消毒、滅菌效果的監(jiān)測制度與方法的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

感染控制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程上海交通大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院醫(yī)院感染管理科感染控制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程上海交通大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院醫(yī)院感染管理科PAGEPAGE4頁-8頁消毒、滅菌效果的監(jiān)測制度與方法的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程適用對象： 使用消毒劑及消毒滅菌設(shè)備的科文件編號：RJ-IC-SOP-XDMJXGJC室編寫者：楊莉 審核者：錢培芬 版次：01編寫日期：2007-02-15 審核日期：2007-03-10

執(zhí)行日期：2007-03-15注：本文件程序僅供本院醫(yī)務(wù)人員使用，未經(jīng)同意，不得翻印的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，以幫助各科室做好消毒、滅菌效果的監(jiān)測工作。主要內(nèi)容包括：消毒滅菌設(shè)備的監(jiān)測、醫(yī)療器械消毒滅菌效果的監(jiān)測和醫(yī)院環(huán)境微生物學(xué)監(jiān)測。一、消毒滅菌設(shè)備的監(jiān)測主要包括壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測、環(huán)氧乙烷（EO）滅菌效果監(jiān)測和紫外線消毒效果監(jiān)測。（一）壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測化學(xué)監(jiān)測出指示管(卡)，根據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達(dá)到滅菌條件。包外，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，觀察其顏色的改變，以指示是否經(jīng)過滅菌處理。條件，判為滅菌合格；若其中之一未達(dá)到規(guī)定的條件，則滅菌過程不合格。4）B-D試驗(yàn)：對預(yù)真空和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌，每日進(jìn)行一次B-D試驗(yàn)。將B-D測試紙包水平放于滅菌柜內(nèi)滅菌架(車)的底層靠近排氣口處，柜內(nèi)除測試包外無任何物品。經(jīng)132℃,3.5min后,取出一次性B-D包觀察顏色變化。均勻一致變色,說明冷醫(yī)院感染管理科地址：新門診B區(qū)606室 聯(lián)系電話：600631，600640空氣排除效果良好,滅菌器可以使用，反之，則滅菌器有冷空氣殘留,測試不合格。新安裝的設(shè)備和大修后設(shè)備應(yīng)該進(jìn)行B-D試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)包測試,試驗(yàn)應(yīng)該重復(fù)3次。5）注意事項(xiàng):監(jiān)測所用化學(xué)指示物須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使用。生物監(jiān)測生物指示物監(jiān)測應(yīng)1月1次。指示菌株:為耐熱的嗜熱脂肪桿菌芽胞(ATCC7953SSIK檢測方法:將兩個(gè)菌片分別裝入滅菌小紙袋內(nèi)（也可使用自含式生物指示物）置于標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包中心部位。滅菌柜室內(nèi)，排氣口上方放置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包(由3件平紋長袖手術(shù)衣，4塊小手術(shù)巾，2塊中手術(shù)巾，1塊大毛巾，30塊10cm×10cm8層紗布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小)。經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，在無菌條件下，取出標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包或通氣貯物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng)56℃±1℃培養(yǎng)7d(自含式生物指示物按說明書執(zhí)行)，觀察培養(yǎng)基顏色變化。檢測時(shí)設(shè)陰性對照和陽性對照。片之一接種的培養(yǎng)基，由紫色變?yōu)辄S色時(shí)，則滅菌過程不合格。（二）環(huán)氧乙烷（EO）滅菌效果監(jiān)測物理檢測法每次滅菌均應(yīng)進(jìn)行程序監(jiān)測?；瘜W(xué)檢測法化學(xué)指示物變色符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)色要求的情況下，產(chǎn)品才可放行。生物指示物檢測法每月用生物指示物檢測一次。生物指示物用枯草桿菌黑色變種芽胞9372）。檢測方法：將一個(gè)裝有菌片又含培養(yǎng)基的自含式生物指示物，放于一個(gè)20ml一個(gè)滅菌周期后，取出的指示菌片接種于含有復(fù)方中和劑的0.5%管中，以未經(jīng)處理的陽性菌片做相同接種，兩者均置于36℃±1℃培養(yǎng)。醫(yī)院感染管理科地址：新門診B區(qū)606室 聯(lián)系電話：600631，600640結(jié)果判定：經(jīng)培養(yǎng)，陽性對照在24h5用。（三）紫外線消毒效果的監(jiān)測紫外線燈管輻照度值的測定需每季度進(jìn)行一次。檢測方法:開啟紫外線燈5min后，將測定波長為253.7nm探頭置于被檢紫外線燈下垂直距離1m外線燈管的輻照度值。結(jié)果判定:普通30w≥90μW/cm用中紫外線燈輻照強(qiáng)度≥70μW/cm2；30W高強(qiáng)度紫外線新燈的輻照強(qiáng)度≥180μW/cm2為合格。3220V±5V，20℃～25℃，相對濕度＜60％，線輻照計(jì)必須在計(jì)量部門檢定的有效期內(nèi)使用。二、醫(yī)療器械滅菌效果的監(jiān)測無菌檢驗(yàn)無菌檢驗(yàn)是指檢查經(jīng)滅菌的敷料、縫線、一次性使用的醫(yī)療用品、無菌器械以及適合于無菌間查的其它品種是否無菌的一種方法。無菌檢驗(yàn)應(yīng)在潔凈度為100無菌檢驗(yàn)前準(zhǔn)備對照管菌液。5件直接浸入6氧培養(yǎng)管(其中一管作陽性對照)與4取5副注射器，在洗脫液中反復(fù)抽吸5養(yǎng)菌培養(yǎng)管(共6管，其中14管)。26醫(yī)院感染管理科地址：新門診B區(qū)606室 聯(lián)系電話：600631，600640其中1管作陽性對照)與霉菌培養(yǎng)基(共4管)。結(jié)果判定:陽性對照在24h管顯混濁并證實(shí)有菌生長，應(yīng)重新取樣，分別同法復(fù)試2注意事項(xiàng)送檢時(shí)間不得超過6h，若樣品保存于24h。100cm2。若消毒因子為化學(xué)消毒劑，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。三、醫(yī)院環(huán)境微生物學(xué)監(jiān)測（一）手和皮膚黏膜消毒效果監(jiān)測采樣時(shí)間:在消毒后立即采樣。采樣方法手的采樣:被檢人五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面積約30c2m)，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。皮膚粘膜采樣:用5cm×5cm1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之10ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。檢測方法20s或用力振打80次，用無菌吸管吸取1.0ml2個(gè)平皿，內(nèi)加入已溶化的45℃～48℃的營養(yǎng)瓊脂15ml～18ml36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。采樣結(jié)果計(jì)算方法：醫(yī)院感染管理科地址：新門診B區(qū)606室 聯(lián)系電話：600631，600640感染控制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程上海交通大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院醫(yī)院感染管理科感染控制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程上海交通大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院醫(yī)院感染管理科平板上菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)細(xì)菌總數(shù)(cfu/cm2)＝────────────────采樣面積(cm2)結(jié)果判定在醫(yī)療機(jī)構(gòu)不同環(huán)境下工作的醫(yī)務(wù)人員，手衛(wèi)生應(yīng)達(dá)到如下要求：埃希菌銅綠假單胞菌為消毒合格。希菌為消毒合格。希菌為消毒合格。母嬰室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門菌、大腸埃希菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。注意事項(xiàng)皮膚粘膜采樣處，若表面不足5cm×5cm可用相應(yīng)面積的規(guī)格板采樣。（二）物品和環(huán)境表面消毒效果監(jiān)測采樣時(shí)間:在消毒處理后進(jìn)行采樣。采樣方法用5cm×5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，采樣面積，連續(xù)采樣4個(gè)，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各510ml含相應(yīng)中和劑結(jié)果判定Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/cm2Ⅲ類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)≤10cfu/cm

2，并未檢出致病菌為消毒合格。2Ⅳ類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)≤15cfu/cm，并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門菌。醫(yī)院感染管理科地址：新門診B區(qū)606室 第5頁-共8頁感染控制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程上海交通大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院醫(yī)院感染管理科感染控制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程上海交通大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院醫(yī)院感染管理科PAGE6頁-8頁（三）空氣消毒效果監(jiān)測采樣方法墻壁1M處；室內(nèi)面積＞30m3，設(shè)4角及中央5點(diǎn)，41m平板暴露法:將普通營養(yǎng)瓊脂平板(直徑為9cm)度為距地面1.5m采樣時(shí)將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露15min，蓋好立即送檢。度距地面1.5m，采樣1min立即送檢。檢測方法：3748h，平板暴露法結(jié)果計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)（cfu/m3）=50000N/ATA為平板面積（c2）為平板暴露時(shí)間（min）為平均菌落數(shù)cfu）。結(jié)果判定平板暴露法Ⅰ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/m3(或0.2cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤200cfu/m3(或4cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；Ⅲ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤500cfu/m3(或10cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。空氣微生物采樣器法Ⅰ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/m3200cfu/3500cfu/3菌為消毒合格。醫(yī)院感染管理科地址：新門診B區(qū)606室 聯(lián)系電話：600631，600640感染控制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程上海交通大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院醫(yī)院感染管理科感染控制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程上海交通大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院醫(yī)院感染管理科PAGEPAGE7頁-8頁診室、化驗(yàn)室、各類普通病房和房間。5.注意事項(xiàng)采樣前，關(guān)好門、窗，在無人走動(dòng)的情況下，靜止10min進(jìn)行采樣。四、中和劑化學(xué)消毒劑處理過的各種采樣標(biāo)本必須經(jīng)過中和作用，方可作微生物檢驗(yàn)，不同消毒劑所對應(yīng)的中和劑詳見下表。消毒劑獨(dú)含氯消毒劑

使用濃度（％）0.1～0.5

相應(yīng)中和劑硫代硫酸鈉

使用濃度（％）0.2～1.0復(fù)方含氯消毒劑0.1～0.5硫代硫酸鈉＋吐溫80＋卵磷脂0.2～1.02.0＋0.3過氧乙酸0.1～0.5硫代硫酸鈉硫代0.1～0.5過氧化氫3.0～6.0硫酸鈉＋吐溫800.5～1.0＋卵磷脂2.0＋0.3碘酊、碘伏0.1～2.5硫代硫酸鈉＋吐溫800.5＋2.0甲醛氣體熏蒸雙甲酮＋嗎林1.0＋0.6戊二醛1.0～2.0甘氨酸＋吐溫