腫瘤標記物臨床應用

●何謂腫瘤標記物●腫瘤標記物應用的進展●腫瘤標記物的分類●腫瘤標記物應用臨床存在的問題●腫瘤標記物臨床應用評價的指標●腫瘤標記物的應用1第一頁，共47頁。

何謂腫瘤標記物◆腫瘤組織和細胞，由于癌基因及其產(chǎn)物的異常表達，所產(chǎn)生的抗原及生物活性物質(zhì)?！裟[瘤組織侵潤正常組織并引起免疫反應和代謝異常，產(chǎn)生的一些生物活性物質(zhì)。

在腫瘤患者體液或組織中存在的比正常人更高水平的一類物質(zhì)。（如酶、糖蛋白、等）2第二頁，共47頁。

腫瘤標記物應用的發(fā)展階段

19世紀中葉1846—至今已有四個階段1、1846發(fā)現(xiàn)“本周氏蛋白”。

相繼1928-1959發(fā)現(xiàn)HCGACTH。2、1963-1965，甲胎蛋白、癌胚抗原。3、1979年用單克隆抗體識別糖類抗原（carbohyrafeantigen)

CA19-9、CA12-5、CA15-3、CA72.4、等。4、1980年G.CooperM等發(fā)現(xiàn)癌基因。從而腫瘤標記物的檢測從分子水平提高到基因水平。3第三頁，共47頁。腫瘤標記物研究及應用的進展

傳統(tǒng)的方法是通過在系列生化、生理、和分子生物學研究中比較不同的腫瘤中不同基因及產(chǎn)物的表達水平。以此來鑒定各種腫瘤的特異性標記物。

目前腫瘤標記物的研究是通過蛋白質(zhì)組學技術(shù)研究細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的組成和動態(tài)變化。以此確定新的腫瘤標記物。4第四頁，共47頁。

蛋白質(zhì)組學技術(shù)，包括兩個方面:細胞作圖蛋白質(zhì)組學、蛋白質(zhì)表達蛋白質(zhì)組學高通量技術(shù):即生物芯片技術(shù)(biochip)。它包括DNA芯片及蛋白芯片和組織微陣列技術(shù)。生物信息技術(shù):蛋白質(zhì)的數(shù)據(jù)庫，通過蛋白組學的進展建立更多的數(shù)據(jù)庫如人的血漿、尿液、腦脊液、正常和腫瘤蛋白的圖譜。蛋白質(zhì)組學的研究主要包括：5第五頁，共47頁。

腫瘤標記物的分類

近年來由于免疫學、生物化學、分子生物學、細胞工程學、遺傳工程學及相關技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)有腫瘤標記物50多種?？砂雌鋪碓?、成份、生物作用分別為;腫瘤特異性抗原，腫瘤相關抗原，激素、受體、酶和同工酶，癌基因及其有關的單克隆抗體

腫瘤抗原：細胞癌變過程中具有許多大分子的總稱，存在腫瘤細胞膜上。腫瘤特異性抗原：腫瘤細胞上特有的抗原。腫瘤相關抗原：由病毒感染所造成的。與病毒相關的抗原。胚胎性抗原。6第六頁，共47頁。

臨床常用的腫瘤標記物

腫瘤產(chǎn)物標記物;AFP、CEA、PSA。糖脂和糖蛋白類抗原：CA50、CA72-4CA19-9、CA12-5、CA15-3、CA27.29。酶類抗原：CK-BB、NSE（神經(jīng)系統(tǒng)特異性醇化酶、PAP等。激素類抗原;HCG、ACTH、CT等。其它抗原：FER、2–MG、CIC、IL-2、TNF等。7第七頁，共47頁。一

腫瘤標記物應用存在的問題

幾十種腫瘤標記物，但仍不盡人意的，原因至今尚未有一個腫瘤標記物具有器官的特異性腫瘤標記物正常組織產(chǎn)生，非正常組織也產(chǎn)生腫瘤標記物可有一過性的升高或一過性的降低

由于上述缺點可以造成假陰性或者假陽性和只測一項所帶來的偏差，用其聯(lián)合測定的方法提高診斷的特異性和敏感性。8第八頁，共47頁。

臨床評價指標

＊特異性真陰性例數(shù)

良性疾病例數(shù)

（真陰性+假陽性）＊敏感性真陽性例數(shù)癌癥總例數(shù)（真陽性+假陰性）

＊診斷效率特異性×敏感性×100﹪要求;特定器官40-70﹪廣譜30-50﹪

特異性：指一種檢測特定疾病的方法對非疾病測定結(jié)果陰性百分比敏感性：指一種檢測疾病的方法對特定疾病測定結(jié)果陽性百分比×100﹪×100﹪9第九頁，共47頁。（一）AFP的臨床應用AFP(alpha-fetoprotein)屬糖蛋白抗原。由胚胎肝細胞合成，其次由卵黃囊合成，腸上皮細胞少量產(chǎn)生。分泌到血清中。胚胎時的AFP，1-2個月合成，3個月達高峰，5個月后合成下降。分娩時合成停止。主要AFP的生物學作用;①胚胎時起白蛋白的作用。②保持胎兒不被排斥。③具有免疫抑制作用。④促進腫瘤細胞的生長10第十頁，共47頁。AFP的臨床應用

拜耳臨床應用調(diào)查表：1良性疾病(BenignDiseases)的測定統(tǒng)計

11第十一頁，共47頁。（表2)惡性疾病(MalignantDiseases)的AFP水平ng/ml12第十二頁，共47頁。（表3）國內(nèi)學者AFP的統(tǒng)計調(diào)查表13第十三頁，共47頁。

AFP是具有相對特異性腫瘤標記物。在病灶分化程度接近于壞死、變性、癌組織中結(jié)蹄組織太多，AFP合成減少可導致陰性(20-30)﹪。轉(zhuǎn)移性肝癌占10﹪升高。肝硬化一般<200(ng/ml)

。急性肝炎可>400(ng/ml)

。原發(fā)性肝癌AFP與ALT的結(jié)果呈分離相。內(nèi)胚層的腸道腫瘤AFP200ng/ml（胃、結(jié)腸癌)?；ザ嗵FP升高?？偨Y(jié)總結(jié)14第十四頁，共47頁。(2)CEA(carcinoembryonicantigen)的臨床應用

CEA1965年由加拿大學者發(fā)現(xiàn)結(jié)腸腺癌和胎兒結(jié)腸中提取的腫瘤相關抗原,所以被認為是結(jié)、直腸癌的特異性標記。CEA屬腫瘤細胞的結(jié)構(gòu)抗原，在細胞漿中形成，通過細胞膜到細胞外面，然后進入周圍的體液，因此從血清、腦脊液、乳汁、胃液、胸水、及排泄物中均可以檢出。

肝臟是CEA分解代謝的場所。應用中發(fā)現(xiàn)無器官特異性，但準確率較高。15第十五頁，共47頁。（表4）拜耳對CEA測定應用的統(tǒng)計（良﹪ng/ml）16第十六頁，共47頁。表5CEA在惡性疾病中的水平(%ng/ml）17第十七頁，共47頁。

良良

惡惡

<5ng/ml胸水血清灌洗液<5ng/ml>5ng/ml>5ng/ml<5ng/ml>5ng/ml呼吸系統(tǒng)的CEACA12-5+CEA18第十八頁，共47頁。小結(jié)

●

所有內(nèi)胚層來源的腫瘤均有

CEA升高現(xiàn)象

●

結(jié)腸癌有40-60%的升高

●

結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移肝臟陽性高于AFP

●

體液的CEA值高于血清值

●

是療效觀察，愈后復發(fā)的指標19第十九頁，共47頁。CEA(carcinoembryonicantigen)在上述疾病中可以看出敏感度，特異性均很差，但臨床實驗確認聯(lián)合測定可以提高其準確性。20第二十頁，共47頁。

（三）糖類抗原CA12-5的臨床應用

1984年應用放射免疫技術(shù)建立了CA125的單克隆抗體的檢測。CA125廣泛分布在漿膜表面上皮（胸膜、腹膜、心包膜)和苗勒氏管的衍生物(如輸卵管內(nèi)皮、子宮、及宮頸內(nèi)膜）。

OC12-5單抗

如圖說明CA12-5一種與卵巢癌(ocariancencar)相關的抗原。素細胞黑色(±)卵巢漿液細胞（+）其他腫瘤細胞(–)

胚胎細胞(–)21第二十一頁，共47頁。表5CA12-5臨床應用調(diào)查（良)%

病種例數(shù)

>35U/ml

未絕經(jīng)婦女3544.9

絕經(jīng)婦女3045.6懷孕1540喂奶4117月經(jīng)期1118子宮內(nèi)膜增生27

37子宮纖維瘤110

卵巢囊腫3642

盆腔炎1213

胰腺炎

295522第二十二頁，共47頁。

表6CA12-5在惡性腫瘤疾病的水平%病種例數(shù)

>35U/ml手術(shù)前卵巢癌37752胸膜癌2945肺癌3149子宮癌3438腸癌241323第二十三頁，共47頁。表7婦科上皮癌血清CA12-5結(jié)果(國內(nèi)）24第二十四頁，共47頁。文獻報道●

卵巢癌在女性生殖腫瘤中發(fā)病率為第3位，死亡為第一位?！?/p>

在診斷非粘液性卵巢癌時陽性率較高。漿液性卵巢癌100%。●

胸膜炎時可高達長常值得10倍以上，與CEA聯(lián)合測定可鑒別診斷量與惡。腹水大于血漿●

臨床的值于病程分期呈正相關Ⅲ〉Ⅱ〉Ⅰ●

非良性疾病的病例盆腔炎，子宮肌瘤，卵巢腫瘤一般小于正常5倍●

肝硬化有報道78%（55）的升高25第二十五頁，共47頁。卵巢癌

胰腺癌肺癌小結(jié)以上組織在惡性疾病時均由不同程度的增高，聯(lián)合測定，可提高陽性率。CA12-5炎癥3-5倍癌癥>10倍

CA12-5CA12-526第二十六頁，共47頁。（四）

▲

CA19-9是1979年用人的結(jié)腸癌細胞株免疫鼠與骨髓瘤進行雜交所得一株編號為1116NS19-9的單克隆抗體所識別的抗原。1983年應用于臨床90年代得到推廣和使用。在消化道腫瘤中應用之廣。一般認為對胰腺癌、膽囊癌、膽管癌的陽性率在80%以上?，F(xiàn)將國內(nèi)外的報道總結(jié)如下：CA19-9測定的臨床應用27第二十七頁，共47頁。表8

拜耳CA19-9測定結(jié)果（炎癥與癌癥）病種例數(shù)范圍（U/ml)正常人3000-29良性病111-137肝炎肝硬化240-112胰腺炎90-86.2病種例數(shù)范圍U/ml胰腺癌140﹡5.7–13591直腸癌1462–0.88胸膜癌154.8–172.0食道癌95.7–77.5胃癌290–51156肝癌19﹡0–796076卵巢癌150–25828第二十八頁，共47頁。CA19-9國內(nèi)學者的臨床結(jié)果觀察種類例數(shù)%>37.0U/ml食道癌1118.1胃癌6842.7結(jié)腸癌2339.1肝癌1827.8膽囊癌35﹡71.0胰腺癌20﹡75.0小結(jié)胰腺癌、CA19-9CA12-5膽囊癌、CA19-9CEA肝癌、CA19-9AFP29第二十九頁，共47頁。（五）CA15-3的臨床應用⊙糖蛋白抗CA15-3

最早發(fā)現(xiàn)于乳腺癌細胞中。因而作為乳腺癌的診斷標記物應用于臨床。其特異性報道如下：CA15-3良性乳腺病←N=314<38U/ml

N=97>38U/ml→乳腺癌30第三十頁，共47頁。CA15-3種類例數(shù)﹪>38（U/ml)胃癌297腸癌4326肺癌4743胰腺癌4547卵巢癌5056肝癌2055前列腺癌3418子宮癌2013在其它腫瘤疾病的水平31第三十一頁，共47頁。國內(nèi)良與惡性疾病CA15-3的病種例數(shù)

>38.0(U/ml)

范圍U/ml乳腺癌1585920-250卵巢癌587112-250漿液性癌307712-250粘液性癌105014-65子宮內(nèi)膜樣147812-120未分化癌36620-130纖維瘤242012-46子宮內(nèi)膜異位188-25水平32第三十二頁，共47頁。

國內(nèi)時宏珍報道：CA15-3對乳腺癌等腫瘤疾病的診斷是

靈敏度

%

特異性%

乳腺癌65.995.6

肝癌42.080.0

胃癌24.293.7

直腸癌20.6100

CA15-3不應用血漿、肝素使結(jié)果偏低、EDTA是結(jié)果偏高注意：33第三十三頁，共47頁。

（六）PSA的臨床應用☆前列腺特異抗原(PSA)國外推薦應對40-50年齡的高危男性每年進行一次血清學的定量檢查。結(jié)合直腸指檢來篩選，以提高前列腺癌的早期診斷的準確性和特異性。

◆良性前列腺增生升高◆觀察前列腺癌的療效◆判斷轉(zhuǎn)移及預后評價34第三十四頁，共47頁。

PSA分子結(jié)構(gòu)

tPSA5-4035第三十五頁，共47頁。

正常人tPSA4<ng/ml◆PSA>20ng/ml提示前列腺癌▲PSA4-10ng/ml視為灰色區(qū)易造成漏檢?！裼胒PSA/tPSA的比值，及fPSA和cPSA的等分子測定可以解決上述問題，提高特異性。▼

fPSA>25﹪為良性，<10﹪為前列腺癌。36第三十六頁，共47頁。cPSAfPSA在4oC或20oC放置24小時，室溫放置6小時，4oC以下放置一周，其結(jié)果無變化。

在4oC或20oC下24小時4-9﹪的損傷。室溫5.5小時。在離心3.5﹪損傷。在4oC或20oCfPSA/tPSA的比率下降11-13﹪和10-11﹪。37第三十七頁，共47頁。表10拜耳PSA測定的臨床應用（ng/ml)﹪38第三十八頁，共47頁。國內(nèi)吳俊淵在2002年第9卷第1期《標記免疫分析與臨床》報道●當fPSA/tPSA比值在1.3，tPSA<2.0ng/ml時其fPSA/tPSA的敏感度和特異性分別在100﹪和57﹪?！癞斞錿PSA含量大于20.0ng/mlfPSA/tPSA比值的靈敏度和特異性分別在62.1﹪、66.7﹪?！癞攖PSA2-20ng/ml，fPSA/tPSA的敏感度和特異性分別在93.6﹪、89.9﹪.

可見，只有在tPSA2-20ng/ml時，fPSA/tPSA比值才有意義。39第三十九頁，共47頁。cPSA測定的臨床應用

有報道158例經(jīng)病理組織活檢驗證的前列腺增生及前列腺癌患者進行了cPSA、tPSA、fPSA檢測。其中100例前列腺癌患者

cPSA與tPSA兩種指標相比

Χ=8.1P<0.01

cPSA與fPSA/tPSA兩種指標相比Χ=9.39P<0.01

分別在表1和表2、表3所示40第四十頁，共47頁。

表1

100例前列腺癌患者cPSA與tPSA結(jié)果比較

41第四十一頁，共47頁。

表1

100例前列腺癌患者cPSA與fPSA/tPSA結(jié)果比較

42第四十二頁，共47頁。

表3正常人tPSA在灰色區(qū)的前列腺癌（增生）三中指標比較

58例良性前列腺增生的患者中，tPSA明顯增高者22例，占38%，而在22例中cPSA僅2例升高其它20例無明顯變化100例前列腺癌患者中，cPSA升高者95例與