植物生理學(xué)實驗專家講座

徐芬芬植物生理學(xué)試驗上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心植物生理學(xué)實驗第1頁植物生理學(xué)試驗室規(guī)則

1、認(rèn)真預(yù)習(xí)試驗。明確目標(biāo)，掌握原理，列出步驟，提出問題。

2、認(rèn)真操作，仔細(xì)觀察，從實統(tǒng)計。

3、正確操作儀器，不亂開儀器。

4、注意安全和清潔衛(wèi)生（包含值日）。

5、正確處理廢物。上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物試驗示范中心植物生理學(xué)實驗第2頁試驗匯報要求試驗原理：簡明扼要；材料：用什么？方法：實際操作過程；數(shù)據(jù)計算：原始數(shù)據(jù)，計算公式，結(jié)果。討論和分析：針對自己結(jié)果進行。試驗匯報在下一次試驗時上交，但試驗原始數(shù)據(jù)須經(jīng)指導(dǎo)老師審核后才可離開。上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心植物生理學(xué)實驗第3頁植物生理學(xué)試驗評分標(biāo)準(zhǔn)課上：1、預(yù)習(xí)匯報2、認(rèn)真試驗，操作規(guī)范，試驗結(jié)果符合要求3、不遲到，不早退，主動參加衛(wèi)生清掃上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心植物生理學(xué)實驗第4頁課下：試驗匯報評分標(biāo)準(zhǔn)1、卷面清潔，字跡工整10分2、語句通暢，簡明扼要，邏輯性強，表示準(zhǔn)確無概念錯誤20分3、預(yù)習(xí)匯報、試驗原始統(tǒng)計、試驗匯報齊全15分4、試驗匯報格式規(guī)范，重點突出15分5、試驗原始統(tǒng)計要如實認(rèn)真統(tǒng)計實際操作、察及測定結(jié)果20分6、對試驗結(jié)果討論要充分有據(jù)，論點要正確，與該試驗無關(guān)內(nèi)容不要寫入?yún)R報中20分7、剽竊他人匯報者0分生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第5頁本學(xué)期試驗內(nèi)容與安排

1、質(zhì)壁分離法測定植物組織滲透勢

2、植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量測定3、葉綠素a、b含量測定

4、赤霉素對水稻α-淀粉酶誘導(dǎo)形成5、植物呼吸強度測定

6、

種子活力快速測定—氯化三苯基四氮唑(TTC)法及紅墨水法7、丙二醛含量測定生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第6頁試驗一

質(zhì)壁分離法測定植物組織滲透勢

生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第7頁一、試驗?zāi)繕?biāo)、原理[試驗?zāi)繕?biāo)]觀察植物組織在不一樣濃度溶液中細(xì)胞質(zhì)壁分離產(chǎn)生過程及其用于測定植物組織滲透勢測定[試驗原理]原生質(zhì)層（細(xì)胞膜、原生質(zhì)、液泡膜）含有選擇透過性，近似于半透膜，一個成熟植物細(xì)胞就是一個完整滲透裝置：當(dāng)外界溶液濃度大于細(xì)胞液濃度時(高滲溶液），細(xì)胞失水，發(fā)生質(zhì)壁分離；當(dāng)外界溶液濃度小于細(xì)胞液濃度時（低滲溶液），細(xì)胞吸水；當(dāng)植物組織細(xì)胞內(nèi)汁液與其周圍某種溶液處于滲透平衡狀態(tài)，當(dāng)外界溶液濃度等于細(xì)胞液濃度時（等滲溶液），植物細(xì)胞內(nèi)壓力勢為零時，細(xì)胞汁液滲透勢就等于該溶液滲透勢。細(xì)胞水勢等于細(xì)胞液滲透勢等于外界溶液滲透勢。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第8頁

質(zhì)壁分離及質(zhì)壁分離復(fù)原將植物組織置于對其無毒害一系列不一樣濃度溶液里處理一定時間，然后鏡檢發(fā)生質(zhì)壁分離情況，細(xì)胞等滲濃度將界于剛才引發(fā)初始質(zhì)壁分離濃度和不能引發(fā)質(zhì)壁分離濃度之間。代入公式即可計算滲透勢。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第9頁二、材料、器材與試劑1試驗材料洋蔥表皮2試驗儀器顯微鏡，載玻片，蓋玻片，鑷子，刀片，培養(yǎng)皿，記號筆，滴管。3試驗試劑分別配制0.50、0.45、0.4、0.35、0.30、0.25、0.20、0.15、0.10mol/L蔗糖溶液，貯9個試劑瓶中。稱34.23g蔗糖用蒸餾水配成100ml，其濃度為1mol/L(母液)。再配制成以下各種濃度：0.50mol/L：吸母液25ml+水25ml0.45mol/L：吸母液22.5ml+水27.5ml0.40mol/L：吸母液20.0ml+水30.0ml0.35mol/L：吸母液17.5ml+水32.5ml0.30mol/L：吸母液15.0ml+水35.0ml0.25mol/L：吸母液12.5ml+水37.5ml

0.20mol/L：吸母液10.0ml+水40.0ml

0.15mol/L：吸母液7.5ml+水42.5ml

0.10mol/L：吸母液5.0ml+水45.0ml生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第10頁三、實驗步驟1.取6套潔凈清潔小培養(yǎng)皿，用記號筆編號，將配制好不一樣濃度蔗糖溶液按次序倒入各個培養(yǎng)皿中使成一薄層，蓋好皿蓋。2.選取有色素洋蔥鱗片外表皮快速分別投入各種濃度蔗糖溶液中，每個培養(yǎng)皿中放材料3個左右，使其完全浸沒，浸泡20分鐘左右。3.到時后，取出表皮，放在載玻片上，滴一滴相同濃度蔗糖，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察質(zhì)壁分離細(xì)胞數(shù)假如全部細(xì)胞都產(chǎn)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象，則取低濃度溶液中制片做一樣觀察，并統(tǒng)計質(zhì)壁分離相對程度。上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心植物生理學(xué)實驗第11頁4.在試驗中確定一個引發(fā)半數(shù)以上細(xì)胞原生質(zhì)剛才從細(xì)胞壁角隅上分離最低濃度，和不引發(fā)質(zhì)壁分離最高濃度。5.在找到上述濃度極限時，用新溶液和新鮮葉片重復(fù)進行幾次，直到有把握為止。在此條件下，細(xì)胞滲透勢與兩個極限溶液濃度之平均值滲透勢相等。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第12頁6．計算求得C1按下式計算滲透勢按ψπ=-iRTC1計算水勢值。C＝等滲溶液質(zhì)量摩爾濃度，單位是mol/kg；R＝氣體常數(shù)（0.008314MPa/L/mol/K）T＝絕對溫度i＝解離系數(shù)（蔗糖＝1，CaCl2＝2.60）生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第13頁【思索題】

用質(zhì)壁分離法測定植物細(xì)胞滲透勢與用小液流法測定植物組織水勢都是以外液濃度算出溶質(zhì)勢為依據(jù)，他們之間區(qū)分何在。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第14頁試驗二

植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量測定生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第15頁一、試驗?zāi)繕?biāo)、原理[試驗?zāi)繕?biāo)]硝態(tài)氮是植物最主要氮源。植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量往往能反應(yīng)土壤中硝態(tài)氮供給情況，所以可作為土壤肥氮肥指標(biāo)。測定植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量，不但能夠反應(yīng)出植物氮素營養(yǎng)情況，而且對判定蔬菜和植物為原料加工制品品質(zhì)也有主要意義。[試驗原理]

在濃酸條件下，NO3-與水楊酸反應(yīng)，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在堿性條件下（PH>12）呈黃色，在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與含量成正比，可直接比色測定。

上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心植物生理學(xué)實驗第16頁二、材料、設(shè)備儀器及試劑（一）材料白菜葉片（二）儀器設(shè)備及試劑1試驗儀器722型分光光度計、電子天平。

2試驗試劑（1）

500ppmNO3-標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確稱取烘至恒重KNO30.7221克溶于無離水中，定容至200ml。

（2）

5%水楊酸一硫酸溶液稱取5克水楊酸溶于100ml，濃硫酸中（密度為1.84），攪拌溶解后，貯于棕色瓶中。置冰箱保留一周有效。

（3）8%氫氧化納溶液稱取10克氫氧化納溶于1升無離子水中即可。

生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第17頁三、試驗步驟1.標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

（1）吸收500ppmNO3-標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml.2ml.3ml.4ml.6ml.8ml.10ml.12ml分別放入501ml容量瓶中，用無離子定至刻度，使之成10、20、30、40、60、80、100、120ppm系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（2）吸收上述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液0.11ml，分別放入刻度試管中，以0.11ml無離子水代替標(biāo)準(zhǔn)溶液作空白，再分別加入0.4ml水楊酸一硫酸溶液，搖勻，在室溫下放置20分鐘后再加入8%NaOH溶液9.51ml搖勻冷卻至室溫，顯色液總體積為101ml。

（3）以空白作參比，在410nm波長下測定吸光度。以NO3-N濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心植物生理學(xué)實驗第18頁三、試驗步驟

2.樣品中硝酸鹽測定

（1）樣品液制備，取一定量植物材料剪碎混勻后，準(zhǔn)確稱取2-3克分別放入三支刻度試管中，加入10ml無離子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30分鐘，到時間后取出，用自來水冷卻，將是取液過濾到25ml容量瓶中，并重復(fù)沖洗殘渣，最定容至刻度。

（2）樣口液測定吸收樣品0.1ml分別于三支刻度試管中，然后加入5%水楊酸一硫酸溶液0.4ml，混勻后置室溫下20分鐘，再慢慢加入9.5ml8%NaOH溶液，待冷卻至室溫后，以空白作參比，在410nm波長下測期吸光度。在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得或用回歸方程計算出NO3--N濃度，再用下公式計算其含量。

生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第19頁

四、結(jié)果計算四氮唑還原強度：根重（g）×?xí)r間(h)mg/g(根鮮重)/h=四氮唑還原量（mg）生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第20頁試驗三

葉綠素a、b含量測定生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第21頁一、試驗?zāi)繕?biāo)、原理[試驗?zāi)繕?biāo)]

在未經(jīng)分離葉綠體色素溶液中測定葉綠素a和b方法及其計算。[試驗原理]假如混合液中兩個組分，它們光譜吸收峰即使有顯著差異，但吸收曲線彼此有重合，在這種情況下要分別測定兩個組分，可依據(jù)朗伯-比爾（Lambert-Beer）定律，經(jīng)過代數(shù)方法，計算一個組分因為另一個組分存在時對光密度影響，最終分別得到兩種組分含量。依據(jù)葉綠素a和b吸收光譜曲線，葉綠素a最大吸收峰在663nm，葉綠素b最大吸收峰在645nm,吸收曲線彼此又有重合。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第22頁生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第23頁生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第24頁依據(jù)朗伯-比爾定律，最大吸收光譜峰不一樣兩個組分混合液，它們濃度C與光密度OD之間有以下關(guān)系：OD1=Ca·ka1+Cb·kb1(1)OD2=Ca·ka2+Cb·kb2(2)式中，ka1、ka2、kb1、kb2分別為組分a、b在濃度1g/L時，對應(yīng)波長為λ1、λ2時光密度OD值，即比吸收系數(shù)。波長/nm葉綠素a葉綠素b66382.049.2764516.7545.60將表中數(shù)值代入（1）、（2）式，并解方程可得：Ca=0.00127OD663-0.00269OD645(3)Cb=0.0229OD645-0.00468OD663(4)將單位改為mg/L，于是總?cè)~綠素濃度為CT=Ca+Cb=8.02OD663+20.21OD645(5)生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第25頁1試驗儀器高級型分光光度計，離心機，天平，剪刀，研缽，漏斗，移液管等。2試驗試劑丙酮，碳酸鈣，石英砂。3試驗材料大葉黃楊葉片。二、試驗材料、儀器與設(shè)備生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第26頁稱取新鮮葉片0.5g→加純丙酮5ml研磨成勻漿→再加80%丙酮5ml，并轉(zhuǎn)入離心管→充分洗滌研缽→離心→定容至20ml→取上述提取液1ml，加80%丙酮4ml稀釋后轉(zhuǎn)入比色杯中，以80%丙酮為對照，測定光密度→計算各種濃度（Ca、Cb）。三、試驗步驟生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第27頁四、試驗結(jié)果計算將測定得到吸光值代入下面式子：Ca=13.95A665－6.88A649Cb=24.96A649－7.32A665Cr=18.08A649+6.63A665

（Ca、Cb：mg/L）葉綠素含量（mg/g）=[葉綠素濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)]/樣品鮮重生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第28頁1因為植物葉子中含有水分，故先用純丙酮進行提取，以使色素提取液中丙酮最終濃度近似80%。2因為葉綠素a、葉綠素b吸收峰很陡，儀器波長稍有偏差，就會使結(jié)果產(chǎn)生很大誤差。五、注意事項生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第29頁六、試驗作業(yè)1、為何提取色素時先用純丙酮提取，再用80%丙酮提??？2、依據(jù)你試驗結(jié)果計算出該種植物葉綠素a、b比值。3、依據(jù)你試驗結(jié)果，計算出該植物每克鮮重葉片中葉綠素含量（單位用mg·g-1FW表示）生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第30頁試驗四

赤霉素對水稻α-淀粉酶誘導(dǎo)形成生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第31頁一、試驗?zāi)繕?biāo)、原理[試驗?zāi)繕?biāo)]1．經(jīng)過試驗深入了解赤霉素在種子萌發(fā)過程中調(diào)控作用。2．掌握測定α-淀粉酶活一個簡便方法[試驗原理]淀粉性種子在萌動過程中，胚釋放出來赤霉素能誘導(dǎo)糊粉層細(xì)胞中α-淀粉酶基因表示，引發(fā)α-淀粉酶生物合成，并分泌到胚乳中催化淀粉水解為糖。外源赤霉素能代替胚分泌作用，誘導(dǎo)α-淀粉酶形成。β-淀粉酶也能將淀粉水解成還原糖，但β-淀粉酶不耐熱，在高溫下易鈍化。將酶液在高溫下維持一段時間，鈍化β-淀粉酶，可準(zhǔn)確測定α-淀粉酶活性。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第32頁二、試驗材料、儀器、試劑1試驗材料：水稻種子

2試驗儀器設(shè)備：分光光度計、恒溫箱、

水浴鍋、

移液管、

燒杯、

試管、青霉素小瓶、鑷子、刀片。

3試驗試劑：2mol/LNaOH溶液、1%淀粉溶液、20mg/L赤霉素溶液、0.1mol/L(PH5.6)檸檬酸緩沖液、2，3，5-二硝基水楊酸（DNS）試劑生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第33頁三、試驗步驟1.水稻種子選擇和預(yù)處理選取大小一致、健康水稻種子，一份放入盛有適量20mg/LGA溶液中，另一份放入盛有適量清水培養(yǎng)皿中處理24h,取出后用清水沖洗，置于培養(yǎng)箱中再陪養(yǎng)1d，處理與培養(yǎng)溫度均為30℃。2.酶提取取對照和GA3處理培養(yǎng)種子2g→磨成勻漿→到入50ml容量瓶中→用蒸餾水定容至刻度→混勻→放置15-20min（每2min震蕩一次）→離心（4000r/min,15min）生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第34頁3.α-淀粉酶活性測定取試管4只→編號（清水試驗；清水調(diào)零；GA3試驗；GA3調(diào)零）→每管中各加入酶液1ml→70℃恒溫水浴加熱12min→各加入1ml檸檬酸緩沖液→①將試驗管置于40℃恒溫水浴15min→再快速加入預(yù)熱淀粉溶液2ml→40℃恒溫水浴5min→加入NaOH溶液0.5ml終止反應(yīng)；②調(diào)零管中加入2mol/LNaOH溶液0.5ml→混勻→加入預(yù)熱淀粉溶液2ml.4.樣品測定取以上各管中溶液1ml于15ml刻度試管中→加入DNS試劑1ml→混勻→沸水煮沸5min→快速冷卻→定容至12ml→520nm波長測定OD值。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第35頁四、結(jié)果計算

α-淀粉酶活性=（OD520×稀釋倍數(shù)）/樣品鮮重/反應(yīng)時間生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第36頁試驗五

植物呼吸強度測定生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第37頁一、原理利用NaOH溶液滴定呼吸過程中釋放CO2，試驗結(jié)束后，用草酸溶液滴定殘留NaOH，從空白和樣品二者消耗草酸溶液之差，即可計算出呼吸過程中釋放CO2量。C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O2NaOH+CO2→Na2CO3+H2O2NaOH+C2H2O4(草酸)→Na2C2O4(草酸鈉)+2H2O生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第38頁二、材料、儀器設(shè)備及試劑1.試驗儀器錐形瓶，秒表，酸式滴定管，移液管，尼龍網(wǎng)袋2個。2.試驗試劑1/44mol/L草酸溶液，0.2MNaOH溶液，1%酚酞。3.試驗材料萌發(fā)水稻種子（48h）。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第39頁三、試驗步驟

1.稱取萌發(fā)水稻種子10g，裝入尼龍小袋內(nèi)，把小袋系到錐形瓶塞小鉤上。2.用移液管吸收20mlNaOH加入錐形瓶中，塞緊瓶塞并馬上計時。3.試驗進行30分鐘，其間每隔數(shù)分鐘輕輕搖瓶內(nèi)堿液數(shù)次。4.打開錐形瓶塞，滴入酚酞2滴，馬上用草酸滴定，滴定至紅色突然消失，記下滴定樣品消耗草酸※用量。5.另稱取萌發(fā)水稻種子10g，用沸水煮5-10分鐘，作一樣測定，以此為對照。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第40頁四、試驗結(jié)果用對照煮過種子消耗草酸量v0ml減去萌發(fā)樣品消耗草酸量v1ml，按每秒消耗1ml草酸相當(dāng)于1mgCO2來計算種子在呼吸時放出CO2mg數(shù)。呼吸強度（mgCO2?g-1FW?s-1）=1mgCO2?(v0-v1)?W-1?t-1式中，W為樣品質(zhì)量（克），t為呼吸連續(xù)時間（秒）生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第41頁五、試驗作業(yè)1.影響呼吸強度原因有哪些？2.為何用草酸滴定而不用鹽酸或硫酸滴定？3.依據(jù)你試驗結(jié)果，計算出水稻種子呼吸強度（單位用mgCO2·g-1FW·h-1表示）生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第42頁試驗六

種子活力快速測定

氯化三苯基四氮唑(TTC)法及紅墨水法生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第43頁一、試驗?zāi)繕?biāo)、原理[試驗?zāi)繕?biāo)]

熟悉氯化三苯基四氮唑(TTC)法及紅墨水法測定種子活力方法及其計算?！驹囼炘怼糠灿猩盍ΨN胚在呼吸作用過程中都有氧化還原反應(yīng)，而無生活力種胚則無此反應(yīng)。當(dāng)TTC溶液滲透種胚活細(xì)胞內(nèi)，并作為氫受體被脫氫輔酶(NADH2或NADPH2)還原時，可產(chǎn)生紅色三苯基甲(TTＦ)，胚便染成紅色。當(dāng)種胚生活力下降時，呼吸作用顯著減弱，脫氫酶活性亦大大下降，胚顏色改變不顯著，故可由染色程度推知種子生活力強弱。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第44頁二、材料、儀器設(shè)備及試劑1儀器培養(yǎng)皿2套；鑷子1把；單面刀片1片；墊板(切種子用)1塊；燒杯1個；棕色試劑瓶；解剖針1把；搪瓷盤1個；PH試紙。2試劑TTC溶液配制：取3gTTC溶于1L蒸餾水或冷開水中，配制成0.1％TTC溶液。藥液PH應(yīng)在6.5～7.5，以PH試紙試之(如不易溶解，可先加少許酒精，使其溶解后再加水)。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第45頁三、試驗步驟1將水稻新種子、陳種子或死種子，用溫水(30℃)浸泡2～6H，使種子充分吸脹。2隨機取種子2份，每份200粒，沿種胚中央準(zhǔn)確切開，取每粒種子二分之一備用。3把切好種子分別放在培養(yǎng)皿中，加TTC溶液，以浸沒種子為度。4放入30～35℃恒溫箱內(nèi)保溫30Min。也可在20℃左右室溫下放置40～60Min。5保溫后，傾出藥液，用自來水沖洗2～3次，馬上觀察種胚著色情況，判斷種子有沒有生活力。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第46頁四、注意事項1．TTC溶液最好現(xiàn)用現(xiàn)配，如需貯藏則應(yīng)貯于棕色瓶中，放在陰涼黑暗處，如溶液變紅則不可再用。2．染色溫度普通以25～35℃為宜。3．判斷有生活力種子應(yīng)具備特征：胚發(fā)育良好、完整、整個胚染成鮮紅色；子葉允許有小部分壞死，但其部位不是胚中軸和子葉連接處；胚根尖雖有小部分壞死，但其它部位完好。4．判斷無生活力種子應(yīng)具備特征：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子葉不染色或喪失機能組織超出1／2；胚染成很淡紫紅色或淡灰紅色；子葉與胚中軸連接處或在胚根上有壞死部分；胚根受傷以及發(fā)育不良未成熟種子。5．對于不一樣作物種子生活力測定，所需試劑濃度、浸泡時間、染色時間不一樣。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第47頁紅墨水染色法【試驗原理】有生活力種子其胚細(xì)胞原生質(zhì)含有半透性，含有選擇吸收外界物質(zhì)能力，一些染料如紅墨水中酸性大紅G不能進入細(xì)胞內(nèi)，胚部不染色。而喪失活力種子其胚部細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失了選擇吸收能力，染料進入細(xì)胞內(nèi)使胚部染色，所以可依據(jù)種子胚部是否染色來判斷種子生活力。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第48頁儀器與試劑儀器與TTC法相同試劑紅墨水溶液配制：取市售紅墨水稀釋20倍(1份紅墨水加19份自來水)作為染色劑。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第49頁試驗步驟1.先將待測種子用水浸泡3～4H，待充分吸脹后取出一部分種子，在沸水中煮沸3～5Min，作為死種子。2.取浸好新種子、陳種子和死種子各50粒，如為小麥和玉米，則用單面刀片沿胚部中線縱切成兩半，其中二分之一用于測定。3.將準(zhǔn)備好種子分別放在培養(yǎng)皿內(nèi)，加入紅墨水溶液，以浸沒種子為度。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第50頁4.染色10～20Min后傾出溶液，用自來水重復(fù)沖洗種子，直到所染顏色不再洗出為止。5.對比觀察沖洗后新種子、陳種子和死種子胚部著色情況。凡胚部不著色或略帶淺紅色者，即含有生活力種子，若胚部染成與胚乳相同紅色，則為死種子。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第51頁思索題TTC法和紅墨水測定種子生活力有何不一樣？生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第52頁試驗七

丙二醛含量測定生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實驗第53頁一、試驗?zāi)繕?biāo)、原理[試驗?zāi)繕?biāo)]熟悉葉片中丙二醛（MDA）測定方法及其計算。[試驗原理]植物器官衰老或在逆境下遭受傷害，往往發(fā)生膜脂過氧化作用，丙二醛（MDA）是膜脂過氧化作用最終分解產(chǎn)物，其含量能夠反應(yīng)植物遭受逆境傷害程度。丙二醛在酸性和高溫條件，能夠與硫代巴比妥酸（TBA）反應(yīng)生成紅棕色三甲川（3,5,5—三甲基惡唑2,4-二酮），在532nm處有最大光吸收，在600nm處有最小光吸收，該復(fù)合物吸光