高效液相實(shí)驗(yàn)報(bào)告

篇一：高效液相色譜實(shí)驗(yàn)報(bào)告高效液相色譜實(shí)驗(yàn)報(bào)告一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?認(rèn)識(shí)液相色譜的發(fā)展歷史及最新進(jìn)展2學(xué)習(xí)液相色譜的基本構(gòu)造及原理3掌握液相色譜的操作方法和解析方法，可以經(jīng)過(guò)hplc分別測(cè)定來(lái)對(duì)目標(biāo)化合物的解析判斷。二、實(shí)驗(yàn)原理液相色譜法采納液體作為流動(dòng)相，利用物質(zhì)在兩相中的吸附或分配系數(shù)的細(xì)小差異達(dá)到分其他目的。當(dāng)兩相做相對(duì)挪動(dòng)時(shí)，被測(cè)物質(zhì)在兩相之間進(jìn)行屢次多次的質(zhì)量交換，使溶質(zhì)間細(xì)小的性質(zhì)差異產(chǎn)生放大的成效，達(dá)到分別解析和測(cè)定的目的。液相色譜與氣相色譜對(duì)比，最大的長(zhǎng)處是可以分別不行揮發(fā)而擁有必定溶解性的物質(zhì)或受熱后不穩(wěn)固的物質(zhì)，這種物質(zhì)在已知化合物中據(jù)有相當(dāng)大的比率，這也確立了液相色譜在應(yīng)用領(lǐng)域中的地位。高效液相色譜可解析低分子量、低沸點(diǎn)的有機(jī)化合物，更多適用于解析中、高分子量、高沸點(diǎn)及熱穩(wěn)固性差的有機(jī)化合物。80%的有機(jī)化合物都可以用高效液相色譜解析，目前以已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生物工程、制藥工程、食品工業(yè)、環(huán)境檢測(cè)、石油化工等行業(yè)。三、高效液相色譜的分類吸附色譜法、分配色譜法、空間排阻色譜法、離子交換色譜法、親和色譜法、化學(xué)鍵合相色譜法四、高效液相色譜儀的基本構(gòu)造高效液相色譜最少包含輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣器、分別柱、檢測(cè)器和數(shù)據(jù)辦理系統(tǒng)等幾部分。1輸液系統(tǒng)：包含貯液及脫氣裝置、高壓輸液泵和梯度洗脫裝置。貯液裝置用于存貯足夠量、吻合hplc要求的流動(dòng)相。高效液相色譜柱填料顆粒比較小，經(jīng)過(guò)柱子的流動(dòng)相遇到的流動(dòng)阻力很大，所以需要高壓泵輸送流動(dòng)相。2進(jìn)樣系統(tǒng)：將待測(cè)的樣品引入到色譜柱的裝置。液相色譜進(jìn)樣裝置需要滿足重復(fù)性好、死體積小、保證柱中心進(jìn)樣、進(jìn)樣時(shí)引起的流量顛簸小、便于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等多項(xiàng)要求。進(jìn)樣系統(tǒng)包含取樣、進(jìn)樣兩項(xiàng)功能。3分別柱：色譜柱是色譜儀的心臟、柱效高、選擇性好、解析速度快是對(duì)色譜柱的一般要求。商品化的hplc微粒填料，如硅膠和以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球（包含離子交換樹脂）等的粒度平時(shí)在3μm、5μm、7μm、以及10μm。采納的固定相粒度甚至可以達(dá)到1μm，而制備色譜所采納的固定相粒度平時(shí)大于10μm。hplc填補(bǔ)柱效的理論值可以達(dá)到50000/m～160000/m理論板，一般采納100-300mm的柱長(zhǎng)可滿足大多數(shù)樣品的解析的需要。因?yàn)橹?nèi)、外多種要素的影響，所以為使色譜柱達(dá)到其應(yīng)有的效率。應(yīng)盡量的減小系統(tǒng)的死體積。4檢測(cè)系統(tǒng)：hplc檢測(cè)器分為通用型檢測(cè)器和專用型檢測(cè)器兩類。通用型檢測(cè)器可連續(xù)丈量色譜柱流出物（包含流動(dòng)相和樣品組分）的所有特征變化。這種檢測(cè)儀器包含示差折光檢測(cè)器、介電常數(shù)檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器和磁光旋轉(zhuǎn)檢測(cè)器。這種檢測(cè)器適用范圍廣，但是對(duì)于流動(dòng)相有響應(yīng)，受溫度變化、流動(dòng)相流速和構(gòu)成變化的影響，檢測(cè)靈敏度低，不可以用于梯度洗脫的分別模式。專用型檢測(cè)器對(duì)樣品中組分的某種物理或化學(xué)性質(zhì)敏感，可用于丈量被分別組分某類特征的變化。這種檢測(cè)器包含紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器、放射性檢測(cè)器。5數(shù)據(jù)辦理系統(tǒng)：數(shù)據(jù)辦理系統(tǒng)可以分為數(shù)據(jù)辦理系統(tǒng)和專用智能辦理系統(tǒng)兩類，前者可以達(dá)成一般的色譜數(shù)據(jù)辦理任務(wù)，有些軟件可以實(shí)現(xiàn)部分儀器的控制功能。前者即一般的色譜工作站，后者平時(shí)稱之為專家系統(tǒng)。五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)一：數(shù)據(jù)二：1ｈｐｌｃ－ｌ、高效液相色譜的使用中的注意事項(xiàng)流動(dòng)相：、流動(dòng)相應(yīng)采納色譜純?cè)噭?、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過(guò)濾后使用，過(guò)濾時(shí)注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；2、水相流動(dòng)相需常常更換（一般不超出2天），防范長(zhǎng)菌變質(zhì)；樣品：1、采納過(guò)濾或離心方法辦理樣品，保證樣品中不含固體顆粒；2、用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱（若為反相柱，則極性比流動(dòng)相大；若為正相柱，則極性比流動(dòng)相?。┑娜軇┲苽錁悠啡芤海M量用流動(dòng)相制備樣品液；手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量盡量小，使用定量管定量時(shí)，進(jìn)樣體積應(yīng)為定量管的3～5倍；色譜柱：1、使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附加的說(shuō)明書，注意適用范圍，如ph值范圍、流動(dòng)相種類等；2、使用吻合要求的流動(dòng)相；3、使用保護(hù)柱；4、如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇沖洗。5、色譜柱在不使用時(shí)，應(yīng)用甲醇沖洗，取下后密切關(guān)閉兩端保留；6、不要高壓沖洗柱子；7、不要在高溫下長(zhǎng)時(shí)間使用硅膠鍵合相色譜柱；篇二：解析實(shí)驗(yàn)報(bào)告高效液相色譜華南師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告學(xué)號(hào)：專業(yè)：年級(jí)班級(jí)：課程名稱：儀器解析實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：液相色譜解析混雜樣品中的苯和甲苯實(shí)驗(yàn)時(shí)間：一、[實(shí)驗(yàn)?zāi)康?]1、掌握高效液相色譜定性和定量解析的原理及方法2、認(rèn)識(shí)高效液相色譜的構(gòu)造、原理及操作技術(shù)二、[實(shí)驗(yàn)原理:]高效液相色譜法：以液體作為流動(dòng)相的色譜法。它是在經(jīng)典液相色譜實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，引入氣相色譜的理論，在技術(shù)上采納高壓輸液泵，高效固定相和高矯捷的檢測(cè)器，而發(fā)展起來(lái)的迅速分別解析技術(shù)。擁有分別效能高，檢出限低，操作自動(dòng)化和應(yīng)用范圍廣的特色。其基根源理：利用欲分配的諸組分在固定相和流動(dòng)相間的分配有差異（即由不一樣的分配系數(shù)），當(dāng)兩相做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，這些組分在此兩相中分配屢次進(jìn)行，從幾千次到百萬(wàn)次，即使組分的分配系數(shù)只有細(xì)小差異，跟著液體流動(dòng)相卻可以有明顯的差異，最后使這些組分都獲取分別，經(jīng)過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被變換成電信號(hào)傳遞到記錄儀。三、[儀器和試劑:]1.主要儀器：島津液相色譜儀(lc-10at)[配有紫外檢測(cè)phenomenexo柱]；10μl微量注射器2、試劑：甲醇、水苯和甲苯混雜待測(cè)溶液苯標(biāo)準(zhǔn)溶液：2.0μl/ml甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液：2.0μl/ml苯、甲苯混雜標(biāo)準(zhǔn)溶液：1.0μl/ml、2.0μl/ml、5.0μl/ml、10.0μl/ml四、[實(shí)驗(yàn)步驟]12、.選擇適合的流動(dòng)相當(dāng)比，優(yōu)化色譜條件經(jīng)過(guò)調(diào)理溶劑甲醇和水的混雜比率，從而來(lái)優(yōu)化色譜調(diào)劑。調(diào)好最正確色譜條件，控制流速為1ml/min。柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)354nm3、苯、甲苯定性解析在最正確條件下，待基線走穩(wěn)后，用10μl微量注射器分別進(jìn)樣10μl苯和甲苯混雜待測(cè)溶液，10μl苯標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.0μl/ml）和10μl甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.0μl/ml）(微量注射器用甲醇潤(rùn)洗3～5遍)，觀察并記錄色譜圖上顯示的保留時(shí)間，確立苯和甲苯的峰。4、苯、甲苯定量解析在最正確條件下，待基線走穩(wěn)后，用10μl微量注射器分別進(jìn)樣1.0μl/ml、2.0μl/ml、5.0μl/ml10.0μl/ml的苯和甲苯混雜標(biāo)準(zhǔn)溶液10μl。觀察并記錄各色譜圖上的保留時(shí)間和峰面積。繪制苯和甲苯混雜標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積與相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線5、苯和甲苯混雜待測(cè)溶液解析依據(jù)獲取的苯和甲苯混雜待測(cè)溶液的液相色譜圖上顯示的峰面積值，從繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出苯和甲苯混雜待測(cè)溶液中苯和甲苯的各自的濃度。六、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)辦理及解析1、色譜條件優(yōu)化2.00色譜1.7570%1.500.750.50min解析：本次實(shí)驗(yàn)分別選擇了甲醇：水=60%：40%，70%：30%，80%：20%的溶劑配比，經(jīng)過(guò)比較不一樣溶劑配比條件下，甲苯和苯的峰寬、保留時(shí)間從而確立采納甲醇：水=80%：20%作為本次實(shí)驗(yàn)的最正確色譜條件。2、定性解析μmin解析：在同一色譜操作條件和進(jìn)樣量下，分別測(cè)定試樣溶液中苯和甲苯組分及已知苯和甲苯純物質(zhì)的保留時(shí)間并將其色譜峰、保留時(shí)間與對(duì)應(yīng)的已知苯和甲苯純物質(zhì)進(jìn)行比較，二者基實(shí)情同，從而確立混雜樣品中含有苯和甲苯。3、定量解析苯、甲苯混雜標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別為：1ul/ml,2ul/ml,5ul/ml,10ul/ml。4、未知樣品濃度七、結(jié)果談?wù)?、實(shí)驗(yàn)中為何采納標(biāo)準(zhǔn)曲線法作為定量的方法？答：因?yàn)閷?shí)驗(yàn)中待測(cè)溶液的組分只有苯和甲苯兩種物質(zhì)，組分比較簡(jiǎn)單。只要在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，嚴(yán)格控制且定量進(jìn)樣，就能采納操作、計(jì)算簡(jiǎn)略的標(biāo)準(zhǔn)曲線法得出正確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。若采納歸一化法或內(nèi)標(biāo)法，固然能獲取準(zhǔn)確更高的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，但因?yàn)閷?shí)驗(yàn)操作、計(jì)算復(fù)雜，不可以迅速解析，故實(shí)驗(yàn)中采納標(biāo)準(zhǔn)曲線法作為定量的方法。2．在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依照。采納正相液-液分配分別時(shí)：第一選擇中等極性溶劑，若組分的保留時(shí)間很短，降低溶劑極性，反之增添。也可在低極性溶劑中，逐漸增添此中的極性溶劑，使保留時(shí)間縮短。3．選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題（1）盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防范微量雜質(zhì)長(zhǎng)遠(yuǎn)積累損壞色譜柱和使檢測(cè)器噪聲增添。（2）防范流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效降落或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑損壞氧化鋁固定相等。

，（3）試樣在流動(dòng)相中應(yīng)有適合的溶解度，防范產(chǎn)生積淀并在柱中堆積。（4）流動(dòng)相同時(shí)還應(yīng)滿足檢測(cè)器的要求。當(dāng)使用紫外檢測(cè)器時(shí)，流動(dòng)相不該有紫外汲取。4．影響分其他要素與提升柱效的門路1）．液體的黏度比氣體大一百倍，密度為氣體的一千倍，故降低傳質(zhì)阻力是提升柱效主要門路，降低固定相粒度可提升柱效。2）．液相色譜中，不行能經(jīng)過(guò)增添柱溫來(lái)改進(jìn)傳質(zhì)；（恒溫）3）．改變淋洗液構(gòu)成、極性是改進(jìn)分其他最直接的要素。5.高效液相色譜與氣相色譜的主要差異可歸納于以下幾點(diǎn)：進(jìn)樣方式的不一樣：高效液相色譜只要將樣品制成溶液，而氣相色譜需加熱氣化或裂解；(2)流動(dòng)相不一樣，在被測(cè)組分與流動(dòng)相之間、流動(dòng)相與固定相之間都存在著必定的互相作用力；(3)因?yàn)橐后w的粘度較氣體大兩個(gè)數(shù)目級(jí)，使被測(cè)組分在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體流動(dòng)相中約小4~5個(gè)數(shù)目級(jí)；因?yàn)榱鲃?dòng)相的化學(xué)成分可進(jìn)行廣泛選擇，并可配置成二元或多元系統(tǒng)，滿足梯度洗脫的需要，因此提升了高效液相色譜的分辨率（柱效能）；(5)高效液相色譜采納5~10lm細(xì)顆粒固定相，使流體相在色譜柱上浸透性大大縮篇三：高效液相實(shí)驗(yàn)報(bào)告化學(xué)與環(huán)境化學(xué)科學(xué)學(xué)院解析化學(xué)駱洪偉高效液相實(shí)驗(yàn)報(bào)告一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.認(rèn)識(shí)高效液相的實(shí)驗(yàn)原理。2.學(xué)習(xí)并掌握高效液相色譜儀(hplc)的操作步驟。二、實(shí)驗(yàn)原理高效液相色譜由儲(chǔ)液器，泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分構(gòu)成，儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱內(nèi)，因?yàn)闃悠啡芤褐械母鹘M分在兩相中擁有不一樣的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)，經(jīng)過(guò)屢次多次的吸附—解吸的分配過(guò)程，各組分在挪動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差異，被分別成單個(gè)組分挨次從柱內(nèi)流出，經(jīng)過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被變換成電信號(hào)傳遞到記錄儀。三、hplc的介紹及操作步驟高效液相色譜儀主要包含高壓輸送系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分別系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)辦理系統(tǒng)及梯度洗脫等輔助裝置。其工作流程如圖1所示。1.高壓輸液系統(tǒng)高壓進(jìn)樣系統(tǒng)的作用是供給足夠恒定的高壓，使流動(dòng)相以穩(wěn)固的流量迅速浸透經(jīng)過(guò)固定相。高壓輸液系統(tǒng)由貯液器、高壓泵、過(guò)濾器和梯度洗脫裝置構(gòu)成，其核心部件是高壓泵，要求高壓泵擁有輸出壓力(1.5×107～4.5×107pa)，輸出流量恒定(精度0.1ml·min-1)，流量設(shè)定范圍可調(diào)。梯度洗脫裝置的作用是在分別過(guò)程中，按必定程序連續(xù)改變流動(dòng)相中多種不一樣性質(zhì)溶劑的配比，以改變流動(dòng)相的極性、離子強(qiáng)度或酸度等，從而提升試樣的分別效率，縮短解析時(shí)間，使色譜峰形獲取改進(jìn)，提升測(cè)定的矯捷度和定量的正確度。其他，還附有加熱脫氣、超聲波脫氣等裝置，以除去溶解在流動(dòng)相或試樣中的氣體。3.進(jìn)樣系統(tǒng)在高效液相色譜中，一般采納旋轉(zhuǎn)式六通閥于高壓下進(jìn)樣。采納旋轉(zhuǎn)式六通閥進(jìn)樣的長(zhǎng)處是進(jìn)樣量可變范圍大耐高壓，宜于進(jìn)樣自動(dòng)化，但易造成色譜峰柱前擴(kuò)展。4.分別系統(tǒng)液相色譜柱一般采納內(nèi)壁拋光的優(yōu)良不銹鋼管或厚壁玻璃管。為使工作壓力不致過(guò)高，柱長(zhǎng)都比較短，一般在5～30cm，柱徑為4～5mm。柱子的填補(bǔ)取決于柱填料的性能，對(duì)于生物膠或離子交換樹脂等，因遇到溶劑會(huì)膨脹，所以一定采納勻漿濕法填補(bǔ)。為防范顆粒大的填料先沉降而產(chǎn)生分層現(xiàn)象，可采納等密度溶劑(四氯乙烷和四氯乙烯混雜物)配成勻漿。用高壓泵將其迅速壓入裝有流動(dòng)相的色譜柱中，經(jīng)沖洗后，即可使用。5.檢測(cè)記錄系統(tǒng)高效液相色譜檢測(cè)器要求擁有矯捷度高、噪聲低、線性范圍寬、響應(yīng)快、死體積小等特色，且對(duì)溫度和流量的變化不敏感。目前，液相色譜常用檢測(cè)器有紫外光度檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器和電化學(xué)檢測(cè)器等

，。hplc操作步驟過(guò)濾流動(dòng)相，依據(jù)需要選擇不一樣的濾膜。對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。(3)打開hplc工作站（包含計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀），連接好流動(dòng)相管道，連接檢測(cè)系統(tǒng)。(4)進(jìn)入hplc控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)下手動(dòng)菜單。(5)有一段時(shí)間沒(méi)用，也許換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖洗時(shí)速度不要超出10ml·min-。調(diào)理流量，首次使用新的流動(dòng)相，可以先試一試看壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超出2000。點(diǎn)擊injure，采納適合的流速，點(diǎn)擊on，走基線，觀察基線的狀況。(7)設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file，采納select?users?and?methods，可以采納現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個(gè)新的方法，點(diǎn)擊new?method。采納需要的配件，包含進(jìn)樣閥，泵，檢測(cè)器等，依據(jù)需要而不一樣。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完好的走樣方法需要包含：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject變換；d.走樣時(shí)間，隨不一樣的樣品而不一樣。進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過(guò)濾。方法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)志等。所有樣品走完后，再用上邊的方法走一段基線，洗掉節(jié)余物。關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。登記。四、注意事項(xiàng)泵的使用和保護(hù)注意事項(xiàng)為了延長(zhǎng)泵的使用壽命和保持其輸液的穩(wěn)固性，一定依照以下注意事項(xiàng)進(jìn)行操作：①防范任何固體微粒進(jìn)入泵體，因?yàn)閴m?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會(huì)磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，所以應(yīng)早先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒。流動(dòng)相最幸好玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是濾過(guò)，可采納millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的進(jìn)口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應(yīng)常常清洗或更換。②流動(dòng)相不該含有任何腐化性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不該保留在泵內(nèi)，特別是在停泵過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間的情況下。假如將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，因?yàn)檎舭l(fā)或泄漏，甚至不過(guò)因?yàn)槿芤旱撵o置，即可能析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒相同損壞密封環(huán)和柱塞等。所以，一定泵入純水將泵充分沖洗后，再換成適合于色譜柱保留和有益于泵保護(hù)的溶劑（對(duì)于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。③泵工作時(shí)要留神防范溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完，不然空泵運(yùn)行也會(huì)磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，最后產(chǎn)生漏液。④輸液泵的工作壓力決不要超出規(guī)定的最高壓力，不然會(huì)使高壓密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。⑤流動(dòng)相應(yīng)該先脫氣，省得在泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響流量的穩(wěn)固性，假如有大批氣泡，泵就沒(méi)法正常工作。假如輸液泵產(chǎn)生故障，須查明原由，采納相應(yīng)措施除去故障：①?zèng)]有流動(dòng)相流出，又無(wú)壓力指示。原由可能是泵內(nèi)有大批氣體，這時(shí)可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運(yùn)行，將氣泡排盡，也可用一個(gè)50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個(gè)可能原由是密封環(huán)磨損，需更換。②壓力和流量不穩(wěn)。原由可能是氣泡，需要除去；也許是單向閥內(nèi)有異物，可卸掉單向閥，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時(shí)可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶粒或滋長(zhǎng)的微生物部分擁堵，這時(shí)，可卸掉砂濾棒浸入流動(dòng)相內(nèi)超聲除氣泡，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/l硝酸）內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解，再馬上沖洗。③壓力過(guò)高的原由是管路被擁堵，需要除去和沖洗。壓力降低的原由則可能是管路有泄漏。檢查擁堵或泄漏時(shí)應(yīng)逐段進(jìn)行。梯度洗脫在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，因?yàn)槎喾N溶劑混雜，并且構(gòu)成不停變化