酶工程期末復習2015春_第1頁
酶工程期末復習2015春_第2頁
酶工程期末復習2015春_第3頁
酶工程期末復習2015春_第4頁
酶工程期末復習2015春_第5頁
已閱讀5頁,還剩13頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

(RCF:差速離心細胞破碎的方法:兩相性質(疏水性等)差別增大,蛋白質分子的分配系數(shù)將偏離臨界點處的值(m=1),即大于11。pH還影響系統(tǒng)緩沖物質磷酸鹽的離解程度H2PO4-HPO42-之間的比例,影響相U2-U1,從而影響分系數(shù)。pH微小的變化,有時會使蛋白質的分配系數(shù)發(fā)生巨大的改變(2~3個數(shù)量級3個對應官能團相結合:靜電作用、氫鍵、疏水相互作用、配、勻漿法。;包括:溫度差破碎法、壓力差破碎法、超聲波破碎法。0.02~0.5mol/L的鹽溶(P酶)和核酸酶類(R酶)pH2~6pH8~12細菌L—溶劑的選擇(遵循原則lg

KS (g/L)S00(即純溶劑中的溶解度(g/L);離子半徑小,帶電多,電荷密度高,鹽析效果好(Ks大在一定的溫度和pH值條件下,S0為常數(shù),上式可寫作lgSlgS0KSlgSKSβ:pH值有關。pH和溫度值一定時,β為常數(shù)。溫度影響的值:T,;T,pHpIpH溫度:①與水混合時,會放出大量的稀釋熱,使溶液T顯著升高,對不耐熱的pro影響較大(攪拌、少量多次加入,避免溫度驟然升高)②溫度還會影響對pro的沉淀能力,一般溫度越低,沉淀越完全,所以在乙醇沉淀人血漿蛋白時,溫度控制在-10C、、離心力(RCF:42(rpm)2

FFRCF

c1.1210n 6cm65000rpmRCFRCF

42(65000)2

常速離心機(低速離心機:最大轉速:8000rpm,相對離心力(RCF1×104g;高速離心機:最大轉速:10,000~25,000rpm1×104~1×105g;超速離心機:最大轉速:25,000rpm,相對離心力:5×105g甚至更高。離心時間與液柱長短有關(一般16~18小時轉速較高轉速較低凝膠層析介質種類大分子透過而不發(fā)大;易受微生物侵蝕混合骨架(天然大分葡聚糖-聚丙烯酰胺pHpH將嚴重影響親和作用。在親和pH值的選擇非常重要。離液離子:SCN-,IClO4-等離液陰離子可減弱水分子之間相互作用,使分子缺點:①普遍性、通用性不夠;②費用高pH一種聚合物分子的周圍將同種分子而排斥異種26.雙水相萃取的優(yōu)點:(70%~90%pH:pH影響蛋白質中可解離基團的離解度,從而改變蛋白質所帶電荷和分配系PEG的上相得到回收,同時,含有目標產物的鹽相通過超濾等操作得到分離目PEG★PEGpHpHpH>pI時,蛋白質不能溶入反膠團內,但在等電點附近,急速變?yōu)榭扇?;pH<pIpH范圍內,它們幾乎完全溶入膠團內。pHpI,萃取率也會降低(即立添加KCl等無機鹽,萃取率一般會下降(離子強度增加、靜電作用等,導致靜核酸鏈剪切修飾酶分子修飾的條件:pH值與離子強度、修飾反應的溫度與時間、反應體系中酶與修飾劑(PEG;含(PEG(DNFB(DNS(TNBS(TNM(NBS(HNBB酶分子修飾的常用方法:絲、半胱、、賴、組氨酸等;親電性側鏈基團:芳香環(huán)、吲哚環(huán);親電性取代的氨基1①pH-NH2-NH2-NH2pKa10①羧基在酶蛋白中主要是氨酸和谷氨酸的側鏈—COOH,以及肽鏈的末端羧-①③N-C-①PEGFDA—OH————⑤酶動力學性質:絕大多數(shù)酶經修飾后最大反應速度Vmax沒有變化;有些酶在修飾后,常數(shù)Km通常會增大(AwpH印記pH環(huán)境與酶在凍干或吸附到載體上之前所使用的緩沖液pH相同的現(xiàn)象,或稱pH。分配系數(shù)的對數(shù)(lgP)與酶間具有最好的相關性:lgP越大,溶劑的疏水性越強;lgPpH、醇的消旋化和?;D移。,通過表面活性劑的極性端朝外與水結合,非極性端朝內包在液滴內部,形成一個,Aw而改變反應的平衡點,當體系達到平衡態(tài)時,體Aw值相等。)大,溶劑的疏水性越強;lgP越小,溶劑的親水性越強),DNA重排技術(DNA改組技術從兩種以上的同源正突變出發(fā),用酶切成隨機片段,經過不加引物的多次PCR循環(huán),使DNA的堿基序列重新排布而引起突變的技術易錯PCR技術:是從酶的單一出發(fā),在改變反應條件下進行聚合酶鏈反應,使擴增聚合酶鏈反應技術DNADNA擴增的一種分子生物學技PCR技術。PCRDNA的堿基序列發(fā)生重新排布而引起基DNADNA的重組方法:現(xiàn)物工程對酶的要求PCR①Mn2+③酶構建突構建突 文PCRPCRDNA重組裝原理:①DNaseI③隨機片段復性;重復2-4步,獲得全長DNADNA②在獲得全長之前要除去DNaseIDNA改組相比,隨機引物體外重組技術的優(yōu)點以單鏈DNAmRNAcDNA隨機片段不是由親本切割獲得,大大降低親本DNA的量省去DnaseI隨機合成的DNA片段大小不受DNA模板長度的限制DNA重排與重排的比較DNA源序列進行DNA的多樣化于易錯PCR等反應中產的進化,并且之間存在比較顯著的差DNA雙鏈DNA免除了將外緣DNADNADNAT4DNA1516.枯草桿

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論