四十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)Thankyou!目前一百四十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

第三節(jié)天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)鑒定鑒定天然產(chǎn)物所需做的工作1、元素分析由哪些元素組成，各占多少。2、物理常數(shù)熔、沸點(diǎn)3、比旋光度4、分子量、凝膠過(guò)濾法、光散射法、粘度測(cè)定法、MS等方法5、結(jié)構(gòu)測(cè)定法：紅外光譜、核磁共振（13C譜、1H譜和二維譜）目前一百四十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)結(jié)構(gòu)測(cè)定的一般程序純度鑒定推測(cè)母體結(jié)構(gòu)類(lèi)型功能基情況分子量分子式的確定波譜、化學(xué)方法推測(cè)出結(jié)構(gòu)式人工合成進(jìn)行確認(rèn)結(jié)構(gòu)測(cè)定目前一百四十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

一、化學(xué)方法二、儀器方法波長(zhǎng)在200~400nm分子吸收紫外線(xiàn)引起分子價(jià)鍵電子躍遷，由于價(jià)電子躍遷的能級(jí)固不同的而各異。1、紫外光譜①飽和σ鍵σ→σ*躍遷，不出現(xiàn)吸收帶。②共軛雙鍵π

→π

*和n→π*躍遷。紫外主要用于是否含有共軛體系的鑒定，如苯在256nm出現(xiàn)B帶。目前一百四十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

OH3600cm-1左右，因締合，峰較寬；C=O1700cm-1附近，隨所連基團(tuán)的供電子強(qiáng)弱而向上或向下移動(dòng)。2、紅外光譜測(cè)定分子中存在的官能團(tuán)種類(lèi)。目前一百五十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

3、質(zhì)譜確定分子量4、氫核磁共振譜確定氫的個(gè)數(shù)及相互關(guān)系5、旋光光譜具有旋光性的天然產(chǎn)物，測(cè)定其構(gòu)型和構(gòu)象6、元素分析測(cè)定C、H、N、S元素含量。7、核磁共振譜確定分子骨架。目前一百五十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

酚UV280nm，IR1500~1600、3300cm-1，溶于NaOH黃酮

黃色或淡黃結(jié)晶，UV240~285nm及300~400nm各一峰，IR在1500~1700cm-1有吸收。皂甙1H譜在高場(chǎng)有山峰形及幾個(gè)甲基尖峰信號(hào)。香豆素UV240~260nm，IR1500~1600cm-1，有芳環(huán)吸收；320nm吡喃酮環(huán)結(jié)構(gòu)，1700cm-1附近有不飽和內(nèi)酯吸收峰；1H譜主要為芳香質(zhì)子信號(hào)。目前一百五十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

三、中藥指紋圖譜質(zhì)量控制借助計(jì)算機(jī)、信息及先進(jìn)的物理、化學(xué)技術(shù)，將中藥的特性和有效成分，采用圖譜的形式描繪出來(lái)，從而鑒定真?zhèn)?、辨認(rèn)優(yōu)劣、確定其質(zhì)量和有效性。紅外光譜指紋圖譜高效液相色譜-質(zhì)譜指紋圖譜氣相色譜-質(zhì)譜指紋圖譜質(zhì)譜指紋圖譜

紫外光譜指紋圖譜X-射線(xiàn)衍射指紋圖譜包括：目前一百五十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

柚肉汁提取成分的高效液相色譜指紋圖譜目前一百五十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

植物藥是多種化學(xué)成分的混合體，其藥效不是單一的組份能說(shuō)明的，是多種活性組份共同起作用的，因此單一活性組份的測(cè)定和評(píng)價(jià)不能說(shuō)明中藥質(zhì)量的好壞，而且目前很多檢測(cè)的指標(biāo)成分不具唯一性，將西藥檢測(cè)的理念完全應(yīng)用于中藥存在以偏蓋全，割離整體作用的問(wèn)題。植物藥材的質(zhì)量隨產(chǎn)地、氣候、生產(chǎn)工藝而不同，建立一種代表性的整體性識(shí)別方式，將各種共同的特征用一個(gè)圖譜表現(xiàn)出來(lái)受到重視。目前一百五十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)

指紋圖譜是在某一方面從整體上來(lái)確定特定研究對(duì)象（如中藥材，提取物，飲片，注射液等）組成的一種方法，是一種模糊識(shí)辨方式。比較適合于中藥這種復(fù)雜體系的表征。但其也有局限性：1、圖譜反映的內(nèi)容不夠全面。2、圖譜與具體的成分結(jié)構(gòu)還有一定的差距。應(yīng)用某種實(shí)用的方法，找出代表性相對(duì)更強(qiáng)的圖譜進(jìn)行表征是指紋圖譜研究的重點(diǎn)。目前一百五十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)第四節(jié)結(jié)構(gòu)研究法一、純度的測(cè)定二、結(jié)構(gòu)研究的主要程序三、結(jié)構(gòu)研究中采用的主要方法目前一百五十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)一、純度的測(cè)定純度檢查法：均一的晶形敏銳的熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、折光率、比旋度TLC、PC、GC、HPLC目前一百五十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)二、結(jié)構(gòu)研究的主要程序目前一百五十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)三、結(jié)構(gòu)研究中采用的主要方法1.確定分子式，計(jì)算不飽和度2.質(zhì)譜（MS，massspectrum）3.紅外光譜（IR，infraredspectra）4.紫外-可見(jiàn)吸收光譜（UV-vis)(ultraviolet-visiblespectra）5.核磁共振（NMR，nuclearmagneticresonance）6.其他：

x-單晶衍射法旋光光譜（ORD）園二色譜（CD）目前一百六十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)三、結(jié)構(gòu)研究中采用的主要方法

——1.確定分子式，計(jì)算不飽和度分子式的確定元素定量分析結(jié)合分子量測(cè)定同位素豐度比法高分辨質(zhì)譜（HR-MS，highresolutionmassspectrum）

不飽和度的計(jì)算u=Ⅳ－Ⅰ/2＋Ⅲ/2＋1Ⅰ：一價(jià)原子數(shù)如H、XⅢ：三價(jià)原子數(shù)，如N、PⅣ：四價(jià)原子數(shù)，如C目前一百六十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)三、結(jié)構(gòu)研究中采用的主要方法

——2.質(zhì)譜（MS，massspectrum）作用：確定分子量、分子式提供部分結(jié)構(gòu)信息

——丟失碎片的大小如15、17

——碎片的m/z及裂解方式目前一百六十二頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)三、結(jié)構(gòu)研究中采用的主要方法

——2.質(zhì)譜（MS，massspectrum）常用質(zhì)譜技術(shù)及特點(diǎn)電子轟擊質(zhì)譜（EI-MS，electronimpactionization）場(chǎng)解析質(zhì)譜（FD-MS，fielddesorptionionization）快速原子轟擊質(zhì)譜（FAB-MS，fastatombombardment）電噴霧質(zhì)譜（ESI-MS，electrosprayionization）基質(zhì)輔助激光解析質(zhì)譜（MALDI-MS）

matrix-assistedlaserdesorptionionization

目前一百六十三頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)常用質(zhì)譜技術(shù)及特點(diǎn)——電子轟擊質(zhì)譜（EI-MS）（electronimpactionization）樣品需加熱氣化，離化，得到M+難氣化、易熱解的成份測(cè)不到M+

如糖、苷、氨基酸、肽、蛋白、核酸、抗生素目前一百六十四頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)常用質(zhì)譜技術(shù)及特點(diǎn)——場(chǎng)解析質(zhì)譜（FD-MS）

試樣稀液涂于鎢絲上作陽(yáng)極，對(duì)面加陰極，通高壓，使電離難氣化、易熱解的成份，可得到分子離子相關(guān)峰：[M＋H]+、[M＋Na]+、[M＋K]+

逐個(gè)脫去糖基的碎片峰：[M＋H-162]+、[M＋H-162-146]+苷元的碎片離子相對(duì)少目前一百六十五頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)常用質(zhì)譜技術(shù)及特點(diǎn)——

快速原子轟擊質(zhì)譜（FAB-MS）

離子槍發(fā)射高能離子與另一中性粒子碰撞，交換電荷，

形成高速中性粒子，與樣品碰撞，使其電離難氣化、易熱解的成份，可得到分子離子相關(guān)峰：[M＋H]+、[M＋Na]+、[M＋K]+

逐個(gè)脫去糖基的碎片峰：[M＋H-162]+、[M＋H-162-146]+

可得到苷元的碎片目前一百六十六頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)常用質(zhì)譜技術(shù)及特點(diǎn)——

電噴霧質(zhì)譜（ESI-MS）

強(qiáng)靜電場(chǎng)使試樣電離，難氣化、易熱解、大分子、小分子，均可得到分子離子相關(guān)峰：[M＋H]+、[M＋Na]+、[M＋K]+

目前一百六十七頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)常用質(zhì)譜技術(shù)及特點(diǎn)——

基質(zhì)輔助激光解析質(zhì)譜（MALDI-MS）

用于研究結(jié)構(gòu)復(fù)雜，不易氣化的大分子物質(zhì)的分子量如多糖、蛋白、核酸等目前一百六十八頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)三、結(jié)構(gòu)研究中采用的主要方法

——3.紅外光譜（IR）原理：化學(xué)鍵的振動(dòng)在紅外光區(qū)（4000～625cm-1）引起的吸收譜圖作用：特征頻率區(qū)（4000～1500cm-1）

——

確定官能團(tuán)類(lèi)型指紋區(qū)（1500～600cm-1）

——

構(gòu)象、構(gòu)型、取代模式等目前一百六十九頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)三、結(jié)構(gòu)研究中采用的主要方法

——4.紫外-可見(jiàn)吸收光譜（UV-vis)

原理電子由基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)（、n）在紫外可見(jiàn)光區(qū)（200～700nm）引起的吸收譜圖作用對(duì)含有共軛雙鍵、α,β-不飽和羰基、芳香化合物的結(jié)構(gòu)鑒定有重要價(jià)值特定的吸收譜特征——骨架類(lèi)型的判斷如：黃酮、香豆素、蒽醌加診斷試劑前后譜圖的規(guī)律性變化——取代圖式的推斷如：黃酮、香豆素目前一百七十頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\編于七點(diǎn)三、結(jié)構(gòu)研究中采用的主要方法

——5.核磁共振（NMR）

原理：

1H、13C等具有磁矩的原子在外加磁場(chǎng)中受電磁波照射，吸收一定能量電磁波，產(chǎn)生能級(jí)變化，引起核磁共振氫核磁共振（1H-NMR）碳核磁共振譜（13C-NMR）二維核磁共振譜（2D-NMR）目前一百七十一頁(yè)\總數(shù)一百八十五頁(yè)\