藥物分析維生素專家講座

維生素類藥品分析概述維生素A維生素D維生素E維生素B1維生素C練習(xí)與思索返回主目錄基本要求藥物分析維生素第1頁基本要求一、掌握維生素類藥品結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分析方法之間關(guān)系。二、掌握維生素類藥品判別原理與方法。三、掌握三點(diǎn)校正法測(cè)定維生素A原理、測(cè)定方法與計(jì)算方法。四、掌握維生素DHPLC含量測(cè)定法和維生素EGC含量測(cè)定法。五、掌握維生素B1非水溶液滴定法與維生素C碘量法測(cè)定原理、方法與注意事項(xiàng)。六、熟悉本類藥品其它含量測(cè)定方法。七、熟悉本類藥品雜質(zhì)檢驗(yàn)方法。八、了解維生素A三點(diǎn)校正法推導(dǎo)過程。返回藥物分析維生素第2頁概述維生素：是維持人體正常代謝機(jī)能所必需微量營(yíng)養(yǎng)物資。人體不能合成維生素。藥物分析維生素第3頁VitA、D2、D3、

E、K1

等脂溶性水溶性VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、葉酸、煙酸、泛酸等。分類按溶解度分返回藥物分析維生素第4頁-H維生素A醇-COCH3維生素A醋酸酯-COC15H31維生素A棕櫚酸酯R:第一節(jié)維生素A藥物分析維生素第5頁為一個(gè)含有共軛多烯側(cè)鏈環(huán)己烯（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、

含有UV吸收

存在各種立體異構(gòu)化合物藥物分析維生素第6頁VitA2VitA3

易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應(yīng)藥物分析維生素第7頁鯨醇藥物分析維生素第8頁△或有金屬離子存在時(shí)氧化↑共軛多烯側(cè)鏈易被氧化（二）藥物分析維生素第9頁環(huán)氧化物VitA醛VitA酸藥物分析維生素第10頁三氯化銻反應(yīng)（一）條件無水無醇CHCl3

判別試驗(yàn)二、藥物分析維生素第11頁藍(lán)色紫紅藥物分析維生素第12頁（BP（））λmax為326nm一個(gè)吸收峰UV法（二）λmax為350～390nm三個(gè)吸收峰藥物分析維生素第13頁去水VitA（VitA3）↓VitA藥物分析維生素第14頁藥物分析維生素第15頁USP顯色劑磷鉬酸要求斑點(diǎn)顏色和Rf值BP

雜質(zhì)對(duì)照品法顯色劑三氯化銻TLC法（三）藥物分析維生素第16頁立體異構(gòu)體氧化降解產(chǎn)物合成中間體UV法（一）含量測(cè)定三、維生素A2維生素A3環(huán)氧化物維生素A醛維生素A酸藥物分析維生素第17頁三點(diǎn)校正法（法定方法）1.原理：（1）雜質(zhì)吸收在310~340nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長(zhǎng)增大吸收度減小；（2）物質(zhì)對(duì)光吸收含有加和性。藥物分析維生素第18頁2.波長(zhǎng)選擇：（1）1

VitAmax（328nm）（2）23

分別在1兩側(cè)各選一點(diǎn)藥物分析維生素第19頁測(cè)定對(duì)象VitA醋酸酯第一法等波長(zhǎng)差法=12nm藥物分析維生素第20頁第二法等吸收比法測(cè)定對(duì)象VitA醇1=325nm,2=310nm,3=334nm藥物分析維生素第21頁測(cè)定法（1）基本步驟:第一步A選擇選擇依據(jù)：所選A值中雜質(zhì)干擾已基本消除藥物分析維生素第22頁注意：

C為混合樣品濃度第二步求藥物分析維生素第23頁第三步求效價(jià)換算因數(shù)由純品計(jì)算而得：藥物分析維生素第24頁藥物分析維生素第25頁藥物分析維生素第26頁第四步：求標(biāo)示量％藥物分析維生素第27頁

方法：（2）

第一法維生素A醋酸酯藥物分析維生素第28頁

判斷是否在326～329nm之間在326～329nm之間改用第二法是否

求算并與要求值比較藥物分析維生素第29頁

要求值差值藥物分析維生素第30頁

判斷差值是否超出要求值有一個(gè)以上超出無超出

計(jì)算A328（校正）

用A328計(jì)算藥物分析維生素第31頁藥物分析維生素第32頁03%－15%－3%第二法第二法藥物分析維生素第33頁討論VA醋酸酯吸收度校正公式是用直線方程式法（即代數(shù)法）推導(dǎo)而來；VA醇吸收度校正公式是用相同三角形法（幾何法或稱6/7定位法）推導(dǎo)而來。在應(yīng)用三點(diǎn)校正法時(shí)，除其中一點(diǎn)在最大吸收波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定外，其余兩點(diǎn)均在最大吸收峰兩側(cè)進(jìn)行測(cè)定。在測(cè)定前務(wù)必要校正波長(zhǎng)。測(cè)定樣品應(yīng)不得少于兩份。藥物分析維生素第34頁VitAD膠丸中VitA含量測(cè)定

精密稱取本品(規(guī)格10000VitAIU/丸)裝量差異項(xiàng)下（平均裝量0.07985g/丸）內(nèi)容物0.1287g至10ml燒杯中，加環(huán)己烷溶解并定量轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一50ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)為328nm，并在以下波優(yōu)點(diǎn)測(cè)得吸收度為藥物分析維生素第35頁A300：0.374A316

：0.592A328：0.663A340：0.553A360：0.228A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.834A360/A328：0.344求本品中維生素A占標(biāo)示量百分含量？藥物分析維生素第36頁A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.834A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299+0.01－0.010+0.02+0.04－－－－－=====A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)=3.52(2×0.663–0.592–0.553)=0.637藥物分析維生素第37頁A328(校正)–A328(實(shí)測(cè))A328(實(shí)測(cè))×100=0.637–0.6630.663×100=-3.92E1%1cm(328nm)=A328(校正)100ms/D=0.637100×0.1287/1250=61.87藥物分析維生素第38頁供試品中維生素A效價(jià)=E1%1cm(328nm)×1900=61.87×1900=117553（IU/g）標(biāo)示量%=VA效價(jià)(IU/g)×每丸內(nèi)容物平均裝量(g/丸)標(biāo)示量(IU/丸)×100%=117553×0.0798510000×100%=93.9%藥物分析維生素第39頁適合用于維生素A醇（等吸收比法）

第一法無法消除雜質(zhì)干擾時(shí)用此法[皂化法、6/7A法]（3）第二法藥物分析維生素第40頁水溶性脂溶性藥物分析維生素第41頁

判斷max是否在323～327nm之間取未皂化樣品采取色譜法純化后再測(cè)定

計(jì)算是否藥物分析維生素第42頁

判斷A300/A325是否大于0.73是否取未皂化樣品采取色譜法純化后再測(cè)定

計(jì)算A325(校正)藥物分析維生素第43頁藥物分析維生素第44頁03%－3%藥物分析維生素第45頁三氯化銻比色法（二）優(yōu)點(diǎn)簡(jiǎn)便快速λmax618nm～620nm標(biāo)準(zhǔn)曲線法缺點(diǎn)呈色不穩(wěn)定（5~10s內(nèi)）水分干擾與標(biāo)準(zhǔn)曲線溫差≤1℃專屬性差三氯化銻有腐蝕性（二）藍(lán)色+3SbClVitA返回藥物分析維生素第46頁第二節(jié)維生素D維生素D2一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)藥物分析維生素第47頁維生素D3藥物分析維生素第48頁開環(huán)甾體：含有甾類化合物顯色反應(yīng)，可用于判別。手性碳原子：含有旋光性，可用于判別。

多烯：可進(jìn)行紫外檢測(cè)。

藥物分析維生素第49頁二、判別試驗(yàn)1.顯色反應(yīng)醋酐--硫酸反應(yīng)D2

黃紅紫綠

D3

黃紅紫、藍(lán)綠綠三氯化銻反應(yīng)橙紅色漸變粉紅三氯化鐵反應(yīng)橙黃色二氯丙醇和乙酰氯反應(yīng)綠色藥物分析維生素第50頁2.比旋度判別維生素D2維生素D3溶劑

濃度比旋度值無水乙醇無水乙醇40mg/ml5mg/ml+102.5°～+107.5°+105°～+112°注意事項(xiàng)：應(yīng)于容器開啟30分鐘內(nèi)取樣，在溶液配制后30分鐘內(nèi)測(cè)定。藥物分析維生素第51頁

3.區(qū)分反應(yīng)：以96%乙醇為溶劑，加乙醇和85%硫酸，D2顯紅色，在570nm處有最大吸收，D3顯黃色，在495nm處有最大吸收。

4.其它方法：

TLC、HPLC、制備衍生物測(cè)熔點(diǎn)

藥物分析維生素第52頁三、雜質(zhì)檢驗(yàn)維生素D2中麥角甾醇檢驗(yàn)：加洋地黃皂苷溶液，混合，放置18h不得發(fā)生渾濁或沉淀。前維生素D光照產(chǎn)物藥物分析維生素第53頁四、含量測(cè)定方法

中國(guó)藥典（年版）采取正相高效液相色譜法測(cè)定維生素D含量，定量方法為內(nèi)標(biāo)法，內(nèi)標(biāo)物為鄰苯二甲酸二甲酯，該法分為三個(gè)方法。

固定相：硅膠

流動(dòng)相：正己烷-正戊醇（997：3）藥物分析維生素第54頁第一法：用于無維生素A醇及其它雜質(zhì)干擾情況，步驟以下：

1．系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：測(cè)定重復(fù)性和分離度。

藥物分析維生素第55頁2．測(cè)定校正因子：

AS/mS

f1=--------

Ar/mr

f2=（ASmr-f1mSAr1）/（Ar1mS）

3．含量測(cè)定：

mi=（f1Ai1+f2Ai2）mS/AS藥物分析維生素第56頁第二法：用于有雜質(zhì)干擾情況，步驟以下：

1．皂化處理：皂化、乙醚提取、洗滌提取液、蒸除乙醚、制備供試液A。

2．凈化：供試液A經(jīng)液相色譜分離，準(zhǔn)確搜集含有維生素D及前維生素D混合物全部流出液，制備成供試液B。

固定相：ODS

流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水（50：50：2）

3．含量測(cè)定：取供試液B按第一法測(cè)定。

藥物分析維生素第57頁第三法：用于經(jīng)第二法處理后仍有雜質(zhì)干擾情況。步驟以下：1．制備供試液：取供試液A，凈化，水浴加熱，得供試液C。

制備對(duì)照液：對(duì)照品貯備液：稀釋、加熱。

2．含量測(cè)定：在第一法色譜條件下，交替精密進(jìn)樣對(duì)照液和供試液，按外標(biāo)法定量。返回藥物分析維生素第58頁苯并－二氫吡喃醇第三節(jié)維生素E

藥物分析維生素第59頁名稱R1R2相對(duì)活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1***藥物分析維生素第60頁dl－α－生育酚醋酸酯藥物分析維生素第61頁結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、苯環(huán)+二氫吡喃環(huán)+飽和烴鏈1、UV2、乙?；恿u基易水解緘緘緘瑌]O[醌型化合物△生育酚緘緘緘緘畗緘-+orOHHVitE雜質(zhì)，需檢驗(yàn)藥物分析維生素第62頁緘]O[生育紅（一）硝酸反應(yīng)橙紅色判別二、75℃15′緘緘緘畗緘HNO3VitE生育酚藥物分析維生素第63頁（橙紅色）生育紅生育酚HNO3強(qiáng)氧化劑藥物分析維生素第64頁三氯化鐵－聯(lián)吡啶反應(yīng)（二）藥物分析維生素第65頁生育酚對(duì)-生育醌[O]弱氧化劑藥物分析維生素第66頁血紅色藥物分析維生素第67頁=41.0～45.5λmax=284nmλmin=254nm0.01%無水乙醇中UV法（三）藥物分析維生素第68頁薄層板硅膠G展開劑環(huán)己烷-乙醚（4：1）顯色劑硫酸（105℃5′）VitERf

=0.7-生育酚Rf

=0.5-生育醌Rf

=0.9TLC法（四）藥物分析維生素第69頁2.游離生育酚

雜質(zhì)檢驗(yàn)

三、原理酸度

以NaOH滴定液（0.1mol/L）體積控制。藥物分析維生素第70頁（M生育酚=430.8）例

取本品0.10g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸鈰液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）不得過1.0ml。藥物分析維生素第71頁≤2.15％限量藥物分析維生素第72頁四、含量測(cè)定GC法（法定方法）（一）GC特點(diǎn)1、選擇性好靈敏度高速度快分離效能好揮發(fā)性低、不穩(wěn)定、極性強(qiáng)→衍生化易受樣品蒸氣壓限制藥物分析維生素第73頁載氣→N2固定液→硅酮（OV-17）擔(dān)體→硅藻土或高分子多孔小球柱溫→265℃檢測(cè)器→氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)內(nèi)標(biāo)→正三十二烷

n≥500R≥2VitE測(cè)定色譜條件2、內(nèi)標(biāo)法加校正因子藥物分析維生素第74頁內(nèi)標(biāo)法供試液（樣品+內(nèi)標(biāo)）內(nèi)標(biāo)物對(duì)照液（對(duì)照+內(nèi)標(biāo)）是樣品中不存在物質(zhì)與被測(cè)組分峰靠近能與各組分完全分離與被測(cè)組分量靠近藥物分析維生素第75頁校正因子：藥物分析維生素第76頁WWKK%VitE%10012=稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)樣對(duì)實(shí)際工作中計(jì)算方法××××藥物分析維生素第77頁（二）HPLC法外標(biāo)法另外，還有鈰量法、比色法和熒光法返回藥物分析維生素第78頁氨基嘧啶環(huán)－CH2－噻唑環(huán)(季銨堿)第四節(jié)維生素B1HClCl-藥物分析維生素第79頁（一）溶解性1、易溶于水2、水溶液呈酸性（二）UV共軛雙鍵λmax=246nm結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、藥物分析維生素第80頁與生物堿↓→↓（三）硫色素反應(yīng)（四）嘧啶環(huán)——噻唑環(huán)——（五）鹽酸根呈氯化物反應(yīng)，用于判別。藥物分析維生素第81頁ChP判別試驗(yàn)二、（一）硫色素反應(yīng)藥物分析維生素第82頁藥物分析維生素第83頁硫色素＋2H藥物分析維生素第84頁VitB1H+H+H+H+（二）沉淀反應(yīng)藥物分析維生素第85頁S元素反應(yīng)Cl-反應(yīng)（三）其它反應(yīng)()瘆緘緘緘緘緘21PbSNaSVitBNO3PbNaOH藥物分析維生素第86頁三、含量測(cè)定喹那啶紅－亞甲藍(lán)（紫紅→天藍(lán)）（一）非水溶液滴定法藥物分析維生素第87頁反應(yīng)摩爾比為1：2藥物分析維生素第88頁UV法（二）藥物分析維生素第89頁片劑、注射劑=421（每片）相當(dāng)于標(biāo)示量%=A=ECL規(guī)格g/片g/100mlgChPWEA%cmD10011磢××%100標(biāo)示量平均片重××藥物分析維生素第90頁（每ml）相當(dāng)于標(biāo)示量%=規(guī)格g/mlml%VEA%cm100110011磢磢磢×標(biāo)示量稀釋倍數(shù)××藥物分析維生素第91頁畗（三）硫色素?zé)晒夥ㄔ?、熒光硫色素異丁醇鐵氰化鉀緘緘畗緘緘緘緘畗1VitBNaOH藥物分析維生素第92頁特點(diǎn)2、（1）靈敏度高，線性范圍寬（2）代謝產(chǎn)物不干擾，適合用于體液分析藥物分析維生素第93頁第五節(jié)維生素CL－抗壞血酸藥物分析維生素第94頁1、易溶于水2、水溶液呈酸性結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、（一）溶解性藥物分析維生素第95頁二烯醇結(jié)構(gòu)二酮基結(jié)構(gòu)二烯醇結(jié)構(gòu)（二）還原性藥物分析維生素第96頁有活性有活性無活性藥物分析維生素第97頁△糖類顯色反應(yīng)50℃結(jié)構(gòu)與糖類相同（三）具糖性質(zhì)藥物分析維生素第98頁C3－OHpKa=4.17C2－OHpKa=11.57酸性（四）一元酸藥物分析維生素第99頁L(+)－抗壞血酸活性最強(qiáng)手性C（C4、C5）（五）光學(xué)活性**藥物分析維生素第100頁與堿反應(yīng)（六）水解性藥物分析維生素第101頁藥物分析維生素第102頁與氧化劑反應(yīng)（一）判別試驗(yàn)二、去氫抗壞血酸緘緘畗緘]O[VitC藥物分析維生素第103頁1、與AgNO3反應(yīng)2、與2，6-二氯靛酚反應(yīng)(ChP)氧化型玫瑰紅色還原型藍(lán)色OHˉ(ChP)藥物分析維生素第104頁（玫瑰色）（無色）藥物分析維生素第105頁3.其它氧化劑反應(yīng)：亞甲藍(lán)或高錳酸鉀試劑褪色

堿性酒石酸銅磚紅色沉淀

磷鉬酸鉬藍(lán)

藥物分析維生素第106頁糖類反應(yīng)（二）或鹽酸50℃吡咯USP藥物分析維生素第107頁藥物分析維生素第108頁（藍(lán)色）(糠醛)（戊糖）50℃(吡咯)藥物分析維生素第109頁UV（三）BP0.01mol/LHCl藥物分析維生素第110頁三、雜質(zhì)檢驗(yàn)1.溶液澄清度與顏色：有色雜質(zhì)分光光度法

2.鐵、銅離子：原子吸收分光光度法藥物分析維生素第111頁指示劑淀粉指示液原理1、碘量法（一）含量測(cè)定四、藥物分析維生素第112頁H+藥物分析維生素第113頁

取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，馬上用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于8.806mgC6H8O6方法2、藥物分析維生素第114頁（1）酸性環(huán)境d.HCl

（2）新沸冷H2O減慢VitC被O2氧化速度討論3、（3）馬上滴定趕走水中O2降低O2干擾藥物分析維生素第115頁（4）附加劑干擾排除片劑——滑石粉——過濾注射劑——抗氧劑——丙酮甲醛Na2SO3NaHSO3

Na2S2O3Na2S2O5藥物分析維生素第116頁CHHOOaS3aSO+H2NHON2252HONHCOS3a藥物分析維生素第117頁2，6-二氯靛酚鈉滴定法法（二）USPJP原理1、酚亞胺二氯靛酚緘緘畗，-62VitC藥物分析維生素第118頁本身指示終點(diǎn)法方法2、藥物分析維生素第119頁（2）快速滴定2min內(nèi)

（1）酸性環(huán)境HPO3-HAc

穩(wěn)定VitC預(yù)防其它還原性物質(zhì)干擾（3）剩下比色測(cè)定

（定量過量）（測(cè)剩下染料）討論3、藥物分析維生素第120頁（4）缺點(diǎn)

需經(jīng)常標(biāo)定貯存≤一周不穩(wěn)定干擾多氧化力較強(qiáng)藥物分析維生素第121頁

公元前3500年-古埃及人發(fā)覺能防治夜盲癥物質(zhì)，也就是以后維A。

1600年-醫(yī)生勉勵(lì)以多吃動(dòng)物肝臟來治夜盲癥。

1747年-蘇格蘭醫(yī)生林德發(fā)覺檸檬能治壞血病，也就是以后維C。

1831年-胡蘿卜素被發(fā)覺。

1905年-甲狀腺腫大被碘治愈。

1911年-波蘭化學(xué)家豐克為維生素命名。

1915年-科學(xué)家認(rèn)為糙