潔凈區(qū)的環(huán)境監(jiān)控

潔凈區(qū)的環(huán)境監(jiān)控第一頁，共十八頁，2022年，8月28日目錄總則潔凈區(qū)級別劃分污染來源監(jiān)控項(xiàng)目懸浮粒子檢測沉降菌檢測浮游菌檢測表面微生物檢測第二頁，共十八頁，2022年，8月28日總則1.對潔凈區(qū)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控的目的GMP中規(guī)定原料藥、制劑以及部分醫(yī)療器具必須在特定環(huán)境下生產(chǎn)，特別是無菌藥品均采用無菌生產(chǎn)工藝，為維護(hù)藥品生產(chǎn)用潔凈區(qū)環(huán)境的穩(wěn)定性、確保藥品質(zhì)量安全，對潔凈區(qū)環(huán)境質(zhì)量采取合理的控制措施和評價(jià)非常重要。環(huán)境監(jiān)測是用來評估生產(chǎn)環(huán)境控制是否有效的一個(gè)工具。為了使?jié)崈魠^(qū)的環(huán)境質(zhì)量能得到有效控制并被客觀評價(jià)，應(yīng)對他進(jìn)行全面監(jiān)控。第三頁，共十八頁，2022年，8月28日潔凈區(qū)級別劃分無菌藥品生產(chǎn)所需的潔凈區(qū)可分為個(gè)級別:

A級：高風(fēng)險(xiǎn)操作區(qū)，應(yīng)當(dāng)用單向流操作臺維持該區(qū)的環(huán)境狀態(tài)。并有數(shù)據(jù)證明單向流的狀態(tài)并經(jīng)過驗(yàn)證。B級：指無菌配置和灌裝等高風(fēng)險(xiǎn)操作A級潔凈區(qū)所處的背景區(qū)域。C級和D級：指無菌藥品生產(chǎn)過程中重要程度較低操作步驟的潔凈區(qū)。

第四頁，共十八頁，2022年，8月28日污染來源1空氣藥品生產(chǎn)必然接觸空氣無論是房間空氣還是層流空氣都是污染的主要來源。2010版GMP無菌藥品附錄中規(guī)定應(yīng)對潔凈區(qū)的懸浮粒子和微生物進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測。2接觸表面在生產(chǎn)時(shí)，設(shè)備表面會(huì)直接接觸產(chǎn)品，同時(shí)墻面、底板雖然不直接接觸產(chǎn)品表面，也可能通過空氣污染產(chǎn)品。因此，應(yīng)該檢測所有的區(qū)域，而不只限于設(shè)備表面。3人人是潔凈區(qū)環(huán)境的最大污染源，人員的數(shù)量和活動(dòng)量直接會(huì)影響到整個(gè)潔凈區(qū)的環(huán)境質(zhì)量。人身上有大量的微生物，包括需氧菌和厭氧菌。因此生產(chǎn)人員特別要注意人員衛(wèi)生。第五頁，共十八頁，2022年，8月28日監(jiān)控項(xiàng)目1空氣懸浮粒子2空氣浮游菌3空氣沉降菌4表面微生物第六頁，共十八頁，2022年，8月28日監(jiān)控項(xiàng)目潔凈區(qū)的各項(xiàng)限度具體如下表第七頁，共十八頁，2022年，8月28日懸浮離子的檢測1空氣中的懸浮粒子

微生物不是憑空存在的，99%的微生物都附在顆粒上。控制空氣中的微粒數(shù)，就是控制了微生物數(shù)量。目前，由于測定空氣中的懸浮粒子的儀器是光散射離子計(jì)算器和激光粒子計(jì)數(shù)器。為了掌握整個(gè)生產(chǎn)過程中的空氣懸浮粒子狀況,通常將檢測活動(dòng)安排在操作開始前、操作進(jìn)行中及操作結(jié)束后三個(gè)階段進(jìn)行。最好在A級區(qū)內(nèi)采用適當(dāng)?shù)南到y(tǒng)對空氣懸浮粒子進(jìn)行連續(xù)性檢測。監(jiān)測中的注意事項(xiàng)如下：1嚴(yán)格按照儀器生產(chǎn)商要求操作和使用2事先確認(rèn)潔凈區(qū)通風(fēng)系統(tǒng)運(yùn)行平穩(wěn)后，方可進(jìn)行取樣。3檢測單向流時(shí)，將計(jì)數(shù)器取樣口正對著氣流方向；檢測紊亂流時(shí)，亦將取樣口垂直朝上。4在單向流系統(tǒng)中，應(yīng)采用等動(dòng)力學(xué)的取樣頭。5再確認(rèn)級別時(shí)，應(yīng)使用采樣管較短（一般在1m以內(nèi)）的便攜式塵的操作埃粒子計(jì)數(shù)器，以避免在遠(yuǎn)程采樣系統(tǒng)長的采樣管中≥5.0μm塵埃的沉降。6取樣時(shí)，每次取樣量不得少于2.83L（為了確定A級區(qū)的級別，每個(gè)采樣點(diǎn)的采樣量不得少于1m3）。7監(jiān)測系統(tǒng)的選擇還應(yīng)考慮生產(chǎn)操作的物料（例如有活的生物體或放射性藥品的操作）帶來的風(fēng)險(xiǎn)。第八頁，共十八頁，2022年，8月28日測試時(shí)的要求測試規(guī)則

1潔凈室（區(qū)）的溫度和相對濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)（溫度控制在18℃～26℃，相對濕度控制在45%～65%之間為宜）。2壓差：空氣潔凈度不同的潔凈室（潔凈區(qū)）之間的壓差應(yīng)≤5Pa，空氣潔凈度級別要求高的潔凈室（潔凈區(qū)）對相鄰的空氣潔凈度級別低的潔凈室（潔凈區(qū)）一般呈相對正壓。測試狀態(tài)測試狀態(tài)分為靜態(tài)測試和動(dòng)態(tài)測試靜態(tài)測試時(shí)，室內(nèi)測試人員不得多于2人。動(dòng)態(tài)測試指潔凈室已處于正常狀態(tài)下的測試。測試時(shí)間測試應(yīng)在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于30min后開始。第九頁，共十八頁，2022年，8月28日測試時(shí)的要求采樣點(diǎn)的位置采樣點(diǎn)一般在離地面0.8m高度的水平面上均勻布置。采樣點(diǎn)多于5點(diǎn)時(shí)，也可以在離地面0.8m—1.5m高度的區(qū)域內(nèi)分層布置，但每層不少于5點(diǎn)。采樣點(diǎn)的布置還可根據(jù)需要在生產(chǎn)及工藝關(guān)鍵操作區(qū)增加采樣點(diǎn)。采樣點(diǎn)數(shù)目

對任何小潔凈室或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點(diǎn)的數(shù)目不得少于2個(gè)，總采樣次數(shù)不得少于5次。每個(gè)采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以多于1次，且不同采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以不同。不同潔凈度級別每次最小的采樣量見表。潔凈度級別采樣量，L/次≥0.5μm≥5μm1005.66----100002.838.51000002.838.53000002.838.5第十頁，共十八頁，2022年，8月28日空氣微生物的檢測—沉降菌的檢測

在制藥生產(chǎn)企業(yè)，生物公司或醫(yī)療器械企業(yè)中，雖然離子取樣可以用來陪嫁空氣的質(zhì)量，但是微生物的污染是生產(chǎn)環(huán)境最重要的因素，它與最終的產(chǎn)品微生物污染水平控制有關(guān)。雖然在所有生產(chǎn)的最終產(chǎn)品都要求控制微生物污染（包括那些最最滅菌的產(chǎn)品），但這對無菌生產(chǎn)過程顯得尤為重要。（一）沉降菌的檢測通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判斷潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。

1將培養(yǎng)基加熱熔化，冷至45℃時(shí)，自無菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15mL。2待瓊脂凝固后，將培養(yǎng)基平皿倒置于30℃—35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿宜在2℃—8℃的環(huán)境中存放。3將已制備好的培養(yǎng)皿，按潔凈室沉降菌采樣點(diǎn)布置圖的要求放置，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露30分鐘，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。4作全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在30℃—35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于48h。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染?？擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。5菌落計(jì)數(shù)

⑴用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)記，然后用5—10倍放大鏡檢查，是否遺漏。⑵若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。第十一頁，共十八頁，2022年，8月28日空氣微生物的檢測—沉降菌的檢測測試規(guī)則

1沉降菌測試前，被測試潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速控制在規(guī)定值內(nèi)。2沉降菌測試前，被測試潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過消毒。3測試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告中注明測試狀態(tài)。測試人員

1測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。2靜態(tài)測試時(shí)，室內(nèi)測試人員不得多于二人。測試時(shí)間

1對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)運(yùn)行不少于10min后開始。2對非單向流，如10000級，100000級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開始。為被動(dòng)取樣的沉降跌（平皿徑一般為90mm），用于環(huán)境中沉降菌的檢測。沉降碟以其廉價(jià)、輕便、對空氣環(huán)境破壞較小等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛用于潔凈區(qū)的環(huán)境監(jiān)測。不足之處在于它只能作為定性測試，所獲得數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性較差。但在層流區(qū)，沉降碟不會(huì)干擾氣流方向，不視為一種比較好的方法。為了盡可能的獲得可靠性數(shù)據(jù)，沉降碟的放置時(shí)間不宜過短，至少半個(gè)小時(shí)，不大于4小時(shí)。因?qū)Τ两档谋┞稌r(shí)間進(jìn)行確認(rèn)，以保證暴露的培養(yǎng)及不會(huì)因失水而影響微生物生長。第十二頁，共十八頁，2022年，8月28日空氣微生物的檢測—浮游菌的檢測

浮游菌是指通過一定方法收集懸浮在空氣中的活微生物離子，通過專門的培養(yǎng)架，在適宜的生長條件下繁殖可見的菌落數(shù)。測試浮游菌的方法為計(jì)數(shù)濃度法。即通過收集懸浮在空氣中的生物性粒子與專門的的培養(yǎng)基（選擇能證明其能夠支持微生物生長的培養(yǎng)基），經(jīng)過若干時(shí)間和適宜的生長條件讓其繁殖到可見的菌落計(jì)數(shù)，以判定該潔凈室的微生物濃度。測試要點(diǎn)1必須按照測試儀器的檢定周期，定期對儀器做檢定。使用校檢合格，且在使用有效期內(nèi)的儀器。2測試儀器在未進(jìn)入被測區(qū)域時(shí)，若必需，則先清潔表面，或在相應(yīng)的潔凈室內(nèi)準(zhǔn)備和存放（用保護(hù)罩或其它適當(dāng)?shù)赝庹直Ｗo(hù)儀器）。3在100級潔凈室內(nèi)用紙時(shí)，上面應(yīng)蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100級潔凈室內(nèi)不能用鉛筆和橡皮。4使用測試儀器時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照儀器說明書操作。第十三頁，共十八頁，2022年，8月28日空氣微生物的檢測—浮游菌的檢測測試步驟1測試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。采樣器進(jìn)入被測房間前先用消毒房間的消毒劑消毒，用于100級潔凈室的采樣器宜預(yù)先放在被測房間內(nèi)。用消毒機(jī)擦凈培養(yǎng)皿的外表面。采樣口和采樣管使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管外壁及內(nèi)壁進(jìn)行消毒時(shí)，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。采樣者應(yīng)穿戴與被測潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放上或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒或戴無菌手套操作。2采樣器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5min。關(guān)閉采樣器，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子。置采樣口與采樣點(diǎn)后，開啟浮游菌采樣器進(jìn)行采樣。3全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗(yàn)，校驗(yàn)培養(yǎng)本身是否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。4用肉眼對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5—10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。第十四頁，共十八頁，2022年，8月28日空氣微生物的檢測—浮游菌的檢測測試條件在測試之前，要對潔凈區(qū)相關(guān)參數(shù)進(jìn)行預(yù)先測試，這類測試將會(huì)提供測試懸浮粒子環(huán)境條件，例如：這種預(yù)先測試或可包括：⑴溫度和相對濕度的測試。潔凈區(qū)的溫度和轄區(qū)能夠?qū)穸扰c其生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)（無特殊要求時(shí)溫度在18℃—26℃，相對濕度在45%-—65%為宜），同時(shí)應(yīng)滿足測試儀器的適用范圍；⑵室內(nèi)送風(fēng)量或風(fēng)速的測試，或壓差的測試；⑶高效過濾器的泄漏測試。測試狀態(tài)靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種狀態(tài)均可進(jìn)行測試；靜態(tài)測試時(shí)，室內(nèi)測試人員不得多于2人；浮游菌測試前，被測潔凈室有用戶決定是否需要預(yù)先消毒；測試報(bào)告中應(yīng)標(biāo)明測試時(shí)所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測試人員數(shù)。測試時(shí)間1靜態(tài)測試或空態(tài)測試時(shí)，在單向流潔凈區(qū)時(shí)測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于10min后開始。對于非單向流潔凈區(qū)宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于30min后開始。2在動(dòng)態(tài)測試時(shí)，則須記錄生產(chǎn)開始時(shí)間已測試時(shí)間。第十五頁，共十八頁，2022年，8月28日表面微生物檢測除了用空氣微生物取樣來檢測生產(chǎn)環(huán)境的微生物污染水平外，表面檢測也可以檢測到生產(chǎn)區(qū)域表面以及設(shè)備與產(chǎn)品接觸面的微生物量。檢測的方法必須考慮取樣的準(zhǔn)確性和代表性?；镜臋z測方法包括觸碟法、查實(shí)法以及表面沖洗法。每種提供的數(shù)據(jù)都可以用于產(chǎn)品質(zhì)量的評價(jià)。測試方法可以定性和定量。而且取樣的準(zhǔn)確性受收集和處理樣品的過程影響，因此必須對取樣進(jìn)行培訓(xùn)和測試。（1）接觸碟法接觸碟容易操作而卻可以定量。因此被廣泛使用，使用于對平整的規(guī)則型表面進(jìn)行取樣監(jiān)測，不適用于不規(guī)則表面。培養(yǎng)基充滿培養(yǎng)皿，取樣面積為25cm2取樣時(shí)，確保全部瓊脂培養(yǎng)基表面與取樣點(diǎn)表面充分接觸。取樣后，需用蘸有70%乙醇的紗布擦拭取樣表面，以除去殘留瓊脂。將取樣后并做好記號的接觸碟置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，讀書，記錄。（2）擦拭法該方法通常用于對不規(guī)則表面（設(shè)備表面）進(jìn)行取樣。把無菌棉簽在0.9氯化鈉或蛋白無菌溶液中浸一下，在無菌條件下用棉簽擦拭待驗(yàn)物表面，然后打開培養(yǎng)皿蓋用棉簽在培養(yǎng)基表面擦拭，取樣面積一般約為25cm2。立即蓋上培養(yǎng)皿蓋進(jìn)行培養(yǎng)。擦拭檢物的棉簽放入預(yù)先準(zhǔn)備好的塑料袋中，統(tǒng)一處理。表面微生物檢測位點(diǎn)選擇第十六頁，共十八頁，2022年，8月28日表面微生物檢測表面微生物檢測位點(diǎn)選擇表1監(jiān)測位點(diǎn)選擇系統(tǒng)位點(diǎn)