天然藥物化學(xué)總結(jié)

22天然藥物化學(xué)總結(jié)緒1、然藥物化學(xué)是運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)理論與方法研究天然藥物中化學(xué)成分的一門學(xué)科。研究?jī)?nèi)容：各類天然藥物化學(xué)成分（主要是生理活性成分或藥效成分）的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、物理化學(xué)質(zhì)、提取分離純化方法、結(jié)構(gòu)鑒定、生物合成途徑。2、然藥物：指人類在自然界中發(fā)現(xiàn)并可直接供藥用的植物、動(dòng)物、礦物、海洋生物、微生物等，及基本不改變其藥理化學(xué)屬性的加工品。3、（）次代謝物primarymetabolites)：類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸等對(duì)機(jī)體生命活動(dòng)來(lái)說不可缺少的物質(zhì)，普遍存在于動(dòng)物、植物及微生物中。（）次代謝物secondary：個(gè)屬、種或系統(tǒng)的生物所有的，主要在植物、微生物中比較常見的物質(zhì)。這類化合物結(jié)構(gòu)富于變化，多數(shù)具有明顯的生理活性。如生物堿、黃酮類、苷（甙）、醌類、萜類、揮發(fā)油、苯丙素類、甾體類、鞣質(zhì)、樹脂、色素等。4、然藥物的化學(xué)成分特點(diǎn)）化學(xué)分復(fù)雜具有多種臨床用途。分類：（）效成分ActiveConstituents過同程度的藥效試驗(yàn)或生物活性試驗(yàn)，包括體外和體內(nèi)試驗(yàn)，證明對(duì)機(jī)體具有一定生理活性的成分。一般是單體化合物：能分子式和結(jié)構(gòu)式表示2.具一定的理化常數(shù)3.具一定的生理活性。（）效部位Active具有生理活性的多種化學(xué)成分的混合物。（）效成分與有效成分共存的無(wú)生理活性的其它成分。（）毒成分生合1、酮類化合物可根據(jù)分子結(jié)構(gòu)中醋酸單位C單位）的數(shù)目進(jìn)行命名，如聚庚酮類、聚己類等。2、基酸途徑作為前體的氨基酸：（）肪族：氨酸、賴氨酸酸原氨化生成）（）香族：丙氨酸、酪氨酸、色氨酸（莽草酸途徑生成）3、合途徑：（）個(gè)化合分子有來(lái)自個(gè)2個(gè)上不同生物合成途徑的單元。常見有：醋酸丙酸莽酸途徑醋酸丙酸甲二羥酸途徑氨基酸甲二羥酸途徑氨基酸醋酸-丙酸途徑氨基酸莽酸途徑（）個(gè)化合分子在不同植物中有不同的生物合成途徑。4、本途徑莽草酸途徑赤糖4-磷酸出發(fā)生成苯丙氨酸氨酸氨和鄰氨基苯甲酸的生物合成途徑。

236236途

過

產(chǎn)

單醋酸丙酸途徑（AA-MA）

起物乙酰乙酰

延物丙二酸單酰CoA丙二酸單酰CoA

具過縮合還交替進(jìn)行只縮合不還原

聚類脂肪酸類酚類、蒽酮類

C途

過

產(chǎn)

單甲戊二羥酸途徑（）桂皮酸途徑氨基酸途徑（AA）

苯丙氨酸經(jīng)苯丙氨酸脫氨酶（）脫氨后生成桂皮酸，進(jìn)而得到苯丙類化合物。再經(jīng)環(huán)化、氧化、還原等，可得到黃酮類C-C-C骨）等化合物。636氨基酸脫羧成胺類，再經(jīng)甲基化、氧化、還原、重排等系列反應(yīng)得到生物堿。本途徑僅存在于植物、微生物中，是其特有氮代謝方式。

萜類、甾類、類胡蘿卜素類苯丙素類（-C63骨架）生物堿

CCAA提分方1、備工作（）確研究料的學(xué)名、產(chǎn)地來(lái)源、采集時(shí)間與方法、使用部位（全料狀態(tài)（新鮮干品新鮮品不宜用與水不互溶的溶劑；而干燥品的干燥程度取決于目標(biāo)化合物的穩(wěn)定性。一般情況，樣品要充分干燥、盡可能粉碎，提取效率高，提取操作、提取液的濃縮均較易進(jìn)行。注意樣品不能粉碎過細(xì)，目宜。（）確研究標(biāo)提分已成或知學(xué)構(gòu)型：閱文獻(xiàn)，找出該成分或該類結(jié)構(gòu)類型成分各種提取分離方案，再根據(jù)具體情況加以選用。提分未有成或效位：理活性指導(dǎo)下提取分離；化學(xué)結(jié)構(gòu)類型的理化性質(zhì)指導(dǎo)下提取分離；根據(jù)化合物極性大小的不同系統(tǒng)提取分離。2、意問題（）效成分丟失：含量高且有效、含量高且無(wú)效、含量低但有效（）制不純理化性質(zhì)相近的化合物不易分離，對(duì)進(jìn)一步的化學(xué)研究及藥理試產(chǎn)生影響。3、?。ǎ﹦┨崛「鶕?jù)天然藥物中種成分在不同溶劑中的溶解度不同用有效成分溶解度大雜質(zhì)成分溶解度小的溶劑，將有效成分從藥材組織中溶解出來(lái)的方法。溶劑通過擴(kuò)散、滲透作用不斷透過細(xì)胞壁、細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，溶解可溶性成分，造成細(xì)胞內(nèi)的濃度差。

溶劑選擇的依據(jù)—“相似相溶”常用提取溶劑及其極性強(qiáng)弱順序：石油醚≈正己烷＜四氯化碳＜苯＜二氯甲烷＜無(wú)水乙醚＜氯＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水＜吡啶＜乙酸溶劑的選擇原則根據(jù)材料的狀態(tài)目標(biāo)成分易溶，雜質(zhì)成分難溶惰性，不與目標(biāo)成分反應(yīng)，或反應(yīng)可逆經(jīng)濟(jì)安全、后續(xù)操作容易進(jìn)行傳統(tǒng)提取方法現(xiàn)代提取方法微輔提法microwave-assistedextraction）微波輔助提取是利用微波能來(lái)提高提取率的一種新技術(shù)。在微波場(chǎng)中，微波輻射導(dǎo)致植物細(xì)胞的極性物質(zhì)（水分子）吸收微波能，產(chǎn)生大量熱量，使細(xì)胞內(nèi)溫度迅速上升，液態(tài)水汽化產(chǎn)生的壓力將細(xì)膜和細(xì)胞壁沖破，形成微小的孔洞。進(jìn)一步加熱，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)部和細(xì)胞壁水分減少，細(xì)胞收縮，表面出現(xiàn)裂紋。洞和裂紋的存在使胞外溶劑容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，溶解并釋放出胞內(nèi)物質(zhì)。微波場(chǎng)中吸收微波能力的差異使得基體物質(zhì)的某些區(qū)域或萃取體系中的某些組分被選擇性加熱從而使得被萃取物質(zhì)從基體或體系中分離，進(jìn)入到介電常數(shù)較小、微波吸收能力相對(duì)較差的萃取劑中。a微波加熱熱效率高，升溫快速而均勻，可顯著縮短提取時(shí)間，提高提取效率。b設(shè)備簡(jiǎn)單、適用范圍廣、重現(xiàn)性好、節(jié)省試劑、污染小等。超提法空化作用超聲波在液體中傳播時(shí)液介質(zhì)不斷受到壓縮和拉伸伸會(huì)在液體內(nèi)部產(chǎn)生近似真空的小空洞；而壓縮時(shí)，這些空洞發(fā)生崩潰，會(huì)使液體微粒間發(fā)生猛烈的撞擊作用。崩潰空洞內(nèi)部最高瞬時(shí)壓力可達(dá)幾萬(wàn)個(gè)大氣壓，同時(shí)還將產(chǎn)生局部的高溫以及放電現(xiàn)象等。微粒間這種劇烈的相互用，起到很好的攪拌、分散，并使液體的溫度驟然升高，從而使兩種不相溶的液體發(fā)生乳化，加速溶質(zhì)的溶解促進(jìn)化學(xué)反應(yīng)。利用超聲波的空化作用，破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，使其在瞬間破裂，植物細(xì)胞內(nèi)的成分得以釋放，直進(jìn)入溶劑，加速植物有效成分的浸出提取；另外，超聲波的次級(jí)效應(yīng)，如機(jī)械振動(dòng)、乳化、擴(kuò)散、擊碎、學(xué)效應(yīng)等也能加速欲提取成分的擴(kuò)散釋放并充分與溶劑混合，利于提取。優(yōu)點(diǎn)：提取時(shí)間短、提取效率高、無(wú)需加熱等。注意：提取瓶的放置位置、瓶壁的厚薄等會(huì)影響提取效果。超界體取超臨界流體：溫度、壓力均高于臨界點(diǎn)的流體。其對(duì)物質(zhì)的溶解能力隨溫度和壓力的改變而在當(dāng)寬的范圍

內(nèi)變動(dòng)。超臨界流體相對(duì)接近液體的密度，使它有較高的溶解度；而其相對(duì)接近氣體的粘度，使它具有好的流動(dòng)性、擴(kuò)散性，對(duì)所需萃取的物質(zhì)組織有較好的滲透性。從而提高了溶質(zhì)進(jìn)入超臨界流體的傳質(zhì)速率為提高選擇性，可加入夾帶劑。優(yōu)點(diǎn)：可以在近常溫的條件下提取分離，幾乎保留產(chǎn)品中全部有效成分，無(wú)有機(jī)溶劑殘留，產(chǎn)純度高，操作簡(jiǎn)單、節(jié)能。酶提通過酶反應(yīng)較溫和的將植物組織分解，加速有效成分的釋放提?。粚⒂绊懸后w制劑的雜質(zhì)如淀、蛋白質(zhì)、果膠等分解去除，提高中藥液體制劑的澄清度；將某些極性低的脂溶性成分轉(zhuǎn)化為糖苷類易溶水的成分，從而有利于提取。注意使用酶的濃度物制劑動(dòng)劑等藥材與水的比例值度間。仿提法模擬口服藥經(jīng)胃腸道環(huán)境轉(zhuǎn)運(yùn)的原理而設(shè)計(jì)的提取方法。盡可能地保留原藥中的有效成分（包在體內(nèi)有效的代謝物、水解物、螯合物或新的化合物系統(tǒng)溶劑分步提根據(jù)提取要求、目的成分及雜質(zhì)的性質(zhì)差別、溶劑的溶解能力來(lái)確定提取方法：a將固體藥材按極性遞增方式用不同溶劑依次提取。石醚汽：脂、蠟、葉綠素、揮發(fā)油、游離甾體及三萜類等氯、酸酯游離生物堿、有機(jī)酸、黃酮苷元、香豆素等丙、醇甲：類、生物堿鹽、鞣質(zhì)等水氨基酸、糖類、無(wú)機(jī)鹽等水溶成分b將藥材直接用乙醇、含水乙醇或含水丙酮提取，提取液濃縮成浸膏，拌以硅藻土等輔料，減壓干燥成粉，再用不同極性溶劑分步處理。影響因素a中草藥成分間的相互作用對(duì)溶解度的影響（增溶、沉淀）b粉碎度c提取時(shí)間d提取溫度（）蒸氣蒸法適用于具有揮發(fā)性的、能隨水蒸汽蒸餾而不被破壞、與水不發(fā)生反應(yīng)且難溶或不溶于水的成分提取。原理：兩種互不相溶的液體共存時(shí)，其總蒸汽壓等于各組分同一溫度下蒸汽壓之和。由于體系總蒸汽壓比任一純組分的蒸汽壓高，所以混合物的沸點(diǎn)要比任一純組分的沸點(diǎn)低。（）華法適用于具有升華性質(zhì)的化合物的提取與提純。簡(jiǎn)單易行，但回收不完全，并常伴有分解現(xiàn)象，產(chǎn)率低，適用于微量物質(zhì)的精制，很少用于大模生產(chǎn)制備。（）榨法4、離與精制（）法根物溶度別行離結(jié)晶法、沉淀法、鹽析法根物在相劑的配不進(jìn)分：液液取法、逆流分溶法滴流色譜法DCCD速逆流色譜法（HSCCC液分配色譜法或GLC液分配色譜法LC或）根物的附差進(jìn)分：硅膠、氧化鋁、活性炭及聚酰胺、大孔吸附樹脂根物分大差進(jìn)分：透析法、凝膠過濾法、超濾法、超速離心法

根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分離離子交換法、電泳（）晶法利用溫度不同引起溶解度的改變以分離精制化合物的方法，是分離精制固體化合物的重要方法一。通過重結(jié)晶進(jìn)一步純化化合物的結(jié)晶；純化合物的結(jié)晶有一定的熔點(diǎn)和結(jié)晶學(xué)特征，有利于化合物性質(zhì)及結(jié)構(gòu)的判斷；結(jié)晶法分離純化的關(guān)鍵：結(jié)晶溶劑的選擇和結(jié)晶條件。結(jié)晶條件需結(jié)晶化合物在混合物中的含量選擇合適的溶劑：?jiǎn)位旌闲杞Y(jié)晶化合物在所選溶劑中的濃度合適的溫度和時(shí)間需結(jié)晶化合物的性質(zhì)：結(jié)晶性弱的化合物需要制備結(jié)晶性的衍生物或鹽，如生物堿制為鹽酸鹽氫溴酸鹽、過氯酸鹽、苦味酸鹽等，羥基化合物制為乙?；苌锝Y(jié)晶溶劑選擇理想的結(jié)晶溶劑需具備的條件：不與要結(jié)晶化合物起化學(xué)反應(yīng)；選擇性好；其它雜質(zhì)在溶劑中溶解度對(duì)溫度的依賴性小，對(duì)雜質(zhì)的溶解度非常大或非常小；溶劑的粘度要小，利于固液分離，且應(yīng)使要結(jié)晶化物容易成核，生成的晶體較完善。如何選擇：查閱文獻(xiàn)，參考同類型化合物的一般溶解性質(zhì)和結(jié)晶條件；根據(jù)要結(jié)晶化合物的極大小，利用相似相溶規(guī)律通過實(shí)驗(yàn)選擇溶劑；無(wú)理想單一溶劑時(shí)，可使用混合溶劑（一般選擇對(duì)樣品溶解度很大很小的而又能夠互溶的兩種溶劑混合使用結(jié)晶純度的判斷晶形、色澤，熔點(diǎn)與熔距，薄層層析或紙層析，高效液相層析、氣相層析。（）淀法提取物中加入某些試劑使產(chǎn)生沉淀，以獲得有效成分或除去雜質(zhì)的方法。應(yīng)注意的問題：沉淀的方法和技術(shù)要具有選擇性；對(duì)于一些活性物質(zhì)（如酶、蛋白質(zhì)等）的沉分離，必須考慮沉淀方法對(duì)目標(biāo)成分的活性和化學(xué)結(jié)構(gòu)是否破壞；殘留物對(duì)人體的危害。改變?nèi)芤褐谢旌蟿┑臉O性水醇：沉淀除去糖類蛋白質(zhì)等水溶性雜質(zhì)醇水：沉淀除去樹脂葉綠素等水不溶性雜質(zhì)醇醚或/丙酮法：皂苷類成分沉淀析出改變?nèi)芤旱膒H酸堿：生物堿類成分分離堿酸：黃酮、蒽醌類酸性成分的分離等電點(diǎn)沉淀法：蛋白質(zhì)的分離加入沉淀試劑（鈣、鋇、鉛鹽）（）析法中草藥的水提取液中，加入無(wú)機(jī)鹽至一定濃度或達(dá)到飽和狀態(tài)，使某些成分在水中的溶解度降，沉淀析出或被有機(jī)溶劑提取出的分離方法。常用的無(wú)機(jī)鹽NaCl、NaSO、MgSO、(NHSO等。24424（）析法利用小分子及小離子在溶液中可通過半透膜，而大分子及大離子不能通過的性質(zhì)而達(dá)到分離的法。常用于純化皂苷、蛋白質(zhì)、多肽和多糖等化合物，可除去其中的無(wú)機(jī)鹽、單糖、雙糖等。透析膜的種類：動(dòng)物性膜、火棉膠膜、羊皮紙膜（硫酸紙膜紙、蛋白膠（明膠）膜等。擇原則：根據(jù)透析膜的膜孔大小與被分離成分的分子大小來(lái)選擇。（）餾法原理：利用沸點(diǎn)不同進(jìn)行分離。分餾法則利用多次反復(fù)蒸餾以達(dá)到混合物分離。

o完全互溶的、具有揮發(fā)性的兩組分混合液，達(dá)到液平衡時(shí)，兩組分在氣相與液相中的相對(duì)含量不同。o（）析法（譜法）利用不同化合物在互不相溶的兩相（固定相和流動(dòng)相）中的親和力的不同來(lái)分離物質(zhì)。分類：液相層析法（液固、液相層析法（氣液氣固柱層析法、薄層析法、紙層析法、逆流層析法吸附層析法分層析法膠滲透層析（稱凝膠過濾法分子篩過濾法排層析法交層析法、親和色譜法（）附層析吸附作用物理吸附：分子間作用力，可逆、無(wú)選擇性（吸附層析常用）化學(xué)吸附：化學(xué)鍵，不可逆、有選擇性半化學(xué)吸附：氫鍵作用吸附層析三要素被分離物、吸附劑、洗脫劑物理吸附基本規(guī)——相似者易于吸附4．合物極性的強(qiáng)弱的判斷a化合物的極性由分子中所含官能團(tuán)的種類、數(shù)目及排列方式等綜合因素所決定。b能團(tuán)的極性強(qiáng)弱順序>>H-OH>R-OH>R-NH,R’R’>R-CO-N-’R-CHO>R-CO-R>2R-COOR>’>>R-Hc溶液中酸性、堿性及兩性有機(jī)化合物的極性強(qiáng)弱受溶液pH影。溶劑極性強(qiáng)弱判：介電常數(shù)（越大極性越強(qiáng)）常用的固定相吸劑無(wú)機(jī)吸附劑：硅膠、氧化鋁、活性炭等有機(jī)吸附劑：聚酰胺、聚苯乙烯（大孔吸附樹脂）等簡(jiǎn)吸附進(jìn)物質(zhì)的濃縮與精制用活性炭脫色、脫臭從大量稀水溶液中濃縮微量物質(zhì)常的附析硅層析（一般相）常用硅膠：硅膠、膠H、硅膠、硅膠HF254硅膠HF254＋、膠CMC硅膠60硅膠的吸附性能取決于：硅羥基的數(shù)目；含水量>17%時(shí)吸附力極弱；硅膠的表面積、表面構(gòu)、微孔體積、微孔半徑等。硅膠薄層板的活化：C，30min硝酸銀硅膠：分離含不飽和雙鍵的幾何異構(gòu)體硅膠層析的應(yīng)用：性或中性化合物氧化鋁層析用于堿性化合物的分離，如生物堿活性炭層析非極性吸附劑，水溶液中吸附力最強(qiáng)，有機(jī)溶劑中較弱。對(duì)不同化合物的吸附力大小：極性基團(tuán)多的化合物＞極性基團(tuán)小的化合物；芳香族化合物＞脂族化合物；大分子量化合物＞小分子量化合物。應(yīng)用溶芳香族化合物與脂肪族化合物的分離與多糖的分離基酸與多肽分離。聚酰胺層析

性質(zhì)：高分子聚合物，不溶于水、醇類、丙酮等，對(duì)堿穩(wěn)定，對(duì)酸尤其是無(wú)機(jī)酸穩(wěn)定性差。吸附原理：氫鍵吸附，適于極性和非極性物質(zhì)分離。適于分離醌類、酚類和黃酮類?；衔锝Y(jié)構(gòu)對(duì)吸附性能的影響：形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目越多，吸附力越強(qiáng)；易形成分子內(nèi)氫鍵者，吸附力減弱；芳香化程度高者，吸附力增強(qiáng)。溶劑對(duì)吸附性能的影響：各種溶劑在聚酰胺柱上的洗脫能力：水甲<丙酮水液甲酰胺二甲基甲酰胺尿水溶液洗脫力越強(qiáng)，作溶劑時(shí)，聚酰胺的吸附能力越弱。聚酰胺的“雙重色譜”性能（在氫鍵作用相同前提下比較含水溶劑為流動(dòng)相時(shí)，聚酰胺為非極性固定相，其色譜行為類似于反相色譜；非含水溶劑如氯甲為動(dòng)相時(shí)胺為極性固定相色譜行為類似于正相色譜。（）相析流相極低固相極，出分性由到；相析流相極高固相的極，出分性強(qiáng)弱對(duì)配譜吸色均用大孔吸附樹脂不含交換基團(tuán)的、具有大孔結(jié)構(gòu)的高分子吸附劑，多為苯乙烯型（非極性，常用）或甲基丙烯酸酯型。特點(diǎn)：多孔性；較大的比表面積；吸附容量大。吸附原理：吸附性——范德華引力或氫鍵；分子篩性——多孔性影響吸附的因素：大孔吸附樹脂本身的性質(zhì)：孔徑、表面積、表面電性、能否與化合物形成氫鍵等；溶劑的性質(zhì)：洗脫劑極性越小，洗脫能力越強(qiáng)（苯乙烯型化合物自身的性質(zhì)分量極氫作用（子量大極小的化合物與非極性大孔吸附樹脂作用強(qiáng)應(yīng)用：從水溶液中分離低極性或非極性化合物，組分間極性差別越大，分離效果越好。使用方法：預(yù)處理——除去雜質(zhì)，恢復(fù)孔的大小，一般順序?yàn)椤掖技妆揭掖肌?。使用——樣品一般用水溶液上柱。洗脫——非極性樹脂可用→含→醇丙乙酸乙酯；極性樹脂則用極性較大的溶劑洗脫（附析為固色，用測(cè)選溶）分層法分類：兩相溶劑萃取法（液液配萃取流續(xù)萃取法、逆流分溶法、液滴逆流層析法、高速逆流色譜、液配柱層析原理：a分配系數(shù)溶質(zhì)溶解在兩種共存的互不相溶的溶劑時(shí)，其在兩相溶劑中的分配比，即K=C/C。UL在一定溫度及壓力下K為常數(shù)。b分離因子βA、兩種溶質(zhì)在同一溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)的比值即β=K/K。AB分離因子反映了兩化合物分離的難易。β=1：和不分離β或β<1：和B可分離β≥，次；＞≥，次；≤，次上

-c分配系數(shù)與pH-對(duì)于酸性、堿性或兩性有機(jī)化合物，溶p的化可改變化合物的存在狀態(tài)，進(jìn)而影響其在溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)。pH＜時(shí)，酸性物質(zhì)多呈非解離狀態(tài)，堿性物質(zhì)多呈離狀態(tài)；pH＞時(shí)酸性物質(zhì)多呈解離狀態(tài)，堿性物質(zhì)多呈非解離狀態(tài)（羧酸類pKa約為5，類pKa9.2～10.8pH=pKa+lg[A]/[HA]一般地，酸性化合物呈離解態(tài)=pKa+，呈游離態(tài)pH=–2，堿性化合物相反——pH梯度取離（配析為液色，用層測(cè)選溶與案）d紙層析（r紙析定，層濾濕為重倍時(shí)＝2）β>50，直接用簡(jiǎn)單萃取<50，采用逆流分溶。e）取過程中易發(fā)生乳化現(xiàn)象，發(fā)生乳化后的處理方法：將乳狀液離心分離；將乳狀液抽濾；將乳狀液加熱或冷凍；加入電解質(zhì)，如、Na、MgSO等244將乳狀液分開，再換新溶劑萃取；加入表面活性更大的表面活性劑。（）相溶劑取法（液配萃取法）利用混合物中的各成分在兩種互不相溶的溶劑中的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離的目的系數(shù)相差,分效率越高。（）逆流連續(xù)萃取法一種連續(xù)的兩相溶劑萃取法，其裝置可具有一根、數(shù)根或更多的萃取管，管內(nèi)用小瓷圈或小的銹鋼絲圈填充，以增加兩相溶劑萃取時(shí)的接觸面。萃取是否完全，可取樣品用薄層層析、紙層析及顯色反應(yīng)或沉反應(yīng)進(jìn)行檢查。（）逆流分溶法）經(jīng)過多次、連續(xù)的液液取分離程，使溶質(zhì)在兩相溶劑相對(duì)作逆流移動(dòng)過程中不斷地重新分配并達(dá)到分離目的的一種分離方法。分離過程：振搖萃取靜分層兩相分轉(zhuǎn)移（→重復(fù)直至完成）優(yōu)點(diǎn)：適于分離性質(zhì)非常相似的混合物缺點(diǎn)：操作時(shí)間長(zhǎng)，易產(chǎn)生乳化，萃取管易因機(jī)械振蕩而損壞，消耗溶劑多（）液滴逆流層析法DCCC）流動(dòng)相呈液滴形式相對(duì)于固定相垂直上升或下降，在細(xì)的分配萃取管中與固定相有效地接觸、擦不斷形成新的表面，促進(jìn)溶質(zhì)在兩相溶劑中的分配。優(yōu)點(diǎn)：分離效果往往比逆流分溶法好，且不會(huì)產(chǎn)生乳化。缺點(diǎn)：流速慢，分離時(shí)間長(zhǎng)；固定相與流動(dòng)相間的傳質(zhì)交換不夠充分；必須選用能生成液滴的劑系統(tǒng)；對(duì)高分子化合物的分離效果較差；處理樣品量??；有一定設(shè)備要求。（）高速逆流色譜（）連續(xù)，無(wú)固定載體（）液液分配柱層析

將兩相溶劑中的一相涂覆在硅膠等多孔載體上，作為固定相填充在色譜管中，然后加入與固定不相混溶的另一相溶劑（流動(dòng)相）沖洗色譜柱。原理：分配析固定相載體：硅膠、硅藻土、纖維素粉等正相分配層析固定相：水、緩沖溶液流動(dòng)相：固定相飽和的氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等弱極性有機(jī)溶劑洗脫順序：化合物極性由小到大依次溶出應(yīng)用：通常用于分離水溶性或極性較大的成分反相分配層析（用）固定相：石蠟油、化學(xué)鍵合固定相、、等流動(dòng)相：水和甲醇或乙腈等強(qiáng)極性有機(jī)溶劑洗脫順序：化合物極性由大到小依次溶出應(yīng)用：適合于分離脂溶性或極性較小的化合物加壓液相層析快速層析（）大壓低壓液相層析（）<5大壓中壓液相層析（MPLC）大氣壓高壓液相層析（）20大壓粒徑約小，分離效果越好，流速越慢，則加壓增大效率，而分離規(guī)模逐步降低。逆層法液-液配層法比：1）作成本低2）備樣品量大3）會(huì)產(chǎn)生不可逆吸附（因?yàn)闆]有固體載體）凝過法又稱凝膠滲透層析、分子篩過濾、排阻層析。（）原理分子大小不同，滲入凝膠顆粒內(nèi)部的程度也不同。越小越易進(jìn)入，則路徑越長(zhǎng)。按照分子由大到小的順序先后流出并分離。Ve=KKlgM（：脫積，：分量（）常用的凝膠種類及其性質(zhì)葡聚糖凝膠Sephadex子作用，如G-25（適于水中應(yīng)用）羥丙基葡聚糖凝Sephadex子作用、反相分配色譜（可使用極性有機(jī)溶劑）膜離術(shù)以選擇型透過膜為分離介質(zhì)，當(dāng)膜兩側(cè)存在壓力差、濃度差或電位差等時(shí)，組分選擇性透過而到分離目的。包括微濾、超濾、納濾和反滲透。離交層法（）原理離子交換，利用大分子樹脂網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)存在的交換基團(tuán)而進(jìn)行的交換性柱層析方法。流動(dòng)相為含水溶液，通過調(diào)整鹽濃度pH值進(jìn)行洗脫。（）離子交換樹脂的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及其分類母核：苯乙-二烯苯離子交換基團(tuán)：陽(yáng)離子型：強(qiáng)酸型：-SO-H3

+弱酸型-COOH陰離子型：強(qiáng)堿型：-(CH)X+33

-弱堿型-NH、、2（一般地，考慮到結(jié)合的可逆性等，用強(qiáng)堿型分離弱/酸化合物，弱酸堿型分離強(qiáng)酸性化合物）影響離子交換的素：溶液的酸堿度、對(duì)交換離子的選擇性、被交換物質(zhì)在溶液中的濃度、溫度、溶劑、其他因素。應(yīng)用用于不同電荷離子的分離，如水提取物中的酸性、堿性、兩性化合物的分離；用于相同電荷離的分離，如堿性大小不同的生物堿的分離。天產(chǎn)結(jié)研法1、構(gòu)研究主要內(nèi)容與程序（）步推斷合物結(jié)構(gòu)類型（）定分子、計(jì)算不飽和度（）定分子含有的官能團(tuán)，或結(jié)構(gòu)片段，或基本骨架（）斷并確分子的平面結(jié)構(gòu)（）斷并確分子的立體結(jié)構(gòu)（構(gòu)型、構(gòu)象）注：獻(xiàn)索調(diào)工貫于構(gòu)究全程2、構(gòu)研究方法（）閱文獻(xiàn)（）合物純的測(cè)定外觀：晶型與色Mp（熔點(diǎn)）（）理常數(shù)定（）子量的定經(jīng)典方法現(xiàn)代方法HR-MS（、、ESI/APCI-MS、）（）子式的定元素分析法質(zhì)譜法HR-MS、位素豐度法、（）飽和度計(jì)算ΩIVI/2+1（：價(jià)原子數(shù)，：價(jià)原子數(shù)，：價(jià)原子）（）子結(jié)構(gòu)架的測(cè)定專屬性反應(yīng)植物親緣相關(guān)性光譜特性部分合成化學(xué)降解（）能團(tuán)的斷化學(xué)法

光譜法（）譜分析推并定知合結(jié)的般序研究順序

研

究方

法

及內(nèi)容1.初步推斷化物型

●樣品源參文●注意察品提分過中行.●測(cè)定關(guān)理學(xué)質(zhì)2.3.4.

分量●利用譜(MS)測(cè)定分量(其他的子測(cè)法可但確低).分式●通過分質(zhì)(果接算得●通過H-NMR的積曲高和CNMR的譜數(shù)分推氫原數(shù)最碳子.●元素量析不和從分式算得.Ω=IV+15.6.7.

IRUV

●推定特官團(tuán)不和等否在.●推定否在飽鍵尤是軛飽鍵及香.●從分離的解子片定能及結(jié)單,進(jìn)而相殘的量推定能組成.8.9.

H●從積曲高可得不等氫子相數(shù).●通過學(xué)移δ)、多度偶合數(shù)J)對(duì)各號(hào)行屬確化合骨結(jié).CNMR●從全去圖的線可不價(jià)原子相數(shù).●從化位及過種偶的定到譜峰多度合數(shù)可各C號(hào)行屬進(jìn)推碳骨結(jié).（、、SPD等10.

2D-NMR●確定維磁振上

、

C信號(hào)歸及合的面立結(jié).11.12.13.

分結(jié)順異立結(jié)

●綜合上研中測(cè)的部結(jié),推可的子構(gòu).●判定推結(jié)與有譜結(jié)是矛盾●通過UV的λmax及H的合數(shù)判.●通過光譜推化物子立化結(jié)構(gòu)構(gòu)、象糖苷1類稱碳水化合carbohydrates光作用的初生產(chǎn)物一類豐的天然產(chǎn)物。（糖類、核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)——命活動(dòng)所必需的四大類化合物2、類glycosides)：糖或糖的衍物與另一非糖物質(zhì)（苷元或配基）過糖的半縮醛或半縮酮羥基與苷元脫水形成的一類化合物。3、類單糖不水解的最簡(jiǎn)單的多羥類半縮酮成糖類及其衍生物的基本結(jié)構(gòu)單元如葡糖等。低聚糖：水解后生成2~9個(gè)糖分子的糖，如蔗糖、麥芽糖多糖：水解后能生成多個(gè)單糖分子的糖類化合物，如淀粉、纖維素等。4差異構(gòu)——含兩個(gè)或兩個(gè)以上手性中心的化合物只一個(gè)手性中心手性不同時(shí)為向異構(gòu)。5、糖的結(jié)構(gòu)表示式（）糖是多基醛或酮，從三碳糖至八碳糖天然界都有存在。以Fischer式表示，氧化態(tài)高的碳在上、最低的碳在下（氧在、原下（）糖在水液中形成半縮醛環(huán)狀結(jié)構(gòu)，即成呋喃糖和吡喃糖。具有六元環(huán)結(jié)構(gòu)的糖——吡喃糖）具有五元環(huán)結(jié)構(gòu)的糖——呋喃糖）

33O

~

O～CH2

D-葡萄糖糖處游離狀態(tài)時(shí)用式（外豎）示，溶液中或苷化成環(huán)后用Haworth式（左右表。（）的相對(duì)型α、β）端基（anomericcarbon羰碳基向異構(gòu)體因端碳上羥基取向而分為α異碳。Fischer式C1-OH與C5（碳）或（五碳糖-OH，同側(cè)為，側(cè)為Haworth式C1-OH與（碳吡喃糖（五碳呋喃糖）上取代基間，同側(cè)為β，異側(cè)為；與C4-OH（碳吡喃糖或六碳酮糖）同側(cè)為，側(cè)為β。（）糖的變光性如普通的葡萄糖結(jié)晶主要是型型葡萄糖結(jié)晶溶于熱的吡啶或冰醋酸后再次結(jié)晶析出時(shí)得β型葡萄糖。其在水溶液中相互轉(zhuǎn)換，達(dá)到平衡。（）的絕對(duì)型、L）以α-OH甘油醛為標(biāo)準(zhǔn)，將單糖分子的號(hào)最大的不對(duì)稱碳原子的構(gòu)型與甘油醛作比較而命名分子構(gòu)型的方法：Fischer式最后第二個(gè)碳原子-OH向右的為型向左的L型；式中C5-R向上為型，向下為L(zhǎng)型（六碳吡喃型（）-L與-D端基碳絕對(duì)構(gòu)型一致-D與β-L端碳絕對(duì)構(gòu)型一致。XylRhaGlc

H

C

OHCH2D-葡糖O

CH2D型α-OH甘油醛

CH3L-鼠糖Oβ-D-萄糖六碳醛糖和甲基五碳糖

α-L-鼠李糖

CH

2411424114CHO

O

CHOHO

O

R

R'

O

OHCH2

CHOH

OHOHD-木（，五碳糖）果（，碳酮糖）半乳糖（）（）糖的立構(gòu)象椅式與船式——為椅式4

5

O

1

5

O

12

4

33

2C1式

1C式C1：C，Normalform；1C：，AformAngyal用自由能來(lái)分析構(gòu)象式的穩(wěn)定性，比較二種構(gòu)象式的總自由能差值。差值大.7kcal/mol時(shí)能量低的是優(yōu)勢(shì)構(gòu)象；小于時(shí)，處于平衡狀態(tài)。含鍵多的構(gòu)象即為優(yōu)勢(shì)構(gòu)象。如Glc優(yōu)構(gòu)象為，鼠李糖為。橫鍵（平伏鍵，equatorial般排斥較小，能量較低。豎鍵（直立鍵，般量相對(duì)高。6、類（糖勻體由組成的物質(zhì)，如單糖、低聚糖、多糖等。（）糖類（monosaccharide）常見單糖（部分見前）

β2CHOβ2

O

CHO

O

O

CHOH2

CHOH2

CHOH2O

O

R1

-OH

O

R1

-OH

R2

R2

CHOH2

當(dāng)構(gòu)成二或糖時(shí)

當(dāng)游離

O

α

O

ββOαOOHCH2L-阿伯糖D-木

αβα木糖（萄糖Glc糖（Fru李露糖Man糖Rib乳（Gal拉糖（中甘露糖與葡萄糖在C2差異構(gòu)，半乳糖與葡萄糖在C4差向異構(gòu)；山梨糖與果糖在C5差向異構(gòu)；阿拉伯糖與木糖在C4位差向異構(gòu)。氨基糖（amino）單糖的伯或仲醇基置換成氨基的糖類。天然氨基糖大多為2-氨基2-去氧醛葡糖胺存于動(dòng)物和微生物中基糖苷類抗生素如慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素等中含有氨基糖，糖部分對(duì)其藥理作用具有明顯的影響。糖醇（）單糖的醛基或酮基還原成羥基后所得的多元醇。如山梨醇、木醇。去氧糖（）單糖分子的一個(gè)或二個(gè)羥基為氫原子代替的糖。糖醛酸（-uronicacid）單糖分子中伯醇基氧化成羧基的化合物。如葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸。（）聚糖類oligosaccharides2~9個(gè)糖基通過苷鍵合而成的直鏈或支糖的聚糖。分類*按含有單糖的個(gè)數(shù)分類：二糖、三糖、四糖等*按是否含有游離醛基或酮基分類：還原糖（如麥芽糖原糖（如蔗糖）命名以末端糖（含游離端基碳）作為母體，除末端糖之外的糖作為糖基，并標(biāo)明糖與糖的連接位置成環(huán)形式和苷鍵構(gòu)型等。雙表方（）母結(jié)碳O-α/β-D/L-糖D/L-母（b）/β糖-(碳位母體位)-D/L-母體三以采方（b且糖用寫p表示喃，表示喃。

環(huán)糊精（cyclodextrin由Bacillusmacerans等菌產(chǎn)生的一種淀粉酶（cyclomaltodextringlucano-transferase）作用下，淀分解可生成一種由6~8個(gè)萄糖以-1,4環(huán)結(jié)合的結(jié)晶低聚物，稱為Schardinger糊。包括環(huán)糊精（六糖環(huán)糊精（七糖，產(chǎn)量最大環(huán)精（八糖具良好水溶性，內(nèi)側(cè)則具有疏水性，常用作藥物包合劑等。（）聚糖類，）由十個(gè)以上的單糖通過苷鍵連接而成的聚糖。生物體內(nèi)的功能*動(dòng)植物的支持組織：纖維素、甲殼素等*動(dòng)植物的貯存養(yǎng)料：淀粉、肝糖元等類型均多糖、雜多糖、復(fù)雜多糖常見多糖植物多糖：淀粉（直支鏈，14，分支1→維（4聚、樹膠、粘液質(zhì)、粘膠質(zhì)等動(dòng)物多糖：糖原（與淀粉類似，聚合度大、分支度高素（4素硫酸軟骨素透明質(zhì)酸等7、類（配糖體糖體Glycosides）糖與非糖（苷元）通過糖的端基碳原子連接而成的化合物，。（）類按苷原子不同分氧苷、氮苷、硫苷、碳苷等。按苷元不同分類如黃酮苷、蒽醌苷、香豆素、強(qiáng)心苷、皂苷等按苷鍵不同分類醇苷：是通過醇羥基與糖端基羥基脫水而成的苷。酚苷：是通過酚羥基與糖端基羥基脫水而成的苷。酯苷（酰苷元和的端基相連接而成的苷。氰苷：主要是指一類α羥的苷，如苦仁苷。按端基碳構(gòu)型分α苷多為L(zhǎng)型如鼠李糖苷β苷多為型如葡萄糖苷按連接單糖個(gè)數(shù)1個(gè)——單糖苷2個(gè)——雙糖苷3個(gè)——叁糖苷按糖鏈個(gè)數(shù)分1個(gè)置成苷——糖鏈苷2個(gè)置成苷——雙糖鏈苷按生物體內(nèi)存在式分原級(jí)苷（原生苷）——在植物體內(nèi)原存在的苷。次級(jí)苷（次生苷）——原級(jí)苷水掉一個(gè)糖或（苷元）結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。（）植物苷重特植物糖苷中最常的組成單糖是葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖和半乳糖。植物糖苷中的糖鍵均為1,2-反糖苷鍵，強(qiáng)心苷中2-氧糖糖苷鍵例外。皂苷的糖鏈最為雜和多樣，一個(gè)分子中可以帶有三條糖鏈，糖鏈可以是四糖、五糖或更長(zhǎng)的寡糖；其次是黃酮苷（包括花青素苷中三和四糖也較常出現(xiàn)。

22-+其他植物糖苷中糖鏈較為簡(jiǎn)單，如其他萜類（包括單萜、倍半萜、二萜、胡蘿卜素等硫苷）和氰苷等，有許多只含有一個(gè)單糖，且往往是葡萄糖。22-+對(duì)于芳香類化合，如黃酮、香豆素類和蒽醌等，既存在糖與酚羥基相連糖苷，又存在糖苯環(huán)碳相連的C-糖。植物糖苷的糖鏈時(shí)被一些酰基所修飾（復(fù)雜多糖植物糖苷是種屬異性的，因而可作為植物分類的參考。植物糖苷的糖鏈苷元特異性的，反映了植物體內(nèi)糖基轉(zhuǎn)移酶對(duì)苷元的選擇性。一個(gè)植物糖苷可存在于許多植物。10.一種植物往往含有一系列的同種類型的糖苷，在結(jié)構(gòu)上僅有微小差別。（）理性質(zhì)溶解性糖——小分子極性大，水溶性好；聚合度增高，水溶性下降。多糖難溶于冷水，或溶于熱水成體溶液。苷——親水性（與連接糖的數(shù)目、位置有關(guān)）苷元——親脂性味覺單糖、低聚糖——甜味。多糖——無(wú)甜味（隨著糖的聚合度增高，甜味減?。┸疹悺?、甜等旋光性具有多個(gè)不對(duì)稱碳原子（故具有旋光性苷類呈左旋。利用旋光性→測(cè)苷鍵構(gòu)型（β苷Klyne法：將苷和苷元的分子旋光差與組成該苷的糖的一對(duì)甲苷的分子旋光度進(jìn)行比較，數(shù)值上相接近的個(gè)便是與之有相同苷鍵的一個(gè)。（）學(xué)性質(zhì)單糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)中所含活性基團(tuán)：醛（酮）基、伯醇基、仲醇基、鄰二醇基。1.氧反單糖分子中醛（酮醇仲和鄰二醇等結(jié)構(gòu)，氧化條件不同其產(chǎn)物也不同。如：COOH

CHO

COOHBr/O2

稀HNO3CHOH

CHOH（溴水可區(qū)分醛糖與酮糖）

COOH化反的潑：基原伯碳>仲碳過酸應(yīng)—糖苷類和多元醇的結(jié)構(gòu)研究（氧環(huán)大小、連接位置、羥基數(shù)目等）主要作用于二醇α-氨基醇α羥基（基酸鄰?fù)湍承┗钚源渭谆冉Y(jié)構(gòu)。（反應(yīng)中形成五元環(huán)結(jié)構(gòu)）

R'

R-CHOR'-CHOOHOH

------HC

HC

HC

2IO

R'-CHO

HCOOHOHHRCR'

IO

R'COOH

IO

R-CHO

+

R'-CHO

+

NH32R

CO

IO

RCOOH

+

R'COOH

CO過酸應(yīng)有二或應(yīng)構(gòu)無(wú)不應(yīng)；有氧碳成有基有酸成有三結(jié)；有生必氨；有酸成有基反特：①反定量進(jìn)行（試劑與反應(yīng)物基本是1:1②在溶液中進(jìn)行或有水溶液（否則不反應(yīng)③反速度：順式>反式（因順式易形成環(huán)式中間體④游單糖物消耗過碘酸Fischer式算苷物及消耗過碘酸用Haworth式算。⑤在邊而無(wú)扭轉(zhuǎn)余地的鄰二醇不起反應(yīng)。用：過測(cè)定HIO的消耗量以及最終的降解產(chǎn)物4①推糖中鄰二羥基多少（如游離單糖1鄰羥基結(jié)構(gòu)消耗1HIO4②同分子式的糖，推測(cè)是吡喃糖還是呋喃糖；③推低聚糖和多聚糖的聚合度；④推1,3連還是1,4連（糖與糖連接的位置2.糠形反單糖在濃酸加熱作用下，脫水生成呋喃環(huán)結(jié)構(gòu)的糠醛衍生物?？费芪?

芳或酚類

縮合

顯色（酚、、、蒽等糖顯色反應(yīng)：*Molish試：濃酚24*鄰苯二甲酸＋苯胺（色譜顯色）多糖等在濃酸作用下先水解在發(fā)生反應(yīng)。

3.羥反糖的-OH反——醚化、酯化和縮醛（酮）化、與硼酸的絡(luò)合反應(yīng)反應(yīng)活性：半縮醛羥基（）伯基（）C2-仲醇基其仲醇基（伯醇因其處于末端，在空間上對(duì)反應(yīng)有利，因此活性高于仲醇*環(huán)狀結(jié)構(gòu)中：橫鍵羥基＞豎羥基（橫鍵位阻有利）①甲化*判斷反應(yīng)是否完全的方法：甲基化物可用紅外光譜測(cè)試，到-OH吸收峰為止。*制備成甲苷：用限量試劑，即克分子比1:1時(shí)，可得甲苷。如Haworth（酸二甲酯不常用法Hakomori（守法樣品+DMSOMeI→全甲化，反應(yīng)在非水溶劑即二甲基亞砜溶液中進(jìn)行，反應(yīng)一次即可）②三甲醚化（可逆，可用于保護(hù)羥基）③三硅醚化（可用于增大糖類揮發(fā)性，利于色譜分析）④酰反應(yīng)（酯化反應(yīng)）羥基活性與甲基化反應(yīng)相同。利用酰化可判斷糖上OH數(shù)、保護(hù)，分離、鑒定和糖化學(xué)成等研究中經(jīng)常使用。⑤縮和縮醛化反應(yīng)（保護(hù)游離羥基）酮或醛在脫水劑如礦酸、無(wú)水、水CuSO等存在下，易與多元醇的二個(gè)有適當(dāng)空間位置的羥基形成環(huán)狀縮24酮（）或縮醛（酮類易與順鄰二OH生五元環(huán)狀物；醛類易與1,3-雙OH生六元環(huán)狀物。如：糖丙→五元縮（丙衍生）糖丙→五元縮（異叉衍物當(dāng)糖結(jié)構(gòu)中無(wú)順-OH時(shí)則易轉(zhuǎn)變?yōu)檫秽墙Y(jié)構(gòu)，再生成五元環(huán)狀物（異丙叉衍生物）糖苯醛→六元狀醛苯叉生）4.硼絡(luò)反糖的鄰二羥基可與許多試劑生成絡(luò)合物，借生成絡(luò)合物的某些物理常數(shù)的改變，可有助于糖的離、鑒定和構(gòu)型推定。如硼酸絡(luò)合物、鉬酸絡(luò)合物、銅氨離子絡(luò)合物等，可用于離子交換、電泳等。糖+（酸→絡(luò)物（酸性增加、可離子化）33與溶液pH合物比例與結(jié)構(gòu)等有關(guān)反要開環(huán)化合物：碳鏈上OH越，越易造成有利地位（順鄰-OH環(huán)上的二羥基：芳環(huán)—鄰位易，間、對(duì)位次之；

五元、六元脂環(huán)——順式鄰二-OH易絡(luò)合，反式鄰-OH不用。α-羥（絡(luò)；-羥酸（作用。糖和苷類化合物絡(luò)合能力：呋喃糖苷＞單糖＞吡喃糖苷＞五碳醛糖＞六碳醛糖。8、鍵的水解研究苷類的化學(xué)結(jié)構(gòu)，必須了解苷元結(jié)構(gòu)、糖的組成、糖和糖的連接方式以及苷元和糖的連接式、苷鍵的構(gòu)型等。為此必先使用某種方法使苷鍵切斷，按程度分為全裂解和部分裂解，常用方法有：酸催化水反應(yīng)、酸催化甲醇解反應(yīng)、乙酰解反應(yīng)、堿催化水解和β消反應(yīng)、酶催化水解反應(yīng)、氧化開裂法Smith降解法（）催化水反應(yīng)苷鍵屬于縮醛結(jié)構(gòu)，易為稀酸催化水解。其機(jī)理是苷原子先質(zhì)子化，然后斷鍵生成陽(yáng)碳離子或椅型的中間體，在水中溶劑化而成糖。酸水解難易受到苷原子的電子云密度和空間位阻等的影響，其規(guī)律如下：苷原子酸水解由易到難苷苷>苷苷處酰胺或嘧啶位置時(shí)苷難以進(jìn)行酸水解糖基呋喃糖苷較吡喃糖苷易水解（位阻與張力）酮糖較醛糖易水解（空間位阻）吡喃糖苷中喃C5上代基越大越難水解解速度為碳>甲五碳>六糖七糖糖空間位阻）C5上有COOH代時(shí)，最難水解（因誘導(dǎo)使苷原子電子密度降低）各類取代糖水解速度為：二去氧糖2-去氧糖去氧糖羥基糖氨糖（影響電子云度）苷元芳香屬苷較脂肪屬苷易水解，如酚苷萜苷、甾苷（因芳香苷元部分有供電結(jié)構(gòu)，而脂肪屬苷元無(wú)苷元為小基團(tuán)時(shí)，苷鍵橫鍵比豎鍵易水解（橫鍵易質(zhì)子化為基團(tuán)時(shí)，苷鍵豎鍵比橫鍵易水解（苷的不穩(wěn)定性促使其易水解雙相水解反應(yīng)：苷元對(duì)酸不穩(wěn)定的苷進(jìn)行酸水解時(shí)，在酸水解反應(yīng)液中加入與水不相混溶的有溶劑，使水解后游離出來(lái)的苷元立即轉(zhuǎn)溶于有機(jī)相中免元與酸長(zhǎng)時(shí)間接觸而產(chǎn)生結(jié)構(gòu)變化生成次生苷元。酸水解反應(yīng)的產(chǎn)物為游離糖，故不能確定糖在苷中的氧環(huán)大小。（）催化甲解反應(yīng)在酸的甲醇液中進(jìn)行甲醇解，可生成一對(duì)保持原氧環(huán)大小的甲基糖苷異構(gòu)體?？捎糜谂袛嘬罩械难醐h(huán)大小。（）酰解反Acetolysis）常用試劑：醋酐+酸、、或Lewis酸ZnCl、等2433乙酰解反應(yīng)與酸催化水解相似，以CH為進(jìn)攻基團(tuán)。反應(yīng)條件較溫和，一般是在室溫放置數(shù)天可開裂部分苷3鍵，易發(fā)生糖的端基異構(gòu)化。反應(yīng)產(chǎn)物為單糖、低聚糖、苷元的乙?；苌?。苷鍵鄰位有電負(fù)強(qiáng)的基團(tuán)（如環(huán)氧基、酰基）可使反應(yīng)變慢。-苷葡萄糖雙糖的反應(yīng)速度6>>4）（→）（→）可用于決定糖與糖之間的連接位置，并增加了反應(yīng)產(chǎn)物的脂溶性，還可保護(hù)苷元上，有利于提取、精制和鑒定等。（）催化水和消除反一般苷鍵對(duì)稀堿穩(wěn)定，但某些特殊的苷如酯苷、酚苷、與羰基共軛的烯醇苷等易為堿水解，其與C2-OH處于反式時(shí)較順式易水解（鄰基參與式：水解產(chǎn)物為葡糖酐；順式：水解產(chǎn)為正常的糖?？衫盟猱a(chǎn)

-物判斷苷鍵構(gòu)型。-消除應(yīng)的β位吸電子基團(tuán)者α活堿液中與苷鍵起消除應(yīng)而開裂。在1→或14連接的聚糖中，還原端的游離醛（或酮）的鄰位氫活化而與3-O-或苷鍵起消除反應(yīng)。這樣堿能使多糖還原端的單糖逐個(gè)被剝落，對(duì)非還原端則無(wú)影響?？蓮亩嗵莿兟浞磻?yīng)生成的糖酸了解還原糖的取代方式：代糖可形成—脫氧糖酸代糖可形成—脫氧羥基糖酸二個(gè)以上取代的還原糖——難生成糖酸（）催化水反應(yīng)酶催化反應(yīng)具有專屬性高，條件溫和的特點(diǎn)?？捎糜讷@知苷鍵的構(gòu)型，可獲得保持苷元結(jié)構(gòu)不變的真正苷元，還可以保留部分苷鍵得到次級(jí)或低聚糖，以便獲知苷元和糖、糖和糖之間連接方式。常用的酶：杏仁苷酶（emulsin）—-碳醛糖苷鍵纖維素酶（）—葡糖鍵麥芽糖酶（）—α-D-萄糖苷鍵蝸牛酶——苷鍵轉(zhuǎn)化糖酶（）—β果苷鍵pH可響酶水解反應(yīng)，一般適宜pH為4~6。在未損傷的植物組織中苷和水解酶是分隔存在的，提取分離時(shí)應(yīng)注意酶解。（）化開裂（過碘酸裂解反Smith降解法）試劑：過碘酸（氫鈉酸44O

OR

IO

OHC

OOHC

OR

-4

OHOHCHOH

OR

OH2

2

2

此法不適用于苷元上也有二結(jié)構(gòu)的苷類。優(yōu)點(diǎn)：①反應(yīng)件溫和，可得到原苷元；②對(duì)元結(jié)構(gòu)容易改變的苷以及苷水解特別適C苷Smith裂解，獲得的是連有一個(gè)醛基的苷元R-CHO從降解產(chǎn)物，可推測(cè)糖的種類、糖與糖的連接方式、氧環(huán)的大小等。如1,2-苷Smith降得到甘油X21,3-苷反應(yīng)1,4-苷到乙二+蘚醇1,6-苷到酸甘+乙醇。9、與糖苷的提取分離（）用提取法主要為溶劑提取法：水、稀醇（單糖、低聚糖、多糖糖類的提取可根據(jù)它們對(duì)乙醇和水的溶解度不同，而采用冷熱水、冷熱稀醇等條件（多水提醇苷類分子的極性隨著糖基的增多而增大，可根據(jù)其極性大小，來(lái)選擇相適應(yīng)的溶劑。（）取注意項(xiàng)新鮮材料中水解酶對(duì)糖及苷類的水解作用溶的酸堿性而引起的糖及苷類的水解。破壞或抑制植物體內(nèi)酶的方法：直接用沸水、甲醇或乙醇進(jìn)行提??；藥材中加入一定量的碳酸鈣拌和后再用沸水提取；

2新鮮材料采集后迅速加熱干燥或凍干處理后再提取。2（）的分離活性炭柱色譜、纖維素色譜、離子交換柱色譜、凝膠柱色譜、季氫氧化物沉淀法、分級(jí)沉淀或分級(jí)溶解法、蛋白質(zhì)除去法。（）性炭柱譜用途：分離水溶性物質(zhì)較好，如氨基酸、糖類及某些苷類。特點(diǎn)：上樣量大，分離效果較好，適合大量制備；適用范圍廣（不同聚合度的低聚糖之間的分，相同聚合度的不同寡糖之間的分離，混合糖、糖酸、糖醇、糖的乙酸酯、氨基低聚糖、糖的甲基醚的分離易，價(jià)廉；無(wú)測(cè)定其吸附力級(jí)別的理想方法。分類：粉末狀活性炭、顆粒狀活性炭、錦活性炭。吸附規(guī)律：對(duì)分子量大的化合物吸附力大于分子量小的化合物，即多單糖活性炭在水溶液中的吸附力最強(qiáng)，在有機(jī)溶劑中吸附力較弱。按、、20%、、、乙液梯度洗脫順序：無(wú)機(jī)鹽、單糖等→二糖→三糖寡聚糖預(yù)處理：目的——除去混雜的金屬離子，使活力增強(qiáng)。一般預(yù)處理加熱除去大多數(shù)被吸附的氣體（）維素色（多糖的分離）原理：吸附層析、分配層析。溶劑系統(tǒng)：水和不同濃度的乙醇水溶液、丙酮、水飽和的正丁醇等流出順序：水溶性大的先流出，水溶性差的后出柱。（）子交換色譜離子交換劑對(duì)多糖的吸附力與多糖結(jié)構(gòu)有關(guān)：酸性基團(tuán)越多、線型分子分子量越大、分支越少吸附力越大。應(yīng)用：除水提液中的酸、堿性成分和無(wú)機(jī)離子；酸性、中性、粘多糖的分離酸多糖用相同pH不同離子強(qiáng)度的緩沖液洗脫，分離中性多糖用不同濃度硼酸溶液洗脫）常用離子交換樹脂①離交換纖維素樹脂陽(yáng)離子型：，P-Cellulose，SE-Cellulose等陰離子型：ECTEOLA-Cellulose等②硼處理的強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂（）膠柱色可將多糖按照分子大小和形狀的不同分離開，但不適于粘多糖分離。常用商品名稱及型號(hào)：葡聚糖凝膠脂凝膠Sepharose，Bio-GelA丙酰胺凝膠Bio-GelP丙交聯(lián)葡聚糖凝膠Sephadex親脂性，可在有機(jī)溶劑中進(jìn)行分離的分子篩Sephadex外均在HO中進(jìn)行，且吸水越多孔徑越大。洗脫溶劑的選擇：分離中性物質(zhì)——水及電解質(zhì)溶液（酸、堿、鹽溶液及緩沖液，離子強(qiáng)度）阻滯較大的組分——+有溶液（水甲醇、-乙、水丙等）（）銨氫氧物沉淀法季銨氫氧化物是一類乳化劑，常用于酸性多糖的分離。pH9時(shí)可與酸性多糖形成沉淀調(diào)pH或硼砂緩沖液也使中性糖沉淀利用其在酸性中微性、堿性中的分級(jí)沉淀可分離多糖。（）級(jí)沉淀分級(jí)溶解法在糖的水溶液中，逐步加入乙醇，即逐漸增大醇濃度，可得到各部分的沉淀物。適于分離溶解相差較大的多糖。

為使多糖穩(wěn)定多糖通常在pH=7時(shí)行酸性多糖在時(shí)進(jìn)行為防酸水解苷鍵操宜迅速。（）蛋白質(zhì)除去法用分級(jí)沉淀法得到的多糖，常夾雜有較多的蛋白質(zhì)，通常選擇能使蛋白質(zhì)沉淀而使多糖不沉淀試劑來(lái)處理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。為避免多糖降解，應(yīng)注意處理時(shí)間要短，溫度要低。三氟三氯乙烷法和法用仿戊醇或丁醇5:1混）處理，在避免降解上有較好效果。、糖的鑒定（）層析（用）展開系統(tǒng)：常用水飽和的有機(jī)溶劑展開。顯色劑：鄰苯二甲酸苯、Molish試劑、硝酸銀試劑（使還原糖顯棕黑色苯氮唑鹽試劑（單糖和還原性低聚糖呈紅色二羥基甲苯鹽酸試劑（酮糖呈紅色）等。（）層層析可用（硼酸液或無(wú)機(jī)鹽）硅膠→制硼酸與無(wú)機(jī)鹽制板的特點(diǎn)：增加糖在固定相中的溶解度，使硅膠薄層吸附能力下降，利于斑點(diǎn)中，又可增加承載量。吸附劑：硅膠顯色劑：除紙層析應(yīng)用的以外，還可用/HO或乙醇液、茴香-硫酸試劑、苯胺二胺磷酸試劑等242（）相色譜將糖制備成三甲基硅醚化、乙?；蛉阴；苌?，增加其揮發(fā)性；將醛糖用NaBH還成多元醇（避免形4成端基異構(gòu)體）制成乙?；锘蛉阴；?。操作簡(jiǎn)單，分辨率高。（）相色譜填充材料：化學(xué)修飾的硅膠優(yōu)點(diǎn)：不必制備成衍生物；適合分析對(duì)熱不穩(wěn)定、不揮發(fā)的低聚糖和多糖。分析單糖和低聚糖，其靈敏度不及氣相層析。（）子交換析糖的硼酸絡(luò)合物——可進(jìn)行離子交換層析（四硼酸鉀的緩沖溶液洗脫）不必制成衍生物，而直接用水溶液進(jìn)行分離（糖自動(dòng)分析儀）、糖鏈結(jié)構(gòu)的測(cè)定主要解決的問題——單糖的組成、糖之間的連接位置和順序、苷鍵構(gòu)型（）糖的組低聚糖、多糖的結(jié)構(gòu)分析，首先要了解由哪些單糖所組成，各種單糖之間的比例如何。一般是將苷鍵全水解，用PC檢單糖的種類，經(jīng)顯色后用薄層掃描儀求得各種糖的分子比，也可用GC或HPLC對(duì)單糖定性定量。（）糖之間接位置的決定①將鏈全甲基化→水解→甲基化單糖的定性和定量GC）（甲基化單糖中游離OH的位就是連接位置）②13C-NMR測(cè)定：主要?dú)w屬各碳信號(hào)，以確定產(chǎn)生苷化位移的碳。③利，HMBC譜的遠(yuǎn)程相關(guān)關(guān)系，確定糖與糖或糖與苷元連接位置。苷位（成后，苷元的α-C、-C和的端基碳的化學(xué)位移值均會(huì)發(fā)生改變，這種改變稱為苷化位移。苷化位移值與苷元結(jié)構(gòu)有關(guān)，與糖的種類關(guān)系不大。（）鏈連接序的決定①緩水解法（部分水解糖水解成較小的片段，然后分析這些低聚糖的連接順序。②質(zhì)分析。

ooo③利，HMBC譜的遠(yuǎn)程相關(guān)關(guān)系ooo（）鍵構(gòu)型決定①分旋光差Klyne）②酶化水解方法③判糖苷鍵的相對(duì)構(gòu)型：根據(jù)端基質(zhì)子信號(hào)的個(gè)數(shù)和化學(xué)位移值，可推測(cè)糖的個(gè)數(shù)、種類、糖與糖以及糖與苷元的連接置。端基質(zhì)子—4.3～其它質(zhì)子—3.2~4.2甲基五碳糖的甲基質(zhì)子—δ1.0ppm左質(zhì)子鄰位偶合常數(shù)與雙面角有關(guān)過與C2-H的合常數(shù)可判斷苷鍵的構(gòu)型面角為90

時(shí)偶常數(shù)為0；90180

時(shí)，隨角度的增大偶合常數(shù)變大～

時(shí)，隨角度的變小偶合常數(shù)變大。a-a：；：。用可判斷一些糖苷鍵的相對(duì)構(gòu)型，但還有一些糖由于其結(jié)構(gòu)上原因，而無(wú)法判斷。④13C-NMR判斷糖苷鍵的相對(duì)構(gòu)型：端基碳的化學(xué)位移值、端基碳與端基質(zhì)子間的偶合常數(shù)：甲基碳——18左右CH2-OH——62左右CH-OH—δ左右端基碳——100左α-Lβ通常大于100，α-Dβ通常小于。此外喃糖苷中基子處于橫鍵時(shí)≈于鍵時(shí)≈。（）化位移可用于推測(cè)糖與苷元、糖與糖的連接位置；推測(cè)苷元被苷化碳的絕對(duì)構(gòu)型。苷脂鏈苷酯苷酚苷

α向低場(chǎng)移動(dòng)δ↑）向高場(chǎng)移動(dòng)δ↓）向高場(chǎng)移動(dòng)δ↓）

β-C向高場(chǎng)移動(dòng)（δ）向低場(chǎng)移動(dòng)（δ）向低場(chǎng)移動(dòng)（δ）

端碳向低場(chǎng)移動(dòng)δ↑）向高場(chǎng)移動(dòng)δ↓）向低場(chǎng)移動(dòng)δ↑）脂環(huán)苷

β位取代或代后與端基碳構(gòu)型相同時(shí)，與脂鏈苷類似；取代后構(gòu)型不同時(shí)則較復(fù)雜方

單組

氧大

連位

連順

苷構(gòu)酸催化水解法

√

√酸催化甲醇解法

√乙酰解法

√堿水解法酶水解法

√√氧化開裂法甲基化法

√

√√質(zhì)譜Klyne法NMR

√

√√

√√黃類合1、酮類化合物）基本母核為2-苯色原酮類化合物?，F(xiàn)泛指兩個(gè)具有酚羥基的苯環(huán)通過中央三碳原子連成的一系列化合物。

21'38O21'AC4-+21'38O21'AC4-+76

85

12'3'6'5'4

4'

12'7B636'2-苯色原酮

3'5'

4'

C6-C3-C6苯環(huán)上常見的取代基-OHCH，-O-CH-O-，萜類側(cè)鏈等。32多存在于高等植物及羊齒植物中，苔蘚植物中為數(shù)不多，藻類、微生物、細(xì)菌中未發(fā)現(xiàn)。對(duì)植物的生長(zhǎng)、發(fā)育、開花、結(jié)果及抵御異物的侵入起重要作用。木質(zhì)部堅(jiān)硬組織中多為游離態(tài)；植物的花、葉、果實(shí)等組織中多為苷類。2、酮類主要結(jié)構(gòu)類型根據(jù)中央三碳鏈的氧化程度B環(huán)接位置、三碳鏈?zhǔn)欠駱?gòu)成環(huán)狀等特點(diǎn)，可將主要的天然黃酮類化合物分為：黃酮和黃酮醇類、二氫黃酮和二氫黃酮醇類、雙黃酮類、異黃酮和二氫異黃酮類、查耳酮和二查耳酮類、花色素類、黃烷醇類、其他（如山酮類、生物堿型黃酮、橙酮類（）酮類化物7位多有羥基；（）氫黃酮與相應(yīng)黃酮類共存于同一植物內(nèi)；（雙黃酮類括’雙芹菜素類’雙菜素類和雙苯醚類見除松科外的的裸子植物中（）烷醇類多分子聚合成鞣質(zhì)（又稱原花青素（）烷3-醇類如兒茶素類，黃醇類又稱無(wú)色花色素類；（）酚基查耳酮酸性下可環(huán)合為氫黃酮，堿性下則開環(huán)：4'5'

3'6'

2'1'

OHO名

稱

基本結(jié)構(gòu)

+HOH名

稱

OO基本結(jié)構(gòu)黃酮黃酮類flavonols二氫酮類

OOOOO

異黃類isoflavones二氫黃酮類isoflavanones查耳類

OOOOOHflavanones

二氫酮醇類黃烷-3-醇

OOOO

OH

二氫耳酮類dihydrochalcones花色類

OOHOO

OH

anthocyanidins

黃烷3,4-二醇flavan-3,4-diols

OOH

OH

高異酮類

雙苯酮類(酮類)xanthones

OO

橙類噢類

CH3、酮苷的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

4（）成黃酮的糖類4單糖類：葡糖、半乳糖、D-木糖、鼠糖L-阿伯糖、葡糖醛酸等。雙糖類：槐糖（glc1龍膽二糖（1香糖（rha1橙皮糖（rha1刺槐二糖（α16gal）。三糖類：龍膽三糖（β→6glc12fru三糖glcβ2glc12glc）等?；穷悾阂移咸烟?、咖啡?；咸烟堑取＃ǎ┑倪B接置O-苷：與苷元的結(jié)構(gòu)類型有關(guān)，如黃酮醇類常形成3、、、位的單糖苷或、3,4’、’-的糖鏈苷。C-糖：位或8位4、物合成黃酮類的基本骨架是由桂皮酸途徑B環(huán)三碳）與AA-MA途環(huán)）生物合成的。首先合成得到查耳酮酮構(gòu)化等得到二氫黃酮及異黃酮黃再生成其他黃酮化合物。5、物活性（）心血管統(tǒng)的作用降低血管脆性及異常的通透性，如蘆丁、橙皮苷兒茶素等。擴(kuò)張冠脈，如蘆丁、槲皮素、葛根素、立可定等。降低血脂及膽固醇，如銀杏雙黃酮。降壓，如蘆丁。抑制血小板凝集及血栓形成，如槲皮素等。（）肝臟毒用水飛薊素、異水飛薊素、次水飛薊素等治療急、慢性肝炎、肝硬化及多種中毒性肝損傷。(+)-兒素：抗肝臟毒藥物，對(duì)脂肪肝及因半乳糖胺或CCl等起的中毒性肝損傷有一定效果。（）炎作用如蘆丁、二氫槲皮素等。（）性激素作用如大豆素、染料木素等異黃酮類。（）菌及抗毒作用抗菌作用：木犀草素、黃芩苷、黃芩素等?？共《咀饔茫洪纹に?、桑色素、二氫槲皮素、山柰酚等。（）下作用如營(yíng)實(shí)甙（）痙作用如異甘草素豆素可解除平滑痙攣苷根黃素等可緩解高血壓患者的頭痛等癥狀。（）他的生作用（如止咳、祛痰、平喘）6、化性質(zhì)（）態(tài)多為結(jié)晶性固體，少數(shù)如黃酮苷類為無(wú)定型粉末。（）光性游離黃酮類化合物中，二氫黃酮、二氫黃酮醇、二氫異黃酮、黃烷及黃烷醇有旋光性。苷類均具有旋光性，多為左旋體（糖苷類由于存在糖基，故均有旋光性）（）色與分子中是否存在交叉共軛體系及助色團(tuán)的類型、數(shù)目及取代位置有關(guān)。

黃酮、黃酮醇及其苷類：灰黃～黃色查耳酮類：黃～橙黃色二氫黃酮、二氫黃酮醇類：幾乎無(wú)色異黃酮類：微黃色1）或7位引入供電子基，-、等，顏色加深。32）色素及其苷類顏色隨pH不同而改變：pH<7紅色，紫，pH>8.5藍(lán)。（）解性游離的黃酮類化合物一般難溶或不溶于水溶甲醇乙醇丙酮乙酸乙酯乙醚等有機(jī)溶劑稀堿液中具有酚羥基，故溶于稀堿）各類化合物自身基本結(jié)構(gòu)的影響：黃酮、黃酮醇、查耳酮類分子平面性強(qiáng)，分子間作用強(qiáng)，溶解度小；二氫黃酮、二氫黃酮醇類異黃酮類分子非平面，分子間作用較弱，溶解度稍大；花色素類形成離子形式，故水溶性好。取代基及取代位置的影響：羥基越多水溶性越好溶性7-OH或4’其位置醚后則水溶性下降。黃酮苷水溶性增強(qiáng)，一般易溶于水、甲醇、乙醇等強(qiáng)極性溶劑，難溶或不溶于苯、氯仿等有機(jī)劑。水溶性：多糖苷單苷3-OH糖糖（）堿性酸性酸性強(qiáng)弱與酚羥基數(shù)目的多少和位置有關(guān)：堿性：弱堿性，強(qiáng)酸成鹽Yang鹽水分解。各種黃酮類化合物溶于濃硫酸后所呈顏色：黃酮、黃酮醇類：黃～橙色，并有熒光二氫黃酮類：橙（冷時(shí)）～紫紅色（加熱時(shí)）查耳酮類：橙紅～洋紅色異黃酮、二氫異黃酮類：黃色橙酮類：紅～洋紅色7、色反應(yīng)利用酚羥基和γ吡酮環(huán)的性質(zhì)（）原試驗(yàn)鹽-鎂/鋅粉反應(yīng)——鑒定黃酮類化合物1ml樣品的甲醇或乙醇液+少鎂粉/鋅（振搖幾濃鹽酸1~2分鐘內(nèi)（必要時(shí)微熱）即可顯色。黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇類：一般顯橙紅～紫紅色，少數(shù)顯紫～藍(lán)色異黃酮、查耳酮、橙酮、兒茶素類：不發(fā)生反應(yīng)花色素及部分橙酮、查耳酮在濃鹽酸的酸性下也會(huì)發(fā)生色變，應(yīng)作空白對(duì)照。b.四硼鉀反應(yīng)——二氫黃酮特征反應(yīng)0.1ml樣乙液等量NaBH甲分后濃酸或濃硫酸數(shù)滴→紅紫色4

與磷鉬酸試劑反應(yīng)——二氫黃酮特征反應(yīng)二氫黃酮醇類+磷鉬酸試劑→棕色（）金屬鹽試劑的絡(luò)合反應(yīng)多羥基絡(luò)合；金屬鹽：鋁鹽、鉛鹽、鋯鹽、鎂鹽、鍶鹽等鋁：常用于黃酮類化合物的定性、定量分析試劑：三化鋁或硝酸鋁溶現(xiàn)象：黃色絡(luò)合物（max=熒b.鉛：加1%醋酸鉛及堿式醋酸鉛水溶液可生黃～紅色沉淀生成沉淀的色澤隨分子中羥基數(shù)目及位置不同而異。中性醋酸鉛只能與鄰二酚羥基或兼有4-酮基或酮基4-酮基結(jié)構(gòu)的化合物反應(yīng)。堿式醋酸鉛則一般酚類化合物均可沉淀。可通入硫化氫復(fù)溶，目前少用。鋯鹽：0.5~1.0mg樣溶于甲+1mL二氯氧化鋯甲醇液→黃+2%枸酸甲醇液觀察顏色變化生成鋯鹽絡(luò)合物的穩(wěn)定性羥基、羰絡(luò)合物羥基、羰絡(luò)合物，后者加入枸櫞酸甲醇液顯著褪色。鋯鹽絡(luò)合物多呈黃綠色有熒光于區(qū)別黃酮類化合物分子中3-OH或5-OH的存在。d.鎂：樣品乙醇液+醋酸鎂甲醇液（加熱干燥紫燈下觀察二氫黃酮、二氫黃酮醇類：天藍(lán)色熒光（分子內(nèi)若有5-羥基，色澤更為明顯）黃酮、黃酮醇及異黃酮類：黃～橙黃～褐色氯鍶反應(yīng)樣品甲醇液1mg/ml)3滴氯鍶甲醇液+3滴蒸氣飽的甲醇液觀有無(wú)沉淀具有鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)的黃酮類化合物的特征反應(yīng)：產(chǎn)物為綠色～棕色乃至黑色沉淀f.三氯化鐵反應(yīng)（烯醇類顯色）（）酸顯色應(yīng)酸性條件下與硼酸反應(yīng)產(chǎn)生亮黃色5-羥基黃酮酚基查耳酮的征性反應(yīng)。在草酸存在下，顯黃色并有綠色熒光；在枸櫞酸丙酮存在下，只顯黃色而無(wú)熒光。（）性試劑色反應(yīng)在日光或紫外光下，通過紙斑反應(yīng)，觀察樣品用堿性試劑（氨蒸氣或水液）處理后的顏色變化23（堿性下離解或氧化影響助鑒別分子中的某些結(jié)構(gòu)特征。黃酮類：冷和熱的NaOH水液顯黃～橙紅色查耳酮和橙酮類：堿液中能很快產(chǎn)生紅或紫紅色二氫黃酮類：冷堿中呈黃～橙色，放置或加熱后呈深紅～紫紅色黃酮醇類：堿液中先呈黃色，通入空氣后變?yōu)樽厣S酮類化合物分子中有鄰二酚羥基或3,4-二基取代時(shí)，堿液中由黃色深色綠色沉淀

8、?。ǎ﹦┨崛↑S酮苷類、極性較大的苷元（羥基黃酮、雙黃酮、橙酮、查耳酮等乙乙酯、乙醇、甲、甲水1:1)等提??；多糖苷類：沸水提取花色苷類：0.1%鹽酸提取黃酮苷元：氯仿、乙醚、乙酸乙酯等提取提取過程中注意防止黃酮苷類發(fā)生水解。（）提取酸淀法常用的堿液：碳鈉、氫氧化鈉、氫氧化鈣等。稀氫氧化鈉水溶液：浸出能力大，浸出雜質(zhì)較多石灰水：含多羥基的鞣質(zhì)或含羧基的果膠、粘液等水溶性雜質(zhì)生成鈣鹽沉淀不被溶出，有利于出液的純化；浸出效果不如稀氫氧化鈉水溶液，且有些黃酮類化合物會(huì)與鈣結(jié)合成不溶性物質(zhì)注意事項(xiàng)堿液濃度不宜過高，以免加熱時(shí)破壞黃酮母核（氧化等酸化時(shí)酸性不宜過強(qiáng)，以免生成鹽以及水解。（）粉吸附主要用于苷類的精制（活性炭吸附（）孔吸附脂法可用于有效部位的富集，且吸附糖類較少，利于純化。9、離極性不同——硅膠、氧化鋁分離（極性吸附）酚羥基數(shù)目、位置不同——聚胺分離（氫鍵吸附）酸性不同——pH梯萃取分子量不同——凝膠層析特殊結(jié)構(gòu)——化學(xué)分離（）膠柱層由于可能發(fā)生不可逆吸附，不宜用于大極性物質(zhì)分離，適用于分離異黃酮、二氫黃酮、二氫黃醇及高度甲基化或乙酰化的黃酮及黃酮醇類去活化后可用于分離多羥基黃酮醇及其苷類等極性較大的化合。常用移動(dòng)相：分離黃酮苷元——氯甲混合溶劑分離黃酮苷——氯仿甲水或乙酸乙酯丙酮水乙酸乙-甲酸水（）酰胺柱析可用于分離各種類型的黃酮類化合物。層析機(jī)理：主要為氫鍵吸附各類黃酮類化合物在聚酰胺柱上的洗脫先后順序：苷元相同時(shí)：三糖苷>二糖苷單糖苷苷（含水溶劑）母核上羥基數(shù)增加，洗脫速度減慢；母核上羥基數(shù)相同時(shí)，鄰位羥基黃酮對(duì)位間)羥黃酮；分子內(nèi)芳香化程度、共軛雙鍵越多，吸附力越強(qiáng)，洗脫順序：二氫黃酮>查耳酮不同類型的黃酮類化合物洗脫順序：異黃酮>二黃酮>黃酮>黃醇各種溶劑在聚酰胺柱上的洗脫能力的強(qiáng)弱順序：水<甲醇或乙醇丙<稀NaOH水液或氨水<甲酰胺二基甲酰胺尿素水溶液聚酰胺的“雙重層析”性能：

3使用含水移動(dòng)相（甲水相析3洗脫速度：苷>苷使用有機(jī)溶劑移動(dòng)相（氯-甲醇相析洗脫速度：苷元苷（）聚糖凝柱層析常用凝膠型號(hào)：，SephadexLH-20分離機(jī)理：分離黃酮苷元時(shí)，吸附作用為主導(dǎo)，取決于游離酚羥基的數(shù)目（越多則越后洗脫）分離黃酮苷時(shí)，分子篩作用為主導(dǎo)，取決于分子量的大?。ㄔ酱髣t越先洗脫）常用洗脫劑：堿性水溶液（氨水鹽水溶及水醇及含水丙酮、甲-氯仿（常用Sephadex）（）度pH萃取法適合于酸性強(qiáng)弱不同的黃酮苷元的分離性）（）據(jù)分子某些特定官能團(tuán)進(jìn)行分離，如：硼酸絡(luò)合法——具有鄰二酚羥基的黃酮（亦可用于保護(hù)）鉛鹽沉淀法：含有鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)——用中性醋酸鉛沉淀不含鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)——用堿性醋酸鉛沉淀、含黃酮化合物中藥實(shí)例（）芩黃芩的根，為清熱解毒的常用中藥，所含黃酮類化合物：黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩等。

OCHROOO

黃芩苷R=葡萄糖醛酸）與黃素

OH

漢黃芩苷（葡糖醛酸）與黃芩素黃芩苷：黃芩的主要有效成分，有抗菌消炎作用，并能降低轉(zhuǎn)氨酶。水解后生成的黃芩素易被化轉(zhuǎn)為綠色醌類衍生物，這是保存和炮制不當(dāng)導(dǎo)致黃芩變綠的原因。（）花米花蕾，含有蘆丁、槲皮素、皂苷和多糖粘液質(zhì)等。蘆丁花的有效成分治毛細(xì)血管脆性引起的出血癥用作高血壓的輔助治療劑。OHHOOOHO

OHGlc-RhaRutinose（）皮黃酮類成分：橙皮苷，多作成甲基橙皮苷供藥用，治療冠心病。、黃酮類化合物的檢識(shí)（）色：

黃酮（醇）類——黃查耳酮——橙黃二氫黃酮（醇）——無(wú)色異黃酮——微黃（）色反應(yīng)鹽酸鎂、、、酸鉛等43（）層析、層層析法：PC—黃酮苷常用雙向色譜，黃酮醇等一般用醇性溶液，花色素類用HCl或HOAc溶液；—常用硅膠或聚酰胺等附劑，前者適于弱極性類，后者適于含游離酚羥基的黃酮及其苷類。（）譜學(xué)方、紫外可見光譜在黃酮類化合物鑒定中的應(yīng)用一般程序：①測(cè)樣品在甲醇中的紫外可見譜以了解母核類型；②在醇溶液中分別加入各種診斷試劑后，測(cè)定紫外可見光譜，以了解樣品的羥基取代情況；常用診斷試劑：甲醇鈉，醋酸鈉，醋酸/硼酸，三氯化鋁，三氯化鹽酸。（）酮類化物在甲醇溶液中的光特征主要根據(jù)帶I、的位、形狀進(jìn)結(jié)構(gòu)推測(cè)：峰帶220280要映A環(huán)代情況；峰帶～400要反映環(huán)代情況。一般為紅移，且取代越多紅移越大，如黃酮醇類帶I強(qiáng)于黃酮類帶；黃酮類存在交叉軛，帶、基本等強(qiáng)；查耳酮類則帶I強(qiáng)帶II弱異黃酮、二氫黃酮類非平面分子B環(huán)共軛弱，故帶II強(qiáng)帶I為肩峰；

B環(huán)取代可影響A環(huán)II的形狀，如4-氧取代則為單峰，而3,4’氧代則出肩峰；酚羥基等解離后增大助色效果起紅（凡共軛給電子均使增乙化后對(duì)UV的紅移影響消除；譜圖接近MeOH譜圖則無(wú)及5-OH，接近AlCl3譜則無(wú)鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)。（）入診斷劑后引起的位移1）：堿，所酚羥基均可解離，相應(yīng)吸收峰紅移。2）NaOAc：堿性較弱，僅使酸性較強(qiáng)者，如7,4’-OH解離（可鑒定其存在：帶II變則存在7-OH，變則存在’熔融處理后，堿性增強(qiáng)。3）NaOAc/HBO：33在的性存在下，酸可與分子中的鄰二酚羥基絡(luò)合，引起相應(yīng)吸收帶紅移。（帶變則環(huán)在鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)，帶變則環(huán)存在）4）AlCl，AlCl：33與鄰二羥基或鄰羥基羰形成絡(luò)物，其相對(duì)穩(wěn)定性：黃酮醇黃5-OH>二氫黃酮5-OH>鄰酚羥基二氫黃酮醇鄰二酚羥基和二氫黃酮醇3-OH在酸性條件下不與AlCl絡(luò)合，可在非酸性條件下加入AlCl絡(luò)合，再加入HCl觀察3吸變化來(lái)鑒定之。、1H-NMR在酮類結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用常用溶劑：氘代氯仿、氘代二甲基亞砜DMSO-d6代啶電云度