常用幾種蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)的概述及比較

常用幾種蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)的概述及比較摘要：著重概述了色譜檢測(cè)法、酶抑制檢測(cè)法、化學(xué)試劑速測(cè)法、酶聯(lián)免疫法等四種常用的蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)的原理、檢測(cè)方法等，并將幾種檢測(cè)方法進(jìn)行了比較。前言目前蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法有色譜法和速測(cè)法兩大類(lèi)。色譜法是農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留定量、定性精確檢測(cè)的方法，一般能檢測(cè)到痕量級(jí)(10-9-10-12)，用于農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的仲裁和鑒定；速測(cè)法主要用于農(nóng)藥殘留的定性分析，一般能檢測(cè)到2-5ppm即10-6，可防止農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)殘過(guò)高引起急性中毒事故的發(fā)生。每種檢測(cè)方法都各有優(yōu)缺點(diǎn)。1色普法1.1測(cè)項(xiàng)目與有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求色譜檢測(cè)法根據(jù)不同檢測(cè)類(lèi)別、檢測(cè)項(xiàng)數(shù)、參照標(biāo)準(zhǔn)各不相同。具體如下表：檢測(cè)類(lèi)別檢測(cè)項(xiàng)數(shù): 不得檢出項(xiàng)檢測(cè)范圍參照標(biāo)準(zhǔn)馬拉硫磷對(duì)硫磷甲拌磷甲胺磷久效磷氧化樂(lè)果克百威涕滅威W0.05-20.0mg/kgGB18406.1-2001無(wú)公害蔬菜41無(wú)公害水果 22拉硫磷對(duì)硫磷甲拌磷甲胺磷久效磷氧化樂(lè)果克百威甲基對(duì)硫磷<0.02-2.0mg/kgGB18406.1-2001無(wú)公害糧食 8無(wú)公害食用菌2殺蟲(chóng)瞇、、、W0.02-0.5mg/kgDB32T/343.2-1999DB32T/343.2-1999六八八滴滴涕八八八W0.1mg/kg（鮮）八八八W0.2mg/kg（干）滴滴涕＜0.1mg/kg無(wú)公害植物油5敵敵畏甲拌磷甲胺磷氧化樂(lè)果涕滅威均不得檢出DB32T/343.2-19991.2主要儀器1.2.1氣相色譜儀色譜法是一種分離技術(shù)，原理是將混合物各組分在經(jīng)過(guò)一個(gè)固定相和流動(dòng)相兩相組系時(shí)，由于各組分在性質(zhì)上的差異，在兩項(xiàng)中具有不同的分配系數(shù)；當(dāng)兩項(xiàng)做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，各組分隨流動(dòng)相一起流動(dòng)，并在兩項(xiàng)中進(jìn)行反復(fù)多次的分配，是各組分最終分離。氣相色譜法是色譜法中的一種，，已被用于許多領(lǐng)域中，成為一種簡(jiǎn)易、快速、高效和靈敏的現(xiàn)代分析方法。檢測(cè)器是測(cè)量氣流中不同組分及其含量的敏感器，待測(cè)的各組分通過(guò)檢測(cè)器按其化學(xué)特征，轉(zhuǎn)換成易于測(cè)量的電信號(hào)，經(jīng)放大后進(jìn)行定性定量。檢測(cè)有機(jī)氯化合物，如ECD主要用于含鹵代烴的農(nóng)藥殘留檢測(cè)，檢測(cè)器靈敏度為W0.008pg/s的六氯化苯；FPD主要用于含硫、磷的農(nóng)藥殘留檢測(cè)，檢測(cè)器對(duì)硫的靈敏度為W20pg/s的十二烷基硫醇，對(duì)磷的靈敏度為W0.9pg/s的磷酸丁酸酯。1.2.2高效液相色譜是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種分離檢測(cè)技術(shù)。與氣相色譜法相比，更適用于分析高沸點(diǎn)，難揮發(fā)，熱穩(wěn)定性差，分子量較大的液體化合物。對(duì)于呋喃丹、西維因、滅害威等氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的測(cè)定以及利谷隆、滅草隆等取代脲類(lèi)除草劑的測(cè)定用高效液相色譜。2農(nóng)藥殘留速測(cè)法2.1酶抑制法2.1.1酶抑制檢測(cè)法的原理在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶催化水解的功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。原理結(jié)構(gòu)圖：乙酰膽堿酯酶（AchE）+有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥-酶活性被抑制乙酰膽堿酯酶（AchE）+擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥-酶活性不被抑制活性被抑制-含有對(duì)神經(jīng)有害物質(zhì)乙酰膽堿酯酶（AchE）+樣本活性不被抑制-不含對(duì)神經(jīng)有害物質(zhì)2.1.2檢測(cè)步驟：取2g樣本，擦去表面泥水，切碎（非葉菜類(lèi)取4g）I加20ml緩沖液，震蕩2-3分鐘I倒出提取液，靜止5分鐘I于比色杯內(nèi)加入50ul酶3ml樣本提取液50ul顯色劑I混勻后于37-41°C下放置30分鐘I50ul底物，混合后于412nm波長(zhǎng)下比色I(xiàn)抑制率（%）=（AAc-AAs）/△AsX100%△Ac:對(duì)照組3分鐘后與3分鐘前吸光度之差△As:樣本3分鐘與3分鐘前吸光度之差2.1.3結(jié)果判定抑制率V70%，基本上不存在農(nóng)藥殘留；抑制率370%，肯定存在有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥。抑制率一般在一10%?110%之間，一旦檢測(cè)結(jié)果超出此范圍，即說(shuō)明操作過(guò)程中有失誤的地方，需要重新檢測(cè)。2.2化學(xué)試劑速測(cè)法2.2.1化學(xué)試劑速測(cè)法檢測(cè)原理本研究成果首先是研制了有強(qiáng)催化作用的金屬離子催化劑，使各類(lèi)有機(jī)磷農(nóng)藥（磷酸酯、一硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酰胺）在催化作用下水解為磷酸與醇。強(qiáng)催化劑有機(jī)磷農(nóng)藥（Ops） 磷酸+醇（硫醇、胺、酚等）（即檢測(cè)液B）其二是研究了靈敏度較高的紫色檢測(cè)液A，使有機(jī)磷水解產(chǎn)物與檢液A反應(yīng)，使檢測(cè)液A的紫紅色褪去變成無(wú)色。2.2.2檢測(cè)步聚第一步取純凈水（蒸餾水、潔凈水）3-4毫升，約為包裝盒內(nèi)塑料測(cè)試盆中1/5處；第二步取需測(cè)蔬菜上帶柄舒展葉片2-3片；第三步取吸管吸取盆中水反復(fù)沖洗葉面；第四步用另一吸管吸取三角瓶中紫紅色液體，滴入盆中兩滴，混勻；再將塑料瓶?jī)?nèi)黃色液體滴入盆中四滴，混勻后靜置五到十分鐘，觀察顏色變化。2.2.3結(jié)果判斷如果液體褪色則表示有機(jī)磷農(nóng)藥殘留超量，不能食用。重復(fù)測(cè)定2至3次。3酶聯(lián)免疫法（又稱(chēng)免疫生測(cè)法）（英文簡(jiǎn)稱(chēng)ELISA）3.1酶聯(lián)免疫法檢測(cè)原理該方法利用化學(xué)物質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生免疫抗體的原理，將小分子農(nóng)藥化合物與大分子生物物質(zhì)結(jié)合成大分子物質(zhì)，并使之在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生抗體，對(duì)抗體篩選制成試劑盒，通過(guò)抗原、抗體之間發(fā)生的酶聯(lián)免疫反應(yīng)，利用比色來(lái)確定農(nóng)藥的殘留量。市場(chǎng)上有據(jù)此原理制成的ELISA試劑盒。3.2酶聯(lián)免疫分析法的操作程序酶聯(lián)免疫法是迄今為止，農(nóng)藥殘留免疫檢測(cè)中應(yīng)用最廣泛的一種免疫分析方法。其中基于競(jìng)爭(zhēng)吸附的ELISA法成為農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的首選方法。ELISA法有抗體包被直接競(jìng)爭(zhēng)法（E-H法）、抗原直接競(jìng)爭(zhēng)法（E-Ab法）和間接競(jìng)爭(zhēng)抑制法。3.2.1抗體包被直接競(jìng)爭(zhēng)法（E-H法）是將純化的抗體吸附到酶聯(lián)板上，加入酶標(biāo)記的農(nóng)藥和待測(cè)農(nóng)藥樣品，酶標(biāo)記農(nóng)藥和樣品中同一種未標(biāo)記農(nóng)藥與抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。通過(guò)洗滌去除游離的部分（包括酶標(biāo)記和未標(biāo)記的）后，抗體上結(jié)合的酶標(biāo)記農(nóng)藥量與樣品中待測(cè)農(nóng)藥的含量成反比。加入酶的底物，酶催化底物反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)，經(jīng)比色測(cè)定對(duì)待測(cè)農(nóng)藥進(jìn)行定性定量檢測(cè)。3.2.2抗原包被直接競(jìng)爭(zhēng)法（E-Ab法）是將人工抗原包被到酶標(biāo)板上，加入酶標(biāo)記的抗體和待測(cè)農(nóng)藥樣品，競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng)后洗滌，反應(yīng)板上只留下與包被抗原結(jié)合的酶標(biāo)抗體，其結(jié)合量與樣品中同種待測(cè)農(nóng)藥量成反比。同樣，加入酶的底物，加入酶的底物，產(chǎn)生有色物質(zhì)經(jīng)比色法對(duì)待測(cè)農(nóng)藥進(jìn)行定性定量測(cè)定。3.2.3間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法是用人工抗原（包被原）包被酶反應(yīng)板后加入抗血清和待測(cè)農(nóng)藥進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng)，洗滌反應(yīng)板，板上只留下與包被原結(jié)合的抗體（第一抗體）再加入酶標(biāo)記的第二抗體，與第一抗體進(jìn)行選擇性結(jié)合，洗滌后加入酶的底物。酶催化反應(yīng)的產(chǎn)物量與被結(jié)合的第一抗體和酶標(biāo)第二抗體量成正比，與待測(cè)樣品中相應(yīng)的農(nóng)藥量成反比。4幾種農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法的比較快速檢測(cè)的最低檢出濃度、最高允許殘留限量（MRL）、引起中毒的殘留量、氣相色譜等儀器最低檢出濃度之間的關(guān)系可以用一個(gè)簡(jiǎn)圖來(lái)表示

氣相色譜等儀器最低檢出濃度引起中毒的殘留濃度速測(cè)法最低檢出濃度國(guó)家規(guī)定的殘留限量按照色譜法、酶抑制法、化學(xué)試劑法及酶聯(lián)免疫法四種檢測(cè)方法的原理、特點(diǎn)及成本等差異可作如下的比較:氣相色譜等儀器最低檢出濃度引起中毒的殘留濃度速測(cè)法最低檢出濃度國(guó)家規(guī)定的殘留限量方法 檢測(cè)殘留名稱(chēng) 農(nóng)藥范圍酶 有機(jī)磷、氨方法 檢測(cè)殘留名稱(chēng) 農(nóng)藥范圍酶 有機(jī)磷、氨抑 基甲酸酯類(lèi)制法化學(xué)試劑速測(cè)有機(jī)磷類(lèi)法（速測(cè)靈）對(duì)農(nóng)殘定性分析，精確度低葉菜、瓜果類(lèi)施用檢測(cè)一個(gè)樣品規(guī)模蔬菜，操作簡(jiǎn)便、快速，一名技農(nóng)藥較多的蔬菜、需要1.5—2萬(wàn)生產(chǎn)基地術(shù)人員30分鐘內(nèi)可檢5-6個(gè)水果新產(chǎn)品，可用元，儀器成本農(nóng)貿(mào)交易樣本，但對(duì)酶活性要求高于復(fù)檢、混合樣檢測(cè)在2萬(wàn)元左右批發(fā)市場(chǎng)對(duì)果蔬等表皮有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行葉菜、瓜果類(lèi)蔬菜檢測(cè)1個(gè)樣本需小型農(nóng)貿(mào)定性檢測(cè)，結(jié)果不太穩(wěn)定準(zhǔn)確及水果一般可適用于1元左右，一套試交易市場(chǎng)度低，一般需要重復(fù)2-3次，方農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)入口處等候劑盒成本在10元市民自備法簡(jiǎn)便、快速、成本低 進(jìn)場(chǎng)的產(chǎn)品速測(cè)。左右 小規(guī)?；孛嘎?lián) 50種已研制出 對(duì)農(nóng)殘定性分析，專(zhuān)業(yè)性、特異免疫法免疫抗體的農(nóng)藥性強(qiáng)，靈敏度較其它速測(cè)儀高，適用于果蔬上已知未進(jìn)入產(chǎn)業(yè)化開(kāi)大型農(nóng)貿(mào)或指定農(nóng)藥品種的發(fā)，暫無(wú)銷(xiāo)售市場(chǎng)及生定性、定量檢測(cè) 產(chǎn)基地品種包括有機(jī)磷但具有一定盲目性、局限性類(lèi)、呋喃丹等適用于果蔬上已知未進(jìn)入產(chǎn)業(yè)化開(kāi)大型農(nóng)貿(mào)或指定農(nóng)藥品種的發(fā)，暫無(wú)銷(xiāo)售市場(chǎng)及生定性、定量檢測(cè) 產(chǎn)基地色譜法所有需檢農(nóng)藥對(duì)農(nóng)殘定性、定量分析精確度高適用于所有農(nóng)產(chǎn)品中檢測(cè)1個(gè)蔬菜檢測(cè)中心殘留品種 一般最低檢出能達(dá)到1013級(jí)農(nóng)藥殘留的仲裁和鑒定樣品2000-5000規(guī)范化固元,儀器設(shè)備配套定的實(shí)驗(yàn)成本最低200萬(wàn)元室即pg/血但檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，儀器成檢測(cè)本及技術(shù)要求高元,儀器設(shè)備配套定的實(shí)驗(yàn)成本最低200萬(wàn)元室參考文獻(xiàn)李順，紀(jì)淑娟，孫煥.酶抑制法快速檢測(cè)蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留的研究現(xiàn)狀及展望[J].食品與藥品，2006，8（07）：29-30.王