微生物大小與數(shù)量測(cè)定_第1頁(yè)
微生物大小與數(shù)量測(cè)定_第2頁(yè)
微生物大小與數(shù)量測(cè)定_第3頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

關(guān)于微生物大小與數(shù)量測(cè)定第一頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一一、目的要求1.明確血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理2.掌握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。第二頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一二、基本原理

微生物個(gè)體生長(zhǎng)的時(shí)間較短,很快進(jìn)入分裂繁殖階段,個(gè)體生長(zhǎng)難以測(cè)定。它們的生長(zhǎng)一般以繁殖即群體生長(zhǎng)作為微生物生長(zhǎng)的指標(biāo)。群體生長(zhǎng)表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。測(cè)定數(shù)目的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板計(jì)數(shù)法、光電比濁法等。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待測(cè)樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上,于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡(jiǎn)便、快速、直觀的方法。

第三頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一三、實(shí)驗(yàn)材料酵母菌液顯微鏡、血球計(jì)數(shù)器3.蓋玻片、毛細(xì)管等第四頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一4-2血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片,有四條豎槽和一條橫槽。橫槽兩邊的平臺(tái)上各有一個(gè)有九個(gè)大方格的方格網(wǎng),中間大方格為計(jì)數(shù)室:邊長(zhǎng)為1mm,深為0.1mm,容積為0.1mm3(10-4ml)。計(jì)數(shù)室有兩種規(guī)格:一是分為16個(gè)中方格,每中方格中有25個(gè)小方格;另一種是分為25個(gè)中方格,每中方格有16個(gè)小方格。兩種都共有400個(gè)小方格。第五頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一第六頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一4-2第七頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一16小格×25大格計(jì)數(shù)室

25小格×16大格計(jì)數(shù)室

計(jì)數(shù)室的兩種刻度形式第八頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一.酵母菌數(shù)量的檢測(cè)(顯微鏡直接計(jì)數(shù)法)注意事項(xiàng):

取樣時(shí)先要搖勻菌液;加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。B.調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)。第九頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一

1.取清潔無(wú)油的血球計(jì)數(shù)板,在計(jì)數(shù)室上面加蓋玻片。

2.取酵母菌液,搖勻,用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴,使菌液自行滲入,計(jì)數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。

3.靜止5min后,用低倍鏡觀察并將計(jì)數(shù)室移至視野中央。

4.在高倍鏡下計(jì)數(shù):隨機(jī)計(jì)數(shù)五個(gè)中格的平均值,然后求得每個(gè)中格的平均值。乘上16(或25)就得出一大格中的總菌數(shù),最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容第十頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一

5.計(jì)算方法:

6.注意事項(xiàng):壓在方格線上的菌體,以壓在底線和右側(cè)線上的菌體計(jì)入本格內(nèi);遇到有芽體的酵母時(shí),若芽體和母體同等大,就按單個(gè)酵母計(jì)數(shù)。

7.計(jì)數(shù)完畢后,血球計(jì)數(shù)板要立即清洗干凈,并用吸水紙吸干,最后用擦鏡紙擦干凈,并放回盒內(nèi)。

(X1+X2+X3+X4+X5)5X25(或16)X10X1000x稀釋倍數(shù)

酵母菌細(xì)胞數(shù)/mL=四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容第十一頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1、結(jié)果記錄:將計(jì)數(shù)結(jié)果記錄下表。A表示五個(gè)中方格中的總菌數(shù)。B稀釋倍數(shù)為102。注:1mL菌液總數(shù)=A/5×25×104×B=5×107×A第十二頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一細(xì)菌大小的測(cè)定

第十三頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一一、目的要求學(xué)習(xí)測(cè)微尺的使用和計(jì)算方法利用測(cè)微尺測(cè)量微生物的大小第十四頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一二、基本原理

微生物個(gè)體生長(zhǎng)的時(shí)間較短,很快進(jìn)入分裂繁殖階段,個(gè)體生長(zhǎng)難以測(cè)定。它們的生長(zhǎng)一般以繁殖即群體生長(zhǎng)作為微生物生長(zhǎng)的指標(biāo)。群體生長(zhǎng)表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。測(cè)定數(shù)目的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板計(jì)數(shù)法、光電比濁法等。微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征,也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物大小的測(cè)定,需要在顯微鏡下,借助于特殊的測(cè)量工具即測(cè)微尺,包括目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺。第十五頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一三、實(shí)驗(yàn)材料酵母菌液顯微鏡、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺3.載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、膠頭吸管等第十六頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容注意事項(xiàng):觀察時(shí)光線不宜過(guò)強(qiáng),否則難以找到鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度;換高倍鏡和油鏡校正時(shí),務(wù)必十分小心,防止接物鏡壓壞鏡臺(tái)測(cè)微尺和損壞鏡頭。1.測(cè)微尺的校正(標(biāo)定):兩重合線間鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)Ⅹ10目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度(μm)=

兩重合線間目鏡測(cè)微尺格數(shù)2.酵母菌大小的測(cè)定:利用制好的血球器浸片,用高倍鏡測(cè)出寬和長(zhǎng)各占目鏡測(cè)微尺的格數(shù),再將測(cè)到的格數(shù)乘以目鏡測(cè)微尺(用高倍鏡時(shí)標(biāo)定的)每格所代表的長(zhǎng)度,即為酵母菌的實(shí)際大小。第十七頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(1)將目鏡測(cè)微尺校正結(jié)果填入下表:

接目鏡放大倍數(shù):-10×-第十八頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(2)將酵母菌大小測(cè)定結(jié)果填入下表:第十九頁(yè),共二十一頁(yè),編輯于2023年,星期一五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告2.思考題:在不改變目鏡和目鏡測(cè)微尺,而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來(lái)測(cè)

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