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第四章沉淀分離法第1頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三晶體:有規(guī)則無定形沉淀:無規(guī)則構(gòu)成單位(原子、離子或分子)的排列方式不同條件緩慢變化時(shí),溶質(zhì)分子有足夠時(shí)間排列,有利于結(jié)晶形成;條件變化劇烈,強(qiáng)迫快速析出,溶質(zhì)分子來不及排列就析出,形成無定形沉淀。區(qū)別:結(jié)晶法:高度的選擇性(原因:只有同類分子或離子才能排列成晶體)。沉淀法:濃縮與分離,但所得的沉淀物聚集多種物質(zhì),或含有鹽類,或包裹著溶劑。分離效果第2頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三第四章
沉淀分離法第3頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三沉淀法:
利用某種沉淀劑或改變條件,使所需提取的物質(zhì)或雜質(zhì)在溶液中的溶解度降低而形成無定形固體沉淀的過程。具有濃縮和分離的雙重作用。在蛋白質(zhì)、酶、多肽、核酸和其他細(xì)胞組分的回收和分離中應(yīng)用的很多。第4頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三鹽析沉淀法有機(jī)溶劑沉淀等電點(diǎn)沉淀法成鹽沉淀法高分子聚合物沉淀選擇性變性沉淀法第5頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三一、鹽析沉淀法
鹽析法:
在高濃度中性鹽存在下,欲分離物質(zhì)在中性鹽水溶液中的溶解度降低而產(chǎn)生沉淀。早在19世紀(jì)鹽析法就被用于從血液中分離蛋白質(zhì),目前該方法仍廣泛用來回收或分離蛋白質(zhì)(酶)等生物大分子物質(zhì)。第6頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三(一)基本原理蛋白質(zhì)的溶解特性取決于其組成、構(gòu)象、周圍環(huán)境的物理化學(xué)性質(zhì)以及溶劑的可利用度。這些性質(zhì)就本質(zhì)而言是水分子間的氫鍵和蛋白質(zhì)表面所暴露出的N、O原子的相互作用,所以易受溶液溫度、pH值、介電常數(shù)和離子強(qiáng)度等參數(shù)的影響。第7頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三蛋白質(zhì)在自然環(huán)境中通常是可溶的,表面:大部分是親水基團(tuán)內(nèi)部:大部分是疏水基團(tuán)蛋白質(zhì)呈穩(wěn)定的分散狀態(tài)兩性物質(zhì),一定pH下表面帶有一定的電荷,靜電斥力作用使分子間相互排斥蛋白質(zhì)周圍的水分子有序排列,在表面形成水化膜,這一層能保護(hù)蛋白質(zhì)粒子避免因碰撞而聚沉。第8頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三當(dāng)向蛋白質(zhì)溶液中加入中性鹽時(shí):低鹽--鹽溶(低鹽情況下,隨著中性鹽離子強(qiáng)度的增加,蛋白質(zhì)溶解度增大)高鹽--鹽析(高鹽濃度時(shí),蛋白質(zhì)溶解度隨之減小)鹽離子部分中和蛋白質(zhì)的電性,使分子間排斥作用減弱中性鹽的親水性比蛋白質(zhì)大,鹽離子在水中發(fā)生水化作用從而使蛋白質(zhì)脫去水化膜,暴露出疏水區(qū)域第9頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三H+OH-+++++++++++pH<pI,帶正電,有水膜,是穩(wěn)定的親水膠體_________pH>pI,帶負(fù)電,有水膜,是穩(wěn)定的親水膠體_+++++____pH=pI時(shí),有水膜,是不穩(wěn)定的親水膠體中性鹽破壞水膜+++++++++++中性鹽破壞水膜_+++++____中性鹽破壞水膜_________中性鹽中和電荷SO42-中性鹽中和電荷NH4+或Na+蛋白質(zhì)的鹽析機(jī)制示意圖蛋白質(zhì)沉淀第10頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三蛋白質(zhì)在水中的溶解度不僅與中性鹽離子的濃度有關(guān),還與離子所帶電荷數(shù)有關(guān),高價(jià)離子影響更顯著。通常用離子強(qiáng)度表示對鹽析的影響。第11頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三1234561.02.52.00.5-0.5-1.0-1.5
01.5碳氧血紅蛋白的lgS與(NH4)2SO4離子強(qiáng)度μ的關(guān)系S0βμ(離子強(qiáng)度)lgS鹽析鹽溶鹽析區(qū):lgS=β
-
Ksμ蛋白質(zhì)溶解度常數(shù)鹽析常數(shù)鹽離子強(qiáng)度蛋白質(zhì)溶解度起始蛋白濃度第12頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三(二)無機(jī)鹽的選擇
在蛋白質(zhì)鹽析中,常用的鹽析劑有(NH4)2SO4,Na2SO4,MgSO4,NaH2PO4,NaCl,Na3PO4,K3PO4。(NH4)2SO4原因廉價(jià)在水中溶解度大,且溶解度隨溫度變化小,低溫下仍具有較大的溶解度對大多數(shù)蛋白質(zhì)的活力無損害第13頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三020406080100中性鹽溫度(oC)(NH4)2SO4Na2SO4MgSO4NaH2PO470.675.481.088.095.31034.918.948.345.343.342.2
--34.544.454.663.670.81.67.854.182.693.8101常用鹽析劑在水中的溶解度(g/100ml水)第14頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三鹽析效果:陰離子>陽離子尤其以高價(jià)陰離子更為明顯。常見陰離子的鹽析作用順序:PO43->SO42->CH3COO>Cl>NO3>ClO4>I>SCN陽離子對鹽析效果的影響:Al3+>H+>Ba2+>Sr2+>Ca2+>Cs+>Rb+>NH4+>K+>Na+>Li+第15頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三無機(jī)鹽可按兩種方式加入溶液中:直接加入固體(NH4)2SO4粉末—工業(yè)生產(chǎn)
(分批加入,充分?jǐn)嚢?加入(NH4)2SO4飽和溶液—實(shí)驗(yàn)室和小規(guī)模生產(chǎn)
(防止溶液局部過濃,但加量較多時(shí)溶液會(huì)被稀釋)第16頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三(三)影響鹽析的各種因素
無機(jī)鹽的加入量蛋白質(zhì)的濃度溫度pH操作方式第17頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三1.無機(jī)鹽加入量的影響1234561.02.52.00.5-0.5-1.0-1.5
01.5S0βμ(離子強(qiáng)度)lgS鹽析蛋白質(zhì)溶解度第18頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三0246810-0.500.50-1.00μ(離子強(qiáng)度)lgS蛋白質(zhì)溶解度
0不同蛋白質(zhì)溶解度與離子強(qiáng)度的關(guān)系蛋白質(zhì)種類不同,鹽析所用的無機(jī)鹽量也不同第19頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三對于特定的蛋白質(zhì),一定操作條件下產(chǎn)生沉淀時(shí)的無機(jī)鹽濃度范圍都是一定的,即具有一定的蛋白質(zhì)鹽析分布曲線。
30lgS蛋白質(zhì)溶解度2030405060702040100P—不同(NH4)2SO4飽和度C0第20頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三蛋白質(zhì)沉淀的速度可用-—
對鹽飽和度(P)作圖來表示:dSdP
62030405060704820dSdP–—蛋白質(zhì)溶解度隨(NH4)2SO4飽和度而變化的速率P利用不同蛋白質(zhì)鹽析分布曲線在橫軸上的位置不同,可采取先后加入不同量無機(jī)鹽的辦法來分級(jí)沉淀蛋白質(zhì)。第21頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三2.蛋白質(zhì)濃度的影響蛋白質(zhì)濃度不同,沉淀所需無機(jī)鹽用量也不同。
隨濃度提高,鹽用量減少。
640506070804820dSdP–—P不同濃度碳氧肌紅蛋白的鹽析分布曲線3g/L30g/L分級(jí)沉淀:將溶液稀釋,使重疊曲線拉開距離制取成品:提高蛋白質(zhì)濃度第22頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三3.溫度的影響低鹽濃度:溫度升高,溶解度升高高鹽濃度:溫度升高,溶解度降低溫度適當(dāng)提高有利于蛋白質(zhì)沉淀。高溫容易導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。蛋白質(zhì)鹽析一般在室溫下進(jìn)行,某些溫度敏感性的蛋白質(zhì)鹽析最好在低溫下進(jìn)行。第23頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三
4.pH的影響蛋白質(zhì)在pI時(shí)的溶解度最小,最容易從溶液中析出,因此選擇在被鹽析的蛋白質(zhì)的pI附近。耗鹽少,蛋白質(zhì)收率也高第24頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三
5.操作方式的影響
10
506070飽和度(%)52.51酶活性U/ml操作方式對延胡索酸酶鹽析的影響固體,間歇12h飽和溶液,間歇12h飽和溶液,連續(xù)12h飽和溶液,連續(xù)1.6min采用間歇方式所需鹽量比連續(xù)方式少;間歇操作中,用飽和溶液的需鹽量比用固體鹽的高。第25頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三
6.鹽析法的優(yōu)缺點(diǎn)(1)優(yōu)點(diǎn):①室溫下沉淀物在硫酸銨鹽析溶液中長時(shí)間放置不會(huì)失活,且無機(jī)鹽不容易引起蛋白質(zhì)變性失活;②非蛋白的雜質(zhì)很少被夾帶沉淀;③適用范圍廣,幾乎所有蛋白質(zhì)和酶都能采用④設(shè)備簡單,操作方便。第26頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三(2)缺點(diǎn):①沉淀物中含有大量鹽析劑②硫酸銨容易分解產(chǎn)生氨的惡臭味,產(chǎn)品不能直接用于醫(yī)藥上鹽析法可以作為初始的提取方法,再與多種精制手段結(jié)合起來,如采用超濾、凝膠色譜、透析等方法將無機(jī)鹽去除,就可制得高純度產(chǎn)品。第27頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三二、有機(jī)溶劑沉淀法
在蛋白質(zhì)等生物大分子的水溶液中加入一定量親水性的有機(jī)溶劑,能顯著降低蛋白質(zhì)等生物大分子的溶解度,使其沉淀析出。不同蛋白質(zhì)沉淀時(shí)所需有機(jī)溶劑的濃度不同,因此調(diào)節(jié)有機(jī)溶劑的濃度,可以使混合物中的蛋白質(zhì)分段析出,達(dá)到分離純化的目的。不僅適于蛋白質(zhì)的分離純化,還常用于酶、核酸、多糖等的分離純化。第28頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三(一)基本原理
加入有機(jī)溶劑后,會(huì)使系統(tǒng)(水和有機(jī)溶劑的混合液)的介電常數(shù)減小,而使溶質(zhì)分子(如蛋白質(zhì)分子)之間的靜電引力增加,從而促使它們互相聚集,并沉淀出來。水溶性有機(jī)溶劑的親水性強(qiáng),它會(huì)搶奪本來與溶質(zhì)結(jié)合的自由水,使其表面的水化層破壞,導(dǎo)致溶質(zhì)分子之間的相互作用增大而發(fā)生凝聚,沉淀析出。第29頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三常用于生物大分子沉淀的有機(jī)溶劑:甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮等,其中乙醇是工業(yè)上最常用的第30頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三(二)影響沉淀效果的因素
溫度pH中性鹽濃度金屬離子第31頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三1.溫度的影響有機(jī)溶劑存在下,多數(shù)蛋白質(zhì)的溶解度隨溫度降低而顯著的減小,因此低溫下(最好低于0oC)沉淀得完全,有機(jī)溶劑用量可減少。實(shí)際操作中:有機(jī)溶劑與水混合時(shí),會(huì)放出大量的熱量,使溶液的溫度顯著升高,從而增加對蛋白質(zhì)的變性作用。第32頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三整個(gè)操作過程應(yīng)在低溫下進(jìn)行。具體操作時(shí):①將待分離溶液和有機(jī)溶劑分別進(jìn)行預(yù)冷:蛋白質(zhì)溶液冷卻到0oC左右,有機(jī)溶劑預(yù)冷到-10oC以下②為避免溫度驟然升高損失蛋白質(zhì)活力,操作時(shí)應(yīng)不斷攪拌、少量多次加入。③使沉淀在低溫下短時(shí)間處理后即進(jìn)行過濾或離心分離,接著真空抽去剩余溶液或?qū)⒊恋砣苋氪罅烤彌_溶液中以稀釋有機(jī)溶劑,旨在減少有機(jī)溶劑與目的物的接觸。第33頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三溫度的控制應(yīng)根據(jù)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性而不同,穩(wěn)定性較差的物質(zhì),冷卻至低溫是必要的;但對于穩(wěn)定性較好的物質(zhì),如淀粉酶,溫度不需過低,10-15oC。第34頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三2.pH的影響在等電點(diǎn)時(shí)蛋白質(zhì)溶解度最低,因此有機(jī)溶劑沉淀時(shí)溶液pH多控制在蛋白質(zhì)等電點(diǎn)附近。
pH的控制必須考慮蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性:某些酶的等電點(diǎn)在pH4-5之間,比其穩(wěn)定的pH范圍低,因此pH應(yīng)首先滿足蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的條件??刂苝H時(shí)應(yīng)使大多數(shù)蛋白質(zhì)分子帶相同電荷,不要讓目的物與主要雜質(zhì)分子帶相反電荷,以免共沉。第35頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三3.無機(jī)鹽的離子強(qiáng)度
少量的中性鹽能夠減少蛋白質(zhì)變性。在有機(jī)溶劑沉淀時(shí)中性鹽濃度以0.01-0.05mol/L為宜。常用中性鹽:乙酸鈉、乙酸銨、氯化鈉中性鹽濃度較高時(shí)(0.2mol/L以上),由于鹽溶作用會(huì)增大蛋白質(zhì)的溶解度,此時(shí)需增加有機(jī)溶劑的用量才能使沉淀析出。對鹽析后的上清液或沉淀物,如進(jìn)一步用有機(jī)溶劑沉淀法純化,必須先脫鹽。第36頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三4.金屬離子一些金屬離子,如Ca2+、Zn2+能與蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物,使蛋白質(zhì)溶解度大大降低而不影響生物活性,有利于沉淀形成,并減少有機(jī)溶劑用量。使用時(shí)避免能與這些金屬離子形成難溶鹽的陰離子存在(如磷酸根)。常用的鋅鹽:醋酸鋅或硫酸鋅第37頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三5.有機(jī)溶劑沉淀法的優(yōu)缺點(diǎn)(1)優(yōu)點(diǎn):①乙醇等有機(jī)溶劑易揮發(fā)除去,不會(huì)殘留于成品中,產(chǎn)品更純凈(不需要脫鹽處理);②有機(jī)溶劑密度低,沉淀物與母液間的密度差較大,分離容易,適于用離心分離收集沉淀物。第38頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三(2)缺點(diǎn):①容易使蛋白質(zhì)變性,操作需要在低溫下進(jìn)行,使用上有一定的局限;②采用大量有機(jī)溶劑,成本較高。為節(jié)省用量,通常將蛋白質(zhì)溶液適當(dāng)濃縮,并回收溶劑。③有機(jī)溶劑易燃易爆,工業(yè)生產(chǎn)上車間和設(shè)備都應(yīng)有防護(hù)措施。第39頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三等電點(diǎn)沉淀法成鹽沉淀法高分子聚合物沉淀選擇性變性沉淀法三、其他沉淀方法
第40頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三
1.等電點(diǎn)沉淀法兩性物質(zhì)在pH=pI時(shí),分子表面凈電荷為零,分子間靜電排斥作用減弱,因此吸引力增大,能相互聚集,發(fā)生沉淀。不同的兩性物質(zhì),pI不同,如不同蛋白質(zhì)。根據(jù)這一特性,用依次改變?nèi)芤簆H的方法可將不同的蛋白質(zhì)分別沉淀析出,達(dá)到分離純化的目的。第41頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三
只適用于水化程度不大、在pI時(shí)溶解度很低的兩性物質(zhì),如酪蛋白。
對于親水性很強(qiáng)的兩性物質(zhì),在pI及pI附近仍有相當(dāng)?shù)娜芙舛?,用該法沉淀不完全,而且許多生物分子的pI很接近,因此很少單獨(dú)使用。往往與鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法或其他沉淀方法結(jié)合起來。采用該法時(shí)必須注意:溶液pH不會(huì)影響到目的物質(zhì)的穩(wěn)定性。第42頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三等電點(diǎn)沉淀法可用于所需物質(zhì)的提取,也可用于沉淀除去雜蛋白及其他雜質(zhì),實(shí)際工作中普遍采用該方法作為去雜手段。如在工業(yè)上生產(chǎn)胰島素時(shí):先調(diào)pH至8.0去除堿性雜蛋白,再調(diào)pH至3.0去除酸性雜蛋白。粗酶液經(jīng)過這樣的處理后純度大大提高,有利于后面的操作。第43頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三
2.成鹽沉淀法某些生化物質(zhì)(如核酸、蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、抗生素等)能和重金屬、某些有機(jī)酸及無機(jī)酸形成難溶性的鹽類復(fù)合物而沉淀。金屬離子沉淀法有機(jī)酸沉淀法無機(jī)酸沉淀法注意:形成復(fù)合鹽后,常使蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆的沉淀,應(yīng)用時(shí)必須謹(jǐn)慎。第44頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三
(1)金屬離子沉淀法許多有機(jī)物(包括蛋白質(zhì))在堿性溶液中帶負(fù)電荷,因此能與金屬離子形成金屬復(fù)合鹽沉淀。根據(jù)與有機(jī)物作用的機(jī)制不同,可將金屬離子分為三類:①能與羧基、含氮化合物和含氮雜環(huán)化合物結(jié)合,如Mn2+,Fe2+,Co2+,Ni2+,Cu2+,Zn2+等②能與羧基結(jié)合,但不能與含氮化合物結(jié)合,如Ca2+,Ba2+,Mg2+,Pb2+等③能與巰基結(jié)合,如Hg2+,Ag+,Pb2+等第45頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三分離出沉淀物后,如何去除金屬離子?可用H2S使金屬變成硫化物而除去,也可采用離子交換法或金屬螯合劑EDTA等將金屬離子除去。金屬離子沉淀法除提取生化物質(zhì)外,還能用于沉淀去除雜質(zhì):如錳鹽能選擇性的沉淀發(fā)酵液中的核酸,降低發(fā)酵液黏度,以利于后續(xù)操作;ZnSO4能沉淀紅霉素發(fā)酵液中的雜蛋白以提高過濾速度。
第46頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三
(2)有機(jī)酸沉淀法(有機(jī)酸:具有酸性的有機(jī)化合物)某些有機(jī)酸如苦味酸、苦酮酸、鞣酸和三氯乙酸等,能與有機(jī)分子的堿性功能團(tuán)形成復(fù)合物而沉淀析出。這些有機(jī)酸與蛋白質(zhì)形成鹽復(fù)合物沉淀時(shí),常發(fā)生不可逆的沉淀反應(yīng),所以用此法制備蛋白質(zhì)和酶時(shí),需采用較溫和的條件,有時(shí)還加入一定的穩(wěn)定劑,以防止蛋白質(zhì)變性。第47頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三①鞣酸(單寧)—多元酚類化合物分子上有羧基和多個(gè)羥基,蛋白質(zhì)分子中有氨基、亞氨基和羧基,所以可與單寧分子形成為數(shù)眾多的氫鍵而結(jié)合在一起,生成巨大的復(fù)合顆粒而沉淀下來。如何使蛋白質(zhì)游離釋放出來?單寧與蛋白質(zhì)的結(jié)合比較牢固,不易分開,多采用競爭結(jié)合法:用比蛋白質(zhì)更強(qiáng)的結(jié)合劑與單寧結(jié)合,競爭性結(jié)合劑有PVP(與單寧形成氫鍵的能力很強(qiáng)),聚乙二醇、聚氧化乙烯、山梨糖醇甘油酸酯第48頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三②三氯乙酸(TCA)沉淀蛋白質(zhì)迅速且完全,一般會(huì)引起變性。低溫下短時(shí)間作用可使某些較穩(wěn)定的蛋白質(zhì)或酶保持原有活力,多用于目的物較穩(wěn)定且分離雜蛋白相對困難的場合。③雷凡諾—吖啶染料沉淀機(jī)制比一般有機(jī)酸鹽復(fù)雜,但與蛋白質(zhì)作用也主要是通過形成鹽的復(fù)合物而沉淀的。提純血漿中γ-球蛋白有較好效果。第49頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三
(3)無機(jī)酸沉淀法
(無機(jī)酸:能解離出氫離子的無機(jī)化合物,如硫酸、鹽酸、硝酸、次氯酸等;有機(jī)酸:具有酸性的有機(jī)化合物,最常見是羧酸)某些無機(jī)酸如磷鎢酸、磷鉬酸等能與陽離子形式的蛋白質(zhì)形成溶解度極低的復(fù)合鹽,使蛋白質(zhì)沉淀析出。無機(jī)酸如何去除?得到沉淀物后,可在沉淀物中加入無機(jī)酸并用乙醚萃取,把磷鎢酸、磷鉬酸等移入乙醚中除去;或用離子交換法除去。第50頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三
3.高分子聚合物沉淀某些水溶性的非離子型高分子聚合物是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來的沉淀劑,近年來被廣泛用于核酸、蛋白質(zhì)和酶的分離純化,包括不同分子量的聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和葡聚糖等。應(yīng)用最多的是PEG,原因:無毒,對成品影響小第51頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三
(1)用水溶性非離子聚合物沉淀生物大分子和顆粒的兩種方法:①選用兩種水溶性非離子多聚物組成液-液兩相系統(tǒng),使生物大分子或顆粒在兩相系統(tǒng)中不等量分配,進(jìn)行分離。機(jī)理:不同生物分子和顆粒表面結(jié)構(gòu)不同,有不同分配系數(shù);且外加離子強(qiáng)度、pH和溫度等的影響,提高分離效果。②選用一種水溶性非離子多聚物,使生物大分子或顆粒在同一液相中,由于被排斥相互凝集而沉淀析出。第52頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三(2)PEG的沉淀①機(jī)理勞蘭梯提出:通過空間位置排斥,使液體中的生物大分子、病毒和細(xì)菌等微粒被迫擠聚在一起而引起沉淀的發(fā)生。②影響因素PEG濃度:PEG相對分子質(zhì)量:離子強(qiáng)度:蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量:pH:溫度:與溶液中鹽的濃度成反比越接近蛋白質(zhì)的pI,所需PEG濃度越低高分子量的PEG沉淀效果較好分子量越高,PEG越少第53頁,共60頁,2023年,2月20日,星期三
③優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn):無毒,對成品影響小,所以廣泛用于核酸、蛋白質(zhì)、酶等的沉淀分離。缺點(diǎn):所得沉淀中含有大量PEG去除蛋白質(zhì)沉淀中的PEG吸附法乙醇沉淀法鹽析法第54頁,共60頁,2023年,2月20日,星期
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