細(xì)胞生物學(xué)研究方法

2-細(xì)胞生物學(xué)研究方【廈大1994年填空-3】【廈大1996年填空-3】【廈大1994年填空-3】【廈大1996年填空-3】細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是一種從機(jī)體內(nèi)過(guò)程的方法。19953】大致可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩種方【廈大2011年判斷-10】正常細(xì)胞培養(yǎng)中除了培養(yǎng)基外常加入，主要是因?yàn)橹邪被帷?錯(cuò),小牛 【廈大1994年問(wèn)答題-3】細(xì)胞工程是什么？它包括哪些研究?jī)?nèi)容？舉例說(shuō)明在實(shí)踐中的應(yīng)用。（16 【廈大2011年問(wèn)答-5】請(qǐng)簡(jiǎn)述單克隆抗體技術(shù)的原理:骨髓瘤細(xì)胞在體外培能大量無(wú)限增殖,但不能分泌特異性抗體；而看抗原免疫細(xì)胞的B能大量無(wú)限增殖,但不能分泌特異性抗體；而看抗原免疫細(xì)胞的B經(jīng)過(guò)HAT培養(yǎng)基(含有次黃嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)和胸腺,嘧啶核苷(T))中 瘤細(xì)胞合成DNA的主要途徑被培養(yǎng)基中的氨基蝶呤阻斷,又因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)不能利用培養(yǎng)基中的次黃嘌呤完成DNA的合成過(guò)。只有融合細(xì)胞具有轉(zhuǎn)移酶才能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。經(jīng)過(guò)克實(shí)驗(yàn)方案:抗原提純與動(dòng)物免疫-骨髓細(xì)胞及飼養(yǎng)細(xì)胞的-細(xì)胞融合-篩選融合細(xì)胞-單克隆抗體的和凍存-單克隆抗體的純化【廈大2010年判斷-19從動(dòng)物有機(jī)體取出細(xì)胞后,立即進(jìn)行培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)【廈大2010年判斷-6】從肺得到的成纖維細(xì)胞可在體外條件下傳50代,20,主要是因?yàn)榧?xì)胞增殖能力是受細(xì)胞限制的。(錯(cuò),與供體的有關(guān),并不是細(xì)胞的)【廈大1995年填空-2】【廈大1999年填空-1】光學(xué)顯微鏡的分辨力是指區(qū)分開(kāi)兩個(gè)質(zhì)點(diǎn)間的最小距離，它與光源的波長(zhǎng)(正比)、物鏡鏡口角(反比)和介質(zhì)的折射率(反比)0.2um『肉眼-0.2mm;電鏡-0.2nm』薄切片厚度的十分之一，因而切得越薄，中的反差越大。（錯(cuò),前半句對(duì),的反差與染色有關(guān),注意切的越薄電鏡的分辨率越好也是不對(duì)的【廈大2009年判斷-16】掃描電子顯微鏡可用于觀察細(xì)胞表面的立體形貌,同時(shí)【廈大2007年選擇-3】掃描電子顯微鏡用于觀察（D）A.活細(xì)胞圖像-相差顯C.細(xì)胞不同切面圖像-激光共聚焦掃描顯微C.細(xì)胞不同切面圖像-激光共聚焦掃描顯微 D.細(xì)胞表面立體圖鏡&倒置顯微鏡B.發(fā)明獲得了獎(jiǎng)，它們分別是相差(1953年)顯微鏡、電子(1986年)顯微鏡、掃描隧道(1986顯微鏡?！緩B大1996填空-2】相差顯微鏡和普通光學(xué)顯微鏡在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別是要染色,可以觀察活細(xì)胞,甚至研究細(xì)胞核、線粒體等細(xì)胞器的動(dòng)態(tài)。細(xì)胞特定的蛋白質(zhì)進(jìn)行定位定性和定量研究。(還可以通過(guò)重組融合蛋白質(zhì)技術(shù)-利用目的蛋白gfp融合生成能發(fā)熒光的蛋白標(biāo)記目的蛋白)【廈大2010年判斷-1】冰凍蝕刻技術(shù)主要用于隧道顯微鏡。(錯(cuò),用于電鏡【廈大2010年】激光共聚焦掃描顯微鏡(Laserconfocalscanning的DNA合成，常用的放射性前體物是3H-TdR，測(cè)定細(xì)胞的RNA合成，常用的放射性前體物是3H-UdR，【廈大1998年填空-2】測(cè)定蛋白質(zhì)合成，常用的放射性前體物是3H-氨基酸(常用35S標(biāo)記甲硫氨酸,3H或14C『補(bǔ)充:3H-甘露糖和3H【廈大2001年實(shí)驗(yàn)-4】簡(jiǎn)述顯微放射自顯影的基本實(shí)驗(yàn)步驟。（6分 射線,如3H、14C、32P、35S、125I)；【生化RNA苷首先摻到核仁);的半保留;分泌蛋白合成分泌所經(jīng)過(guò)的細(xì)胞器;發(fā)能透過(guò)細(xì)胞膜,使DNA和RNA染色)B.hochest33258(結(jié)合DNA發(fā)藍(lán)色熒光 【廈大2010選能透過(guò)細(xì)胞膜,使DNA和RNA染色)B.hochest33258(結(jié)合DNA發(fā)藍(lán)色熒光 溴乙錠(結(jié)合核酸-DNA和 D.FITC(異 酸熒光素-使用范圍廣,可與【廈大1998年判斷-7】all（）【廈大2000年填空-4】細(xì)胞工程所使用的技術(shù)主要是細(xì)胞體外培養(yǎng) 細(xì)胞融合( 等 【廈大2001年填空-10】過(guò)碘酸反應(yīng)(PAS反應(yīng))是用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞中的多【廈大2003年填空-13】中性紅（neutralred）是活細(xì)胞的活性；綠B（JanusgreenB)是線粒體的。【廈大2003選擇-5】一般不選擇哪種同位素標(biāo)記蛋白質(zhì)？C、DNA【廈大1999年判斷-9】采用（Feulgen）染色和細(xì)胞顯微分光光度計(jì)可DNA（DNA【廈大2007年問(wèn)答題-1】簡(jiǎn)述Ｆｅｕｌｇｅｎ反應(yīng)的原理打開(kāi),游離出脫氧核糖醛基能與試劑結(jié)合,形成紫紅色復(fù)合物。在此過(guò)程中,RNA不受影響,故染色具有DNA特異性。(準(zhǔn)確的溫度和鹽酸濃度(1摩爾),適【廈大2009選擇-11】檢測(cè)標(biāo)本中多糖存在,可用什么反應(yīng)?(A)反應(yīng)(PAS)-多糖反應(yīng)(&重氮)-蛋白質(zhì) D.重氮反應(yīng)-蛋白質(zhì)『Gomori【廈大1997年填空-2】【廈大1999年填空-3】超薄切片的染色常采 雙染法。不知【廈大2002問(wèn)答題-2】Penman間纖維結(jié)構(gòu)體系的細(xì)胞分級(jí)抽取方法。（8）Penman失，主要存留細(xì)胞骨架體系。再用Tween40和脫氧膽酸鈉處理，胞質(zhì)中微管、0.25mol/LDNA、RNAA、 B、Tween和脫氧膽酸鈉C、核酸 D、硫酸【廈大2007年填空-1】Ｌａｅｍｍｌｉ等用２ｍｏｌ／ＬＮａＣＬ溶液或硫酸葡聚糖、肝素溶液處理Ｈｅｌａ細(xì)胞中期，去除中（組蛋白和大部分非組蛋白），而發(fā)現(xiàn)非組蛋白骨架，稱為（骨架）?！緩B大2009年填空-9】在細(xì)胞分級(jí)抽提方法中，為了溶解膜系統(tǒng)，用選用試劑【廈大2005年實(shí)驗(yàn)-1】什么是治療性克隆？試述其基本過(guò)程和應(yīng)用?！緩B2011】治療性克隆指把患者體細(xì)胞移植到去核細(xì)胞中形成重組胚，把重組胚 應(yīng)用:由于治療性克隆產(chǎn)生的細(xì)胞、組織或源于患者本身，可以免除免疫排斥,故治療性克隆將會(huì)在生產(chǎn)移植和攻克疾病等方面獲得突破，給生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)技術(shù)帶來(lái)了性的變化?！緩B大2001年實(shí)驗(yàn)-3】試寫出從小鼠取材 標(biāo)本的主要方法步驟（具體數(shù)值從略）（4分 不知【廈大2002年判斷-3】染色質(zhì)鋪展技術(shù)可使人們?cè)陔婄R下直接觀察rRNA轉(zhuǎn)錄的形態(tài)功能?！緩B大2005年實(shí)驗(yàn)-2】已有一瓶長(zhǎng)成致密單層的人肺癌A549細(xì)胞和質(zhì)粒中含有人rRNA克隆的E.coli，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)證明rDNA存在于A549細(xì)胞的哪幾條上。并簡(jiǎn)要闡述其基本原理。 上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì),結(jié)合成專一 該實(shí)驗(yàn)可以通過(guò)原位雜交技術(shù)定位rDNA的位置。設(shè)計(jì)步驟為:1-放射性核 克隆的大腸桿菌菌株,轉(zhuǎn)移到含有32P的培養(yǎng)基培養(yǎng),用 帶有32P標(biāo)記的探針,并配制雜交液；2-制 鋪片，用強(qiáng)堿使DNA變性并進(jìn)行脫水等處理；3-將放射 上的rDNA進(jìn)行雜交；4-顯影和檢測(cè)，用顯微放射【廈大2005實(shí)驗(yàn)-3】已有來(lái)自手術(shù)的新鮮腫瘤樣品及其相應(yīng)的正常組織樣品，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)（寫出主要步驟），以觀察并比較某一癌蛋白在這些表達(dá)差異的觀察-WesternBlot:組織胰蛋白酶酶解-收集細(xì)胞-裂解細(xì)胞- 實(shí)驗(yàn)依據(jù):WesternBlot基本原理是通過(guò)特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過(guò)的 與蛋白質(zhì)之間的相互作用？請(qǐng)以其中法為例來(lái)簡(jiǎn)要說(shuō)明其基本原理． 成特異免疫復(fù)合物，經(jīng)過(guò)洗脫，收集免疫復(fù)合物，然后進(jìn)行SDS-PAGE及Westernblotting分析。免疫共沉淀既可以用于檢驗(yàn)已知的兩個(gè)蛋白不及蛋白親和色譜高，因?yàn)?的蛋白濃度不如后者高，這樣驅(qū)動(dòng)復(fù)合物方法。其原理是當(dāng)靶蛋白和誘餌蛋白特異結(jié)合后，誘餌蛋白結(jié)合于的啟動(dòng)子，啟動(dòng)在酵母細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，如果檢測(cè)到的表達(dá)產(chǎn)驟：①選擇合適酵母作為篩選未知蛋白的受體菌；②誘餌蛋白表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定；③誘餌蛋白自身轉(zhuǎn)錄活性分析；④獵物蛋白cDNA文庫(kù)的構(gòu)建；⑤酵母雙雜交篩選與陽(yáng)性克隆鑒定。優(yōu)點(diǎn)：⑴作用信號(hào)是在融 表達(dá)后，以是表達(dá)產(chǎn)物的積累效應(yīng)，因而可檢測(cè)存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時(shí)的相互作用。⑷酵母雙雜交系統(tǒng)可采用不同組織、、細(xì)胞類型和分化時(shí)期cDNA域，能與其他蛋白形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而引起報(bào) 的表達(dá)，產(chǎn)生"假陽(yáng)★◆：噬茵體展示技術(shù)：在編碼噬菌體外殼蛋 上連接一單克隆抗的的DNA序列，當(dāng)噬菌體生長(zhǎng)時(shí)，表面就表達(dá)出相應(yīng)的單抗，再將噬菌體過(guò)柱， 技術(shù)(Surface smon 振性質(zhì)會(huì)發(fā)生改變，通過(guò)檢測(cè)便可知這兩種蛋白的結(jié)合情況。SPR技術(shù)的優(yōu)點(diǎn) 能量轉(zhuǎn)移（FRET）廣泛用于研究分子間的距離及其相互作用;與熒光顯微鏡結(jié)合，可定量獲取有關(guān)生物 質(zhì)、脂類、DNARNA的時(shí)空信息。隨著綠色熒光蛋白（GFP）的發(fā)展，F(xiàn)RET熒光顯微鏡有可能實(shí)時(shí)測(cè)量細(xì)胞內(nèi)分子的動(dòng)態(tài)性質(zhì)。提出了一種定量測(cè)量FRET★◆抗體與蛋白質(zhì)陣列技術(shù)：蛋白技術(shù)的出現(xiàn)給蛋白質(zhì)組學(xué)研究帶來(lái)水平的量變，微型化，集成化，高通量化的抗體就是一個(gè)非常好的研究工具，他也是中發(fā)展最快的，而且在技術(shù)上已經(jīng)日益成熟。這些抗體芯片有的已經(jīng)在向臨床應(yīng)用上發(fā)展，比如腫瘤標(biāo)志物抗體等，還有很多已經(jīng)【廈大2006年實(shí)驗(yàn)-3】為行使正常的微絲，微管的功能，微絲，微管處于動(dòng)態(tài) 建的:(細(xì)胞融合)【廈大2010選擇-13】分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞融合的是指:D,髓瘤細(xì)胞和小鼠B【廈大2000年判斷-4】通過(guò)單克隆抗體技術(shù)，可以用不純的抗原分子均一【廈大2009填空-7】(分子排阻層析)或(分子篩層析),主要是根據(jù)蛋白質(zhì)的大小和形狀,即蛋白質(zhì)的(分子質(zhì)量)進(jìn)行分離和純化?！緩B大2009判斷-9】Northernblot適用于分析RNA樣品中特定mRNA的大【廈大2011年判斷-12】要探知細(xì)胞內(nèi)某一蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，可以通Northernblot實(shí)現(xiàn)。C.Westernblotting【廈大2010判斷-14】【廈大2011判斷-14】5Kb左右大小的外源片段導(dǎo)入某種植物細(xì)胞中，首選的方法應(yīng)為原生融合。(錯(cuò),首選以【廈大2009年選擇-5】【廈大2009年選擇-19】【廈大2010年選擇-5】以下哪一種媒介或方法可用來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞融合(ACD)A.電 B.乙二 c.滅活的仙 D.滅活的新城雞 【廈大1995年】細(xì)胞雜交(cellhybridization):通過(guò)培養(yǎng)和誘導(dǎo),兩【廈大2010年 (DNAchip):DNA 物上原位合成寡核苷酸或直接將大量的DNA探針以顯微打印的方式有序的 作為固相支持物,所以稱為DNA 2010論述-4】DNA的熒光物質(zhì)對(duì)生長(zhǎng)中的細(xì)胞群體染色,DNADNA，以細(xì)胞數(shù)目為縱坐標(biāo)作圖如下問(wèn)：l)在圖中標(biāo)出你認(rèn)為的下列各期G1、G2/M、sG1-A；S-b；G2/M-2）在這群細(xì)胞中哪一個(gè)時(shí)期最長(zhǎng)A峰高最高,即細(xì)胞數(shù)量最多，表示處于該時(shí)相的細(xì)胞占所有細(xì)胞中的比例最大,也就是該時(shí)相停留時(shí)間最長(zhǎng)。所以該細(xì)胞群在G1期最長(zhǎng)。研究表明:用各種熒光對(duì)經(jīng)固定的凋亡細(xì)胞進(jìn)行染色,其DNA