植物生理學(xué)實驗教案

植物生理學(xué)實教案實驗指導(dǎo)書：候書林主編.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo).科學(xué)出版社，2004實驗一、植物組織滲透勢測定-質(zhì)壁分離法實驗二、植物組織水勢測定-小液流法實驗三、葉綠體色素的提取與分離及理化性質(zhì)鑒定實驗四、葉綠素a,b含量測定實驗五、植物體內(nèi)幾種呼吸酶的測定實驗六、植物葉面積測定實驗七、植物根系對離子的選擇性吸收實驗八、葉片光合速率的測定及光合儀的使用實驗九、種子活力的快速測定實驗十、植物組織可溶性糖含量的測定實驗十一、低溫對植物的傷害實驗十二、丙二醛含量的測定實驗一、植物組織滲透勢測定-壁分離法原理]將植物組織置于對其無毒害的一系列不同濃度的溶液里處理一定時間后鏡檢發(fā)生質(zhì)壁分離的細(xì)胞數(shù)，通常視野中有％的細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離時定為初始質(zhì)壁分離，細(xì)胞初始質(zhì)壁分離時壓力勢為零因可把引細(xì)胞初始質(zhì)壁分離的外界溶液稱之為等滲溶液溶具有的滲透勢即為細(xì)胞的滲透勢。由于很難正好找到引起50％胞發(fā)生質(zhì)壁分離的濃度。因此通常用插值法求得等滲溶液濃度，代入公式即可計算滲透勢。器材試]器材：顯微鏡，載玻片，蓋玻片，鑷子，刀片，培養(yǎng)(或具塞試)，記號筆，滴管。試劑：蔗糖。方法步]配制0.20.30.40.50.60.7mol蔗/L水質(zhì)量摩爾濃度，貯6個試劑瓶中，必要時配制溶液濃度的相差可≤蔗糖L水取6套干凈清潔的小培養(yǎng)皿，用號筆編號，將配制好的不同濃度的蔗糖溶液按順序倒入各個培養(yǎng)皿中使成一薄層，蓋好皿蓋。將帶有色素的植物組織或葉(可用有色素的洋蔥鱗片的外表皮，紫鴨跖草，蠶豆，小麥，玉米等葉的表皮撕取表迅速分別投入各種濃度的蔗糖溶液中，每個培養(yǎng)皿中放材料3個右，使其完全浸沒，浸泡20-40鐘。到時后，取出表皮，放在載玻片上，滴一滴相同濃度的蔗糖，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察質(zhì)壁分離的細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞總數(shù)，直接或間接(插法地找出引起50％細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離的外界溶液濃度，即為細(xì)胞滲透濃度值。插值法求細(xì)胞滲透濃度的公式為：式中O為胞的滲透濃度，mg為起p質(zhì)壁分離的濃度m為引起P質(zhì)壁分離的濃度，P為由m溶液起質(zhì)壁分離百分?jǐn)?shù)p為由m溶液引起質(zhì)壁分離的百分?jǐn)?shù)。求得按下計算滲透勢

=-iRTO為細(xì)胞滲透勢(；為體數(shù)(0.083barT為絕對溫度(℃；等滲系數(shù)，蔗糖為1?！舅伎碱}】1．配制蔗糖溶液時為何用質(zhì)量爾濃度mol/kgH2O而不用容積摩爾濃度mol/L？2．植物葉片吸水飽和時的滲勢經(jīng)測定為-0.8MPa，用質(zhì)壁分離法測出其滲透勢為-0.9MPa，計算質(zhì)壁分離狀態(tài)的細(xì)胞液體積相當(dāng)于飽和時的百分?jǐn)?shù)。實驗二植物織水勢的測定（液流法）一、原理將植物組織分別放在一系列濃度遞增的溶液中，當(dāng)找到某一濃度的溶液與植物組織之間水分保持動態(tài)平衡時，則可認(rèn)為此植物組織的水勢等于該溶液的水勢。因溶液的濃度是已知的根公式算出其滲透壓負(fù)值液滲透π即代表植物的水勢（ψw）waterpotential）。ψwψπ＝－＝－CRT（大氣壓）二、材料、儀器設(shè)備及試劑材料：小白菜、菠菜、油菜或其它作物葉片儀器設(shè)備：1.帶塞青霉素小瓶12個2.帶有橡皮管的注射針頭3.鑷子；打器5.培養(yǎng)皿。試劑：1.0.05、、0.15、0.200.250.30mol/L蔗糖溶液；甲烯藍(lán)粉末。三、實驗步驟（一取燥潔凈的青霉素瓶6個甲組各瓶中分別加入0.05～0.30mol/L蔗糖溶液約4ml（約為青霉素瓶／3處），另取6個干潔凈的青霉素瓶為乙組，各瓶中分別加入0.05～0.30mol/L蔗糖液和微量甲烯藍(lán)粉末著色，上述各瓶加標(biāo)簽注明濃度（）取待測樣的功能葉數(shù)片，用打孔器打取小圓片約50片，放至培養(yǎng)皿中混合均勻用子分別夾入5～小圓片到盛有不同濃度的甲烯藍(lán)蔗糖溶液的青霉素瓶乙組塞葉圓片全部浸沒于溶液中約30～60min，為加速水分平衡，應(yīng)經(jīng)常搖動小瓶。（三）經(jīng)一定時間后，用注射針頭吸取乙組各瓶藍(lán)色糖液少許，將針頭插入對應(yīng)濃度甲組青霉素瓶溶液中部，小心地放出少量液流，觀察藍(lán)色液流的升降動向。（每次測定均要用待測濃度的甲烯藍(lán)蔗糖溶液清洗幾次注射針頭）。如此方法檢查各瓶中液流的升降動向。若液流上升，說明浸過小圓片的蔗糖溶液濃度變?。粗参锝M織失水）；表明葉片組織的水勢高于該濃度糖溶液的滲透勢；如果藍(lán)色液流下降則說明葉片組織的水勢低于該糖溶液的滲透勢，若藍(lán)色液流靜止不動，則說明葉片組織的水勢等于該糖溶液的滲透勢，此糖溶液的濃度即為葉片組織的等滲濃度四、結(jié)果計算將求得的等滲濃度值代入如下公式：ψw＝π＝中ψw＝物組織的水單位Mpa）ψπ＝液的滲透勢C＝等濃度（mol/L＝氣體常數(shù)0.008314MPa/L/mol/K）T＝絕對溫度i＝解離系數(shù)（蔗糖，CaCl＝2.60）大氣壓1.013＝0.1MPa?！疽馐隆?所取料在植株上的部位要致，打取葉圓片要避開主脈和傷口。2取材及打取葉圓片的過程作要迅速，以免失水。3帶有晶水的甲烯藍(lán)不易溶CaCl液，可在100下烘干成無水甲烯藍(lán)粉末使用。實驗三葉體色素的提取分離和理化性質(zhì)一、葉綠體色素的提取與分離【原理】葉綠體中含有綠色（括葉綠和葉素和黃色（括胡蘿卜素和葉黃素兩大類。它們與類囊體膜上的蛋白質(zhì)相結(jié)合，而成為色素蛋白復(fù)合體，這兩類色素都不溶于水，而溶于有機溶劑，故可用乙醇或丙酮等有機溶劑提取。提取液可用色層分析的原理加以分離。因吸附劑對不同物質(zhì)的吸附力不同，當(dāng)用適當(dāng)?shù)娜軇┩苿訒r，混合物中各成分在兩相（流動相和固定相）間具有不同的分配系數(shù)，所以它們的移動速度不同，經(jīng)過一定時間層析后，便將混合色素分離?！緝x器與用具】研缽2套；漏斗；100ml三瓶玻璃棒；剪刀；滴管；培養(yǎng)皿（直徑11cm維或平底短玻管（也可用塑料藥瓶蓋代替勺；圓形濾紙（直徑11cm紙（5cm×1.5cm【試劑】95%乙醇；石英砂；碳酸鈣粉；推動劑：按石油醚︰丙酮︰苯10︰︰）例配制（體積比【方法】1．葉綠體色素的提取取菠菜或其他植物新鮮葉片4～5片（左右凈擦干，去掉中脈剪碎，放入研缽中。研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉2～3ml95%乙磨至糊狀再10～15ml95%乙醇，提取3～，清液過于三角瓶中，殘渣用10ml95%乙沖洗，一同過濾于三角瓶中。如無新鮮葉片，也可用事先制好的葉干粉提取。取新鮮葉片（以菠菜葉最好用105℃殺青，再在80℃烘干，研成粉末，密閉貯存。用時稱葉粉1g放入小燒杯中，加95%乙20～30ml浸，并隨時攪動。待乙呈深綠色時，濾出浸提液備用。（）取一研缽，放入剪碎的新鮮葉片，放入少量石英砂（不加碳酸鈣粉磨先加2ml蒸餾水，研至糊狀，再加蒸餾水30ml，攪均，不過濾。2．葉綠體色素的分離取圓形定性濾紙一張（直徑11cm其中心戳一圓形小孔（直徑約3mm取張濾紙條（5cm×1.5cm滴管吸乙醇葉綠體色素提取液沿紙條的長度方向涂在紙條的一邊，使色素擴散的寬度限制在0.5cm以，風(fēng)干后，再重復(fù)操作數(shù)次，然后沿長度方向卷成紙捻，使浸過葉綠體色素溶液的一側(cè)恰在紙捻的一端。將紙捻帶有色素的一端插入圓形濾紙的小孔中，使與濾紙剛剛平齊（勿凸出在培養(yǎng)皿內(nèi)放一康維皿，在康維皿中央小室中加入適量的推動劑，把帶有紙捻的圓形濾紙平放在康維皿上，使紙捻下端浸入推動劑中。迅速蓋好培養(yǎng)皿。此時，推動劑借毛細(xì)管引力順紙捻擴散至圓形濾紙上，并把葉綠體色素向四周推動，不久即可看到各種色素的同心圓環(huán)。如無康維皿，也可在培養(yǎng)皿中放入一平底短玻管或塑料藥瓶蓋，以盛裝推動劑。但所用培養(yǎng)皿底、蓋直徑應(yīng)相同，且略小于濾紙直徑，以便將濾紙架在培養(yǎng)皿邊緣上。當(dāng)推動劑前沿接近濾紙邊緣時，取出濾紙，風(fēng)干，即可看到分離的各種色素：葉綠素為藍(lán)綠色，葉綠素b為綠色，黃素為鮮黃色，胡蘿卜素為橙黃色。用鉛筆標(biāo)出各種色素的位置和名稱二、葉綠體色素的理化性質(zhì)【原理】葉綠素是一種二羧酸—葉綠酸與甲醇和葉綠醇形成的復(fù)雜酯，故可與堿起皂化反應(yīng)而生成醇（甲醇和葉綠醇葉酸的鹽生鹽能溶于水中用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開；葉綠素與類胡蘿卜素都具有光學(xué)活性表現(xiàn)出一定的吸收光譜可用分光鏡檢查或用分光光度計精確測定；葉綠素吸收光量子而轉(zhuǎn)變成激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)的葉綠素分子很不穩(wěn)定，當(dāng)它變回到基態(tài)時可發(fā)射出紅光量子，因而產(chǎn)生熒光。葉綠素的化學(xué)性質(zhì)很不穩(wěn)定，容易受強光的破壞，特別是當(dāng)葉綠素與蛋白質(zhì)分離以后，破壞更快，而類胡蘿卜素則較穩(wěn)定。葉綠素中的鎂可以被H+所取代而成褐色的去鎂葉綠素后者遇銅則成為綠色的銅代葉綠素，銅代葉綠素很穩(wěn)定，在光下不易破壞，故常用此法制作綠色多汁植物的浸漬標(biāo)本。【儀器與用具】20ml刻度管10ml小管；試管架；分光鏡；石棉網(wǎng)；藥匙；燒杯100ml精；玻棒；鐵三角架；刻度吸量管2ml、各；火柴?！驹噭?5%乙醇；苯；醋酸銅粉末5%稀鹽酸；醋酸-醋酸銅溶液：6g醋酮溶于100ml50%的酸中，再加蒸餾水4倍稀而成；KOH-甲醇溶液20gKOH溶100ml甲中，過濾后盛于塞有橡皮塞的試劑瓶中?！痉椒ā坑帽緦嶒灥谝豁椫刑崛〉娜~綠體色素乙醇溶液和水研磨勻漿，進(jìn)行以下實驗。1．光對葉綠素的破壞作用取4支試管，其中兩支各加入5ml用研磨的葉片勻漿，另外兩支各加入2.5ml葉綠體色素乙醇提取液，并用95%乙醇稀釋1倍。取支有葉綠素乙醇提取液的試管和1支裝水研磨葉片均漿的試管放在直射光下，另外兩支放到暗處，40min后比觀察顏色有何變化，解釋其原因。熒現(xiàn)象的觀察取1支20ml刻度試管加入濃的葉綠體色素乙醇提取液在射光下觀察溶液的透射光與反射光顏色有何不同？解釋原因。．皂化作用（綠色素與黃色素的分離）在做過熒光現(xiàn)象觀察的葉綠體色素乙醇提取液試管中加入1.5ml20%KOH-甲溶液，充分搖勻。片刻后，加入5ml苯搖勻，再沿試管壁慢慢加入～1.5ml蒸餾水，輕輕混勻（勿激烈搖蕩試管架上靜置分層。溶液不分層，則用滴管吸取蒸餾水，沿管壁滴加，邊滴加邊搖動，直到溶液開始分層時，靜置?？梢钥吹饺芤褐饾u分為兩層，下層是稀的乙醇溶液，其中溶有皂化的葉綠素a和b（以及量的葉黃素層是苯溶液，其中溶有黃色的胡蘿卜素和葉黃素。4．吸收光譜的觀察

將上述已分層的試管溶液，用分光鏡觀察兩類色素的吸收光譜，首先讓下層綠色素部分對準(zhǔn)進(jìn)光孔，看光譜有何變化；然后再將上層黃色素溶液對準(zhǔn)進(jìn)光孔，看光譜又有何變化。把觀察的結(jié)果用簡單的圖表示出來。5．和Cu++對葉綠素分子中Mg++取代作用方法一：取兩支試管，第一支試管加葉綠體色素提取液2ml作為對照。第二支試管中加葉綠體色素提取液5ml，再加入5%HCl滴，搖勻，觀察溶液顏色變化。當(dāng)溶液變褐后，再加入少量醋酸銅粉末，微微加熱，觀察記載溶液顏色變化情況，并與對照試管相比較。解釋其顏色變化原因。方法二：另取醋酸－醋酸銅溶液20ml，燒杯盛之。取新鮮植物葉片兩片，放入燒杯中，用酒精燈慢慢加熱，隨時觀察并記錄葉片顏色的變化，直至顏色不再變化為止。解釋原因?！咀⒁馐马棥浚诘蜏叵掳l(fā)生皂化反應(yīng)的葉綠體色素溶液，易乳化而出現(xiàn)白絮狀物，溶液渾濁，且不分層?？杉ち覔u勻，放在～℃的水浴中加熱，溶液很快分層，絮狀物消失，溶液變得清澈透明。．分離色素用的圓形濾紙，在中心打的小圓孔，周圍必須整齊，否則分離的色素不是一個同心圓。【思考題】．用不含水的有機溶劑如無水乙醇、無水丙酮等提取植物材料特別是干材料的葉綠體色素往往效果不佳，原因何在？．研磨提取葉綠素時加入CaCO3什么作用？．從葉綠素a、葉綠素、蘿素和葉黃素的吸收光譜討論其生理意義。實驗四葉綠含的測定一、原理根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收用光光度計在某一特定波長測定其吸光度，即可用公式計算出提取液中各色素的含量。根據(jù)朗伯—比爾定律，某有色溶液的吸光度A與中溶質(zhì)濃度C和液厚度L成比，即＝αCL式中α比常數(shù)。當(dāng)溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1cm，α為物質(zhì)的吸光系數(shù)。各種有色物質(zhì)溶液在不同波下的吸光系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長下的吸光度而求得溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)則混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應(yīng)波長下吸光度的總和就吸光度的加和性。今欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、和胡蘿卜素的含量，只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度A，根據(jù)葉綠素ab及胡蘿卜素在該波長下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。在測定葉綠素ab時為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的最大吸收峰。二、材料、儀器設(shè)備及試劑材料：新鮮（或烘干）的植物葉片。儀器設(shè)備1.分光度計電子載天（感量0.01g3.研4.棕色容量瓶；小漏；定量濾紙7.吸水8.擦境9.滴管試劑：％醇（或80％丙酮；石英砂；碳酸鈣粉。三、實驗步驟1.取新植物葉片（或其它綠組織）或干材料，擦凈組織表面污物，剪碎（去掉中脈），混勻。2.稱剪碎的鮮樣品，共份，別放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2～3ml95％乙醇，研均漿，再加乙醇，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3～5min。3.取紙1張置漏斗中，用乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數(shù)次，最后連同殘渣一起倒入漏斗中。4.用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。最后用乙醇定容至25ml勻把葉體色素提取液倒入光徑的比色杯內(nèi)95％乙醇為空白，在波長665nm、649nm下定吸光度。四、實驗結(jié)果計算：將測定得到的吸光值代入下面的式子Ca=13.95A－6.88A；Cb=24.96A－7.32A。此即可得到葉綠素a和綠素b的濃度（、：mg/L）二者之和為總?cè)~綠素的濃度。最后根據(jù)下式可進(jìn)一步求出植物組織中葉綠素的含量：葉綠素的含量（mg/g）=[葉綠的濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)]/樣品鮮重（或干重）。實驗五、植物體內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)含量的測定考馬斯亮藍(lán)法植物體內(nèi)的可溶性蛋白質(zhì)大多數(shù)是參與各種代謝的酶類，測其含量是了解植物體總代謝的一個要指標(biāo)。在研究每一種酶的作用時，常以比活（酶活力單位／mg蛋白）表示酶活力大小及酶制劑純度。因此，測定植物體內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)是研究酶活的一個重要項目。常用測定方法Lowry和考馬斯亮藍(lán)G-250染結(jié)合法。本實驗將分別介紹這兩種方法?！驹怼靠捡R斯亮藍(lán)測蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的種亮藍(lán)在離態(tài)下呈紅色，當(dāng)它與蛋白質(zhì)的疏水區(qū)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?，前者最大光吸收在，后者在。在一定蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)（0～100μ白質(zhì)－色素結(jié)合物在波長下的光吸收與蛋白質(zhì)含量成正比。故可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)G-250結(jié)在左右的時間內(nèi)達(dá)平衡，完成反應(yīng)十分迅速其合物在室溫下內(nèi)保持穩(wěn)定該應(yīng)常靈敏可微克級蛋白質(zhì)含量所以是一種比較好的蛋白質(zhì)定量法。【儀器與用具】分光光度計10ml量1支研體10ml容瓶1；1ml刻吸管3支10ml塞刻度試管支【試劑】牛血清白蛋白配成1000g/ml和μg/ml考馬斯亮藍(lán)：取100mg考斯亮藍(lán)G-250溶50ml90%乙醇中，加入85%）磷酸100ml，最后用蒸餾水定容至。溶液在常溫下可放置一個月；90%醇）酸（85%【方法】標(biāo)曲線的繪制（10100μg/ml標(biāo)曲的制作取6支管按表數(shù)據(jù)配制0～100μg/ml血白蛋白液各。準(zhǔn)確吸取所配各管溶液0.1ml，別放入10ml具試管中，加入5ml考馬斯亮藍(lán)試劑，蓋塞，反轉(zhuǎn)混合數(shù)次，放置后在下比色，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。表配制0～μg/ml血清白蛋白液管

號

12345

6100μg/ml牛血清蛋白量ml)

0.61.0蒸餾水量(ml)蛋白質(zhì)含量(mg)

1.00

0.8

0.6

0.4

0.2

0（20μ標(biāo)曲線的制作另支管按表據(jù)配制～1000g/ml牛血清白蛋白溶液各1ml。與步驟（）操作相同，繪出0～1000μ的準(zhǔn)曲線。表配制～1000μg/ml清蛋白血液管

號

7

8

9

10

11

121000g/ml血清白蛋白（ml蒸餾水量(ml)蛋白質(zhì)含量(mg)

01.00

0.20.80.2

0.40.60.4

0.60.40.6

0.80.20.8

1.001.0樣品提取液中蛋白質(zhì)濃度的測定吸取樣品提取液（樣品提取見各酶活測定入具塞刻度試管（兩個重復(fù)管入考斯亮藍(lán)G-250試劑，充分混合，放置min后下比色，記錄吸光度值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查得蛋白質(zhì)含量。結(jié)果計算

V樣品蛋白質(zhì)含量重=

式中－查標(biāo)準(zhǔn)曲線所得每管蛋白質(zhì)含量V提取液總體積a測定所取提取液體積W取量實驗六、植物葉面積測定[實驗原理植物的生長與葉面積密切相關(guān)，一方面葉面積的大小影響了植物的光合物質(zhì)積累，另一方面掌的生長又通過葉面積的變化得到體現(xiàn)，因此測定植物的葉面積對于植物的生長生理、光合生理逆境生理具有重要的意義?？梢杂萌~面積儀直接測定，沒有條件的試驗室也可以通過測量、稱重的方法測得。[材料與用品]校園里各種植物葉片直尺、剪刀、復(fù)印紙、電子天平等[方法與步驟]從葉片基部用剪刀小心剪取10片片。用直尺量取每一片葉的最長處為葉長、最寬處為葉寬，記錄下來。將葉片固定在復(fù)印紙上，用鉛筆沿葉緣將葉片形狀描下來，用剪刀剪下來。將剪下的紙葉子在電子天平上稱重，記錄。稱出一張復(fù)印紙的質(zhì)量，測量出長和寬，計算出紙的面積，然后換算出每克重量所對應(yīng)的紙面積。將剪下來的紙葉子的質(zhì)量換算成面積，是為每片葉的面積。用每片葉的面積除以其長度與寬度的乘積，可以得到一個小于的數(shù)，該系數(shù)與葉片的形狀有關(guān)，稱為形狀系數(shù)或校正因子，計算10葉子的形狀系數(shù)，算出其平均值。在以后的測量中以用直尺測量該種物葉片的長和寬者乘積乘以形狀系數(shù)為面積。測定形狀不規(guī)則葉片的葉面積可按照上述12，，，，6步操作。[結(jié)果與分析]測量出葉片的長和寬，計算出葉面積和形狀系數(shù)。[思考題本實驗需注意哪些方面，你可以用其他方法測出葉面積嗎？測量并計算出一些常見植物葉片的形狀系數(shù)。實驗七、植物根系對離子的選擇性吸收植物的根對礦質(zhì)元素具有選擇吸收的特性至對同一鹽類的陰離子和陽離子也不同的比例吸收。所以鹽類可分為生理酸性鹽（根對陽離子吸收多理性鹽（對陰離子吸收多生理中性鹽（陰陽離子等比例地吸收根系對離子吸收有選擇性，使得培養(yǎng)液的成份會逐漸改變。因此，在水培崐或無土栽培植物時，要經(jīng)常更換與補充培養(yǎng)液，本實驗為驗證根對離子吸收有選擇性而設(shè)計的。原理]植物對組成同一鹽類的陰離子和陽離子的吸收量不同時會改變?nèi)芤旱模穑戎低ㄟ^酸度計測定放根系前后溶液的Ｈ值變化就能判別根系是否對離子吸收具有選擇性。器材試]器材：計（精密pH試筒，廣口瓶試劑：0.01mg/ml(NH)SO，0.01mg/ml，0.01mg/mlNHNO。方法步]1.材料準(zhǔn)備：預(yù)先在自來水中培好具有相當(dāng)大根系的洋蔥鱗莖，或其他植物的根系。2.測定實驗開始時溶液的原初pH值：取四個200ml廣口瓶，分別放上0.01mg/ml。取四株根系發(fā)育良好小似的洋或其他植物材料的根系別放在四個廣口瓶的溶液中～2分后出分別測定瓶中pH值為實驗開始的原初pH值后把根系放回廣口瓶中。3.測定植株吸收離子的終態(tài)pH值在室溫下放置小左右（放置時間視根的大小，吸收能力和溶液溫度而定出株，測定溶液的pH值實驗結(jié)果按下表24-1記，加以分析。表1植從鹽溶液中吸收的離子和pH值化為了避免根系的分泌作用影響實驗結(jié),用蒸餾水作對照。實驗八植物片光合速率的測及光合儀的使用光合速率測定是植物生理學(xué)的基本研究方法之一，在作物豐產(chǎn)生理、作物生態(tài)、新品種選育、及光合作用基本理論研究方面都有著廣泛的用途。根據(jù)光合作用的總反應(yīng)式C0O→(CHO)OHO光合強度原則上可以用任何一反應(yīng)物消耗速度或生成物的產(chǎn)生速度來表示。由于植物體內(nèi)水分量很高而且植物隨時都在不斷吸水和失水參與的生化反應(yīng)又特多體內(nèi)水分含量經(jīng)常變，所以實際上不能用水的含量變化來測定光合速率。在科學(xué)實驗中可用以下方法方式來測定和表光合速率(表9—，中最常用的法有：改良半葉法，紅外線CO-2分法，和氧電極法。紅線C0分析C2[原理植物葉片的光合呼吸)速率可以單位葉面積位時間里同(釋)的量來表示。C0濃度以通過紅外線C0氣分析儀迅速測量把植物葉片放入葉室在開啟氣路中測定照光或光條下葉室進(jìn)出口之的濃度，就可以計算光合(呼吸)速率。[器材與試劑]器材紅外氣體分析儀測定(呼)速率裝(圖9-1)剪刀橡泥葉面積儀，光量子(或照度計。試劑：無水[方法與步驟]1.按圖9-1裝連接各部件根“紅外線氣體分析使用說明書”進(jìn)行儀器調(diào)整定靈敏度。圖9-1用外線氣體分析儀測定物葉片光呼吸速率的裝(開啟式氣略)2.開啟無油氣泵，向空氣貯氣袋打入空氣。待紅外線氣體分析儀預(yù)機數(shù)小時后，開啟小氣泵，向紅外線氣體分析儀通氣，測定空氣中CO-2濃度并把記錄筆移動到滿量程的3/4處。3.把待測葉片20cm左(過大過寬的葉片可剪二邊，保留中放入葉室，用橡皮泥封口。調(diào)節(jié)氣體流(1-2升小時cm的改變量，即測定呼吸速率。

葉面積，定葉片在暗中因呼吸釋放對氣路C0濃4.開啟光源，用光量子(或照計測定葉室處光強。移動幻燈機與葉室間距離，或通過調(diào)節(jié)光源電壓可調(diào)節(jié)實驗所需要的光強。連續(xù)記錄葉室出口處C0濃度的變化，直至記錄線走直。圖9-2開式氣路測定(呼)速率記錄圖5.再次測定空氣基線。記錄圖如圖-2所示，通過半導(dǎo)體點溫計讀取葉圖9-2開啟式氣路測定光合(呼吸速率記錄圖室溫度。測定放入葉室面積。按表-3要記錄測定數(shù)據(jù)，并計算光合速率與呼吸速率。A=F(Ce-Co)/SF：流速ml/S)Ce：葉室入口處C0濃(μmol/ml)；Co葉室出口處C0濃(μmol/ml)A：表觀光合(呼吸速率(μmol·m·S)如果C0濃用ppm(l/L)表，光合速率單位采用mgC0·dm·h，則光合強度計算公式：A=(Ce-Co)F·K/SA：表觀光合(呼吸速(C0·dm·h)Ce：葉室進(jìn)口處C0濃(ppm)Co：葉室出口處C0濃(ppm)F：氣體流量(S：葉面積dm)K：CO-2轉(zhuǎn)系(密mg/μl)J80K=44×273/22400×(273)為室溫度℃)(Ce-Co)為因葉片光(呼吸)所成的CO-2濃度差，Ce-Co=△L×S△L：記錄紙上空氣基線到測量的距(cm)S：敏(ppm/cm)d那么計算光合(呼吸速率的計算式為J80A=△L·S·F·K/S實驗九種子力的快速測-染染色法一、原理有生命力種子胚細(xì)胞的原生質(zhì)膜具有半透性，有選擇吸收外界物質(zhì)的能力，一般染料不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，胚部不染色。而喪失生命力的種子，其胚部細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失了選擇吸收能力，染料可自由進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)使胚部染色。所以可根據(jù)種子胚部是否被染色來判斷種子的生命力。二、材料、儀器設(shè)備及試劑材料：水稻、玉米、大豆、棉花、小麥及一些樹木種子。設(shè)備：1.小燒杯；刀片；鑷子試劑：％～0.2％靛紅溶液％紅墨水（酸性大紅G）。三、實驗步驟將種子用溫水（約30℃）浸泡2～6h使種子充分吸脹。隨機取種子100粒，水稻種子要殼，豆類種子要去皮，然后沿種胚中央準(zhǔn)確切開，取其一半備用。將準(zhǔn)備好的種子浸于紅墨水溶液中，于恒溫箱30～35℃）中保溫30min。染色結(jié)束后要立即進(jìn)行鑒定，因放久會褪色。倒出紅墨水溶液，再用清水將種子沖洗～次觀察種胚被染色的情況，凡種胚不著色或著色淺的即為具有生命力的種子。種胚與胚乳染色一致的為死種子。實驗十植物織中可溶性糖含測定在作物的碳素營養(yǎng)中，作為營養(yǎng)物質(zhì)主要是指可溶性糖和淀粉。它們在營養(yǎng)中的作用主要有：合成纖維素組成細(xì)胞壁；轉(zhuǎn)化并組成其他有機物如核苷酸、核酸等；分解產(chǎn)物是其他許多有機物合成的原料，如糖在呼吸過程中形成的有機酸，可作為NH的體而轉(zhuǎn)化為氨基酸；糖類作為呼吸基質(zhì)為物的各種合過程和各種生命活動提供了所需的能量于碳水化合物具有這些重要的作用，所以是營養(yǎng)中最基本的物質(zhì)，也是需要量最多的一類。Ⅰ蒽法測定可溶性糖一、原理糖在濃硫酸作用下可脫水反生成糠醛或羥甲基糠醛成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應(yīng)生成藍(lán)綠色糠醛衍生物，在一定范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的定量測定。該法的特點是幾乎可以測定所有的碳水化合物，不但可以測定戊糖與己糖含量，而且可以測所有寡糖類和多糖類，其中包括淀粉、纖維素等（因為反應(yīng)液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖而發(fā)生反應(yīng)以用蒽酮法測出的碳水化合物含量，實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒有必要細(xì)致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測出總量，省去許多麻煩，因此，有特殊的應(yīng)用價值。但在測定水溶性碳水化合物時，則應(yīng)注意切勿將樣品的未溶解殘渣加入反應(yīng)液中不然因為細(xì)胞壁中的纖維素半纖維素等與蒽酮試劑發(fā)生反應(yīng)而增加了測定誤差此外同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同糖色最深萄次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺，故測定糖的混合物時，常因不同糖類的比例不同造成誤差，但測定單一糖類時，則可避免此種誤差。糖類與蒽酮反應(yīng)生成的有色物質(zhì)在可見光區(qū)的吸收峰為620nm，在此波長下進(jìn)行比色。二、實驗材料、試劑與儀器設(shè)備（一）實驗材料任何植物鮮樣或干樣。（二）試劑80％乙。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（100μg/mL確取100mg分析無水葡糖，溶于蒸餾水并定容至100mL，使用時再稀釋10倍（100g/mL3．酮試劑：稱取1.0g蒽，溶于80%濃硫（將98%濃硫稀釋，把濃硫酸緩緩加入到蒸餾水中）1000mL中卻室溫于具塞棕色瓶內(nèi)冰箱保存使用～3周。（三）儀器備分光光度計分天平離管離心機恒溫水浴試管三角瓶移（5、1、0.5mL刀瓷盤，玻棒，水浴鍋，電爐，漏斗，濾紙。三、實驗步驟樣品中可溶性糖的提取稱取剪混勻的新鮮樣品0.5g（或樣粉末5～100mg入試管中，加入15mL蒸餾，在沸水浴中煮沸20min，取冷卻，過濾入mL容瓶中，用蒸餾水沖洗殘渣數(shù)次，定容至刻度。標(biāo)準(zhǔn)曲線制作取支大管，從0～分別號，按表24-1加入各試劑。表蒽法測可溶性糖制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的試劑量管號試劑100g/mL葡糖

00

10.2

20.4

30.6

40.8

51.0溶液（mL）蒸餾水（mL）蒽酮試劑（）葡萄糖量（g）

1.05.00

0.85.020

0.65.040

0.45.060

0.25.080

05.0100將各管快速搖動混勻后，在沸水浴中煮10min取出冷卻，在620波長下，用空白調(diào)零測定光密度，以光密度為縱坐標(biāo)，含葡萄糖量（μg）為坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3．品測定取測樣品提取1.0mL加酮試劑5mL，同上操作顯色測定光密度。重復(fù)3次。四、結(jié)果計算式中：C—從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得萄糖量，μgVT—樣品提取液總體積,mL。1—顯色時取樣品液量，?！獦悠分兀▽嶒炇坏蛯χ参锏膫Γ▽?dǎo)儀法）一、原理植物細(xì)胞膜對維持細(xì)胞的微環(huán)境和正常的代謝起著重要的作用。在正常情況下，細(xì)胞膜對物質(zhì)有選擇透性能力。當(dāng)植物受到逆境影響時，如高溫、低溫、干旱、鹽漬或病原菌侵染后，細(xì)胞膜遭破壞，膜透性增大，從而使細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲，以致植物細(xì)胞浸提液的電導(dǎo)率增大。膜透性增大的度與逆境脅迫強度有關(guān)，也與植物抗逆性的強弱有關(guān)。這樣，比較不同作物或同一作物不同品種在同脅迫溫度下膜透性的增大程度，即可比較作物間或品種間的抗逆性強弱，因此，電導(dǎo)法目前已成作物抗性栽培、育種上鑒定植物抗逆性強弱的一個方法。二、實驗材料、試劑與儀器設(shè)備（一）實驗材料植物葉片。（二）試劑NaCl溶液（三）儀器設(shè)備電導(dǎo)儀，天平，溫箱，真空干燥器，抽氣機，恒溫水浴鍋，注射器。三、實驗步驟制作標(biāo)準(zhǔn)曲線如需量測定透性變化，可用純NaCl配成、10、20、40、60、80、100g/mL的標(biāo)液20～25℃溫下用電導(dǎo)儀測定出導(dǎo)率電導(dǎo)率為縱坐標(biāo)，NaCl量為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。選取小麥或其他植物在一定部位上生長葉齡相似的葉子若干，剪下后，先用紗布拭凈，稱取兩，各重2g。3.一插入小杯中放在40℃溫箱內(nèi)萎蔫0.5～1另一份插入水杯中放在室溫下做對照處理后分別用蒸餾水沖洗兩次，并用潔凈濾紙吸干。然后剪成長約1cm小段放入小燒杯中（大小以能夠容納電極為度），并用玻棒或干凈尼龍網(wǎng)壓住，在杯中準(zhǔn)確加入蒸餾水20mL，浸沒葉片。4.放真空干燥器，用抽氣機抽氣7～min以抽出細(xì)胞間隙中的空氣。重新緩緩放入空氣，水即被壓入組織中而使葉下沉。將抽過氣的小燒杯取出，放在實驗桌上靜置20min，后用玻棒輕輕攪動葉片，在20～25℃恒溫下，用電導(dǎo)儀測定溶液電導(dǎo)率。測過電導(dǎo)率之后，再放入100℃水浴中15min，殺死植物組織，取出放入自來水冷卻10min，20～25℃溫下測煮沸電導(dǎo)率。四、結(jié)果計算傷害率可以用下列三種形式表示：[注事項]整個過程中，葉片接觸的用具必須絕對潔凈（全部器皿要洗凈），也不要用手直接接觸葉片，免污染。各處理和對照的待測液的體積要一樣。測定后電極要清洗干凈。[思題]植物抗逆性與細(xì)胞膜透性有何關(guān)系用電導(dǎo)儀法定量測定細(xì)胞膜透性變化為什么要用純NaCl做標(biāo)準(zhǔn)曲線?【附注】DDS-11A型導(dǎo)率儀使用方法．未打開電源開關(guān)之前，電表指針應(yīng)指零；否則，應(yīng)調(diào)整表頭螺絲使指針指零。．打開電源開關(guān)，指示燈即亮，預(yù)熱至指針穩(wěn)定為止。．把開關(guān)撥至“校正”擋，調(diào)節(jié)“調(diào)正”旋鈕使指針停在最大刻度。當(dāng)測物的電導(dǎo)率低于300μS/cm時將開關(guān)撥向“低周”被測物電導(dǎo)率為～103μS／cm時，將開關(guān)撥向“高周”。．將量程開關(guān)打到所需范圍。若初測不知測量范圍大小，應(yīng)先將量程開關(guān)打到最大位置，然后格下降，以防過載，否則指針迅速擺動時易被打彎。．將電極插入電極插口內(nèi)，旋緊插口上的緊固螺絲，同時把電極常數(shù)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)在與之配用的極常數(shù)相應(yīng)的位置上。（測量范圍在10～10μS/cm時，使用DJS-I型鉑黑電極；當(dāng)被測物的電導(dǎo)率大于104S／cm時選DJS-10型鉑黑電極應(yīng)調(diào)節(jié)在與之所配用電極常數(shù)1/10的位置上，例如：電極常數(shù)為9.8，應(yīng)調(diào)節(jié)在0.98位上，但要將測得的讀數(shù)乘以，即被測液的電導(dǎo)率）。．將電極完全浸入待測液中，把開關(guān)打到“測量”擋，從電表讀數(shù)乘以量程開關(guān)所指的倍數(shù)（程開關(guān)指紅色時，讀表中的紅色數(shù)字；指黑色時則讀黑色數(shù)字），即為被測溶液的電導(dǎo)率。．每測完一個樣品，必須用蒸餾水沖洗電極，然后用濾紙吸干水珠，再測另一個樣品。實驗十二、丙二醛含量的測定植物器官衰老或在逆境下遭受傷害，往往發(fā)生膜脂過氧化作用，丙二醛(MDA)是膜脂過氧化的最終分解產(chǎn)物，其含量可以反映植物遭受逆境傷害的程度從上產(chǎn)生的位置釋放出后，可以與蛋白質(zhì)、核酸反應(yīng)，從而喪失功能，還可使纖維素分子間的橋鍵松馳，或抑制蛋白質(zhì)的合成。因此的累可能對膜和細(xì)胞造成一定的傷害。原理]丙二醛MDA)是常用的膜脂過氧指標(biāo)性和高溫度條件下以與硫代巴比妥(TBA)反應(yīng)生成紅棕色的三甲川